本發明專利技術公開了一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針及其試紙條檢測應用。該探針具有SEQIDNO.1所示序列，并可應用于制備雙酚A免疫層析金標試紙條等，該試紙條可包括襯板，襯板上至少依次粘貼有樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、具有檢測線和參考線的包被膜和吸水膜四種粘貼物，其中，所述核酸適配體探針-金標結合墊包含所述核酸適配體探針與金納米粒子的復合物。而藉由該試紙條可以通過直接觀察實現雙酚A的快速定性、定量檢測，無需其他輔助儀器設備，檢測工作可快速完成并得到準確檢測結果，具有特異性高，穩定性好，成本低廉，易于使用等特點，可應用于醫院、家庭、以及食品安全與檢驗檢疫的海關、機場、口岸等需要現場快速檢測的機構。
【技術實現步驟摘要】
特異性識別雙酚A核酸適配體探針及其試紙條檢測應用
本專利技術特別涉及一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針及在檢測雙酚A中的應用，例如，基于該核酸適配體探針的雙酚A免疫層析金標試紙條、其制備方法與應用。技術背景隨著科技的發展和對生活便利性快捷性提高的要求，塑料制品已廣泛用于生活中的各個方面。雙酚A是合成聚碳酸酯和環氧樹脂等制作塑料制品材料的重要成分，這些材料應用于制作塑料(奶)瓶、幼兒用的吸口杯、食品和飲料(奶粉)罐內側涂層。據研究表明雙酚A能夠導致內分泌失調，導致誘發性早熟，威脅著胎兒與兒童的健康，同時癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。這些不斷增長的新興產品及其使用材料對檢驗檢疫提出新的挑戰。依靠傳統儀器檢測雖然具有檢測靈敏度高，檢測結果穩定性好等優點，但是大型儀器通常價格較為昂貴，并且需要具備相關知識的專業操作人員，同時存在檢測成本高昂等缺點，限制了大型儀器的大規模檢測和現場快速檢測。基于免疫分析的酶聯免疫吸附法可以解決大型儀器的檢測成本高和不能夠用于現場檢測的缺點，但由于酶聯免疫吸附法在檢測過程中需要多步的反復洗滌和分離的過程，以及需要具有一定專業知識的人進行操作，一定程度上也限制了該方法的廣泛推廣使用。
技術實現思路
鑒于現有技術中的不足，本專利技術的一個目的在于提供一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針。本專利技術的另一目的在于提供前述核酸適配體探針在制備雙酚A檢測試劑中的應用。本專利技術的又一目的在于提供一種基于該核酸適配體探針的雙酚A免疫層析金標試紙條。本專利技術的再一目的在于提供前述雙酚A免疫層析金標試紙條的制備方法。是實現前述專利技術目的，本專利技術采用了如下技術方案: 一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針，其包含具有SEQ ID N0.1所述序列的寡核苷酸鏈。如前所述核酸適配體探針在制備雙酚A檢測試劑中的應用。一種雙酚A免疫層析金標試紙條，包含前述核酸適配體探針。進一步的，所述雙酚A免疫層析金標試紙條，包括襯板，所述襯板上至少依次粘貼有樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、具有檢測線和參考線的包被膜和吸水膜四種粘貼物，其中，所述核酸適配體探針-金標結合墊包含所述核酸適配體探針與金納米粒子的復合物。一種雙酚A免疫層析金標試紙條的制備方法，包括:取膠體金與所述核酸適配體探針于溶液中反應，形成核酸適配體探針-金納米粒子復合物，而后將所述核酸適配體探針-金納米粒子復合物施加至結合墊基體上，形成核酸適配體探針-金標結合墊； 并且，分別將雙酚A-牛血清蛋白偶聯物溶液和能與所述核酸適配體探針互補配對的核苷酸鏈溶液施加至包被膜基體上形成彼此獨立的檢測線與參考線，獲得包被膜； 以及，至少將樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、包被膜和吸水膜四種粘貼物依次粘接至襯板上，并使相鄰粘結物的相應端部相重疊，制得所述試紙條。與現有技術相比，本專利技術的有益技術效果包括: (1)提供了可特異識別雙酚A的核酸適配體探針，并且，通過將該探針與金納米粒子非特異性結合獲得核酸適配體一金納米粒子復合物探針，利用金納米粒子比表面積大這一顯著特點應用于金標試紙條的建立和相應的檢測方法，建立了可用于現場快速超靈敏檢測的膠體金標記試紙條和相關的檢測方法，通過肉眼直接觀察實現雙酚A的快速定性檢測和通過檢測條帶上顯色程度的升高對雙酚A進行定量檢測，無需其他輔助儀器設備，檢測工作可在10-15min內完成并得到檢測結果； (2)本專利技術提供了一種通用型檢測方法，例如，只需要將與金納米粒子非特異性結合的核酸適配體探針的序列進行相應的改變和替換，即可實現其他目標物的快速、現場檢測； (3)本專利技術具有特異性高，穩定性好，應用范圍廣，成本低廉，操作使用方法簡單易于推廣應用。可應用于醫院、家庭、以及食品安全與檢驗檢疫的海關、機場、口岸等需要現場快速檢測的機構。【附圖說明】圖1是本專利技術實施例1中一種雙酚A免疫層析金標試紙條的結構示意圖； 圖2a-圖2d是本專利技術實施例1中一種雙酚A免疫層析金標試紙條的檢測結果示意圖。【具體實施方式】本專利技術是針對現有技術中，大型儀器檢測方法不能夠實現現場、高通量、快速檢測的缺點而提出的。進一步的講，本專利技術的一個方面提供了一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針，其包含具有SEQ ID N0.1所述序列的寡核苷酸鏈。本專利技術的一個方面還提供了所述核酸適配體探針在制備雙酚A檢測試劑中的應用。例如，通過將核酸適配體探針與金納米粒子復合，形成核酸適配體探針-金納米粒子復合探針，并將其應用于食品包裝材料以及水資源污染中雙酚A的快速、現場、超靈敏檢測。本專利技術的一個方面還提供了 一種一種雙酚A免疫層析金標試紙條，其包含所述的核酸適配體探針。進一步的，所述的雙酚A免疫層析金標試紙條，其特征在于包括襯板，所述襯板上至少依次粘貼有樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、具有檢測線和參考線的包被膜和吸水膜四種粘貼物，其中，所述核酸適配體探針-金標結合墊包含所述核酸適配體探針與金納米粒子的復合物。優選的，相鄰粘貼物之間重疊部分的長度在2 mm以上，優選為2mm。優選的，所述金納米粒子的粒徑為25?40nm。本專利技術一個方面還提供了一種雙酚A免疫層析金標試紙條的制備方法，其包括: 取膠體金與所述核酸適配體探針于溶液中反應，形成核酸適配體探針-金納米粒子復合物，而后將所述核酸適配體探針-金納米粒子復合物施加至結合墊基體上，形成核酸適配體探針-金標結合墊； 并且，分別將雙酚A-牛血清蛋白偶聯物溶液和能與所述核酸適配體探針互補配對的核苷酸鏈溶液施加至包被膜基體上形成彼此獨立的檢測線與參考線，獲得包被膜； 以及，至少將樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、包被膜和吸水膜四種粘貼物依次粘接至襯板上，并使相鄰粘結物的相應端部相重疊，制得所述試紙條。作為較為優選的實施方案之一，該制備方法可以包括如下步驟: (1)選取粒徑為25?40nm的膠體金溶液與所述核酸適配體探針的溶液混合，室溫下反應Ih以上，獲得核酸適配體探針-金納米粒子復合物溶液； (2)將所述核酸適配體探針-金納米粒子復合物溶液噴涂到結合墊基體上，形成核酸適配體探針-金標結合墊； (3)具有檢測線和參照線的硝酸纖維膜的制備 分別將雙酚A-牛血清蛋白偶聯物溶液和能與所述核酸適配體探針互補配對的核苷酸鏈溶液施加至包被膜基體上，形成相互平行的檢測線和參照線； (4)將樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、包被膜和吸水膜四種粘貼物依次粘接至襯板上，并使相鄰粘結物的相應端部相重疊，制得所述試紙條。作為較為典型的實施案例之一，該方法可以包括如下步驟: (1)選取膠體金溶液與含所述核酸適配體探針、醋酸和TCEP的溶液混合，并在室溫下震蕩30 min以上，而后依次加入dATP和NaCl，室溫反應30min以上，再冷卻、離心重懸，獲得核酸適配體探針-金納米粒子復合物溶液； (2)將所述核酸適配體探針-金納米粒子復合物溶液噴涂到結合墊基體上，形成核酸適配體探針-金標結合墊； (3)分別將濃度為lmg/mL的雙酚A-牛血清蛋白偶聯物溶液和濃度為lmg/mL的能與所述核酸適配體探針互補配對的核苷酸鏈溶液施加至包被膜基體上，形成相互平行的檢測線和參照線； (4)將樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、包被膜和吸水膜四本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針，其特征在于所述探針包含具有SEQ?ID?NO.?1所述序列的寡核苷酸鏈。
【技術特征摘要】
1.一種特異性識別雙酚A核酸適配體探針，其特征在于所述探針包含具有SEQ ID N0.1所述序列的寡核苷酸鏈。2.權利要求1所述核酸適配體探針在制備雙酚A檢測試劑中的應用。3.—種雙酚A免疫層析金標試紙條，其特征在于包含權利要求1所述的核酸適配體探針。4.根據權利要求3所述的雙酚A免疫層析金標試紙條，其特征在于包括襯板，所述襯板上至少依次粘貼有樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、具有檢測線和參考線的包被膜和吸水膜四種粘貼物，其中，所述核酸適配體探針-金標結合墊包含所述核酸適配體探針與金納米粒子的復合物。5.根據權利要求4所述的雙酚A免疫層析金標試紙條，其特征在于相鄰粘貼物之間重疊部分的長度為2 mm。6.根據權利要求4所述的雙酚A免疫層析金標試紙條，其特征在于所述金納米粒子的粒徑為25~40nm。7.—種雙酚A免疫層析金標試紙條的制備方法，其特征在于包括: 取膠體金與權利要求1所述核酸適配體探針于溶液中反應，形成核酸適配體探針-金納米粒子復合物，而后將所述核酸適配體探針-金納米粒子復合物施加至結合墊基體上，形成核酸適配體探針-金標結合墊； 并且，分別將雙酚A-牛血清蛋白偶聯物溶液和能與所述核酸適配體探針互補配對的核苷酸鏈溶液施加至包被膜基體上形成彼此獨立的檢測線與參考線，獲得包被膜； 以及，至少將樣品膜、核酸適配體探針-金標結合墊、包被膜和吸水膜四種粘貼物依次粘接至襯板上，并使相鄰粘結物的相應端部相重疊，制得所述試紙條。8.根據權利要求7所述的雙酚A免疫層析金標試紙條的制備方法，其特征在于包括如下步驟: (1)選取粒徑為25~40nm的膠體金溶液與所述核酸適配體探針的溶液混合...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鐘友好，陳偉，趙弟萍，薛峰，姚麗，
申請(專利權)人：合肥工業大學，
類型：發明
國別省市：安徽;34
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