本發(fā)明專利技術(shù)涉及蕨類植物綠色球狀體60Co?r射線輻射誘變方法，屬于植物培養(yǎng)方法技術(shù)領(lǐng)域。在離體培養(yǎng)條件下，以蕨類植物無菌苗誘導產(chǎn)生的綠色球狀體為材料，60Co?r射線為輻射源。輻射處理的綠色球狀體轉(zhuǎn)到附加吲哚丁酸IBA0.2mg/L的成苗培養(yǎng)基上萌發(fā)，形成具有根、莖、葉的完整小植株。60Co?r射線劑量率為1Gy/min，輻照劑量為80Gy，扇蕨的綠色球狀體成苗率為38%，鳳尾蕨的綠色球狀體成苗率為26%。本發(fā)明專利技術(shù)建立的蕨類植物綠色球狀體60Co?r射線輻射誘變方法，為在器官水平上開展蕨類植物輻射誘變育種提供新技術(shù)，適用于蕨類植物新品種選育。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
蕨類植物綠色球狀體60Co r射線輻射誘變方法
本專利技術(shù)蕨類植物綠色球狀體6tlCor射線輻射誘變方法，涉及一種適用于植物組織培養(yǎng)和6tlCor射線輻射誘變技術(shù)，屬于植物培養(yǎng)方法
。
技術(shù)介紹
蕨類植物也稱羊齒植物，起源于古生代志留紀和泥盆紀的裸蕨。蕨類植物的分類地位介于苔蘚植物和種子植物之間，目前全世界約有12000多種，主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)，中國有2600多種(秦仁昌，1959，中國植物志(第二卷).北京:科學出版社)。蕨類植物的繁殖方式分為有性繁殖(孢子繁殖)、無性繁殖(營養(yǎng)繁殖)和組織培養(yǎng)，育種方法為引種馴化(韓敬，趙莉.蕨類植物繁殖研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2005，33 (7):1261~1263)。輻射誘變已成為觀賞植物品種培育和改良中一種非常重要的方法和手段。據(jù)Ahloowalia等報道，全世界在營養(yǎng)繁殖植物中已培育出465個突變品種，其中大部分是觀賞植物。通過輻射育種，我國近年來從菊花、月季、美人蕉、小蒼蘭、水仙、梅花、香石竹、豆瓣綠、花葉芋、百合、蝴蝶蘭、唐菖蒲等中獲得一些優(yōu)良的突變品種(馬爽，李文建，周利斌，等.觀賞植物誘變育種的研究現(xiàn)狀和展望[J].核農(nóng)學報，2007，21 (4):378~382)。觀賞植物輻照處理材料， 包括球莖、鱗莖、插條、種子、叢芽、原球莖、植株、盆栽苗等，經(jīng)組織培養(yǎng)產(chǎn)生的愈傷組織、胚狀體、組培苗也可用于輻射處理(王丹，任少雄，蘇軍，等.核技術(shù)在觀賞植物誘變育種上的應用[J].核農(nóng)學報，2004，18(6):443~447)。在蕨類植物上利用外植體誘導出綠色球狀體(greenglobularbodies,簡稱GGB),類似于蘭花的原球莖，綠色球狀體經(jīng)過培養(yǎng)獲得完整的幼小植物個體(陸樹剛，張光飛，蘇文華，等.蕨類植物學[M].北京:高等教育出版社，2007:33~37)。蕨類植物綠色球狀體尚未見用于輻射誘變的相關(guān)報道。有關(guān)原球莖6tlCo Y射線半致死量的報道，蝴蝶蘭原球莖的半致死量分別為150Gy劑量(孫振雷主編.觀賞植物育種學[M].北京:民族出版社，1999，12:118~127)和50~68Gy(張相鋒，任艷麗，尚天翠，等.6tlCo Y射線輻照對蝴蝶蘭原球莖生長的影響[J].北方園藝，2009(3):177 ~180)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
技術(shù)問題本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題和提出的技術(shù)任務是:以蕨類植物離體培養(yǎng)誘導產(chǎn)生的綠色球狀體為材料，以6tlCor射線為輻射源，研究不同劑量的6tlCor射線對綠色球狀體成苗的影響，應用組織培養(yǎng)和輻射誘變相結(jié)合的方法獲得突變體，建立蕨類植物綠色球狀體6tlCor射線輻射誘變育種技術(shù)。技術(shù)方案蕨類植物綠色球狀體6°Cor射線輻射誘變方法，包括:I)材料以蕨類植物無菌苗誘導產(chǎn)生的綠色球狀體為輻射處理材料，6tlCor射線為輻射源；2)培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基由MS大量元素、MS微量元素與B5維生素組成，添加蔗糖30g/L ；綠色球狀體誘導和增殖培養(yǎng)基:附加6-芐基氨基嘌呤0.5mg/L和吲哚丁酸IBA0.lmg/L；綠色球狀體成苗培養(yǎng)基:附加吲哚丁酸IBA0.2mg/L，活性炭質(zhì)量比0.1% ;上述培養(yǎng)基在高壓滅菌前用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)整pH值至5.8 ;3)方法將I)蕨類植物無菌苗接種到2)誘導培養(yǎng)基上，在無菌苗基部誘導產(chǎn)生綠色球狀體；綠色球狀體在2)增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)后進行輻射處理，6tlCor射線的輻照劑量是80Gy或100~120Gy ;經(jīng)過輻射誘變處理的綠色球狀體轉(zhuǎn)移到2)成苗培養(yǎng)基上，在光照條件下培養(yǎng)，30d左右萌發(fā)產(chǎn)生綠芽；綠芽轉(zhuǎn)移到2)新鮮的成苗培養(yǎng)基上，30d左右形成具有根、莖、葉的完整小植株；離體培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為26±2°C，光照強度為15001x，光照時間為12h/d。綠色球狀體增殖和成苗培養(yǎng)均在光照條件下進行。所述蕨類植物為扇蕨或鳳尾蕨。有益效果本專利技術(shù)與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點和積極效果:本專利技術(shù)應用組織培養(yǎng)和6tlCor射線輻射相結(jié)合的方法，以蕨類植物無菌苗誘導產(chǎn)生的綠色球狀體為材料，進行6tlCor射線輻照處理，經(jīng)過輻射誘變處理的綠色球狀體在成苗培養(yǎng)基上，發(fā)育成具有根、莖、葉的完整小植株，從而獲得突變體材料。以蕨類植物綠色球狀體為材料，6ciCor射線的劑量率為IGy/min，輻照劑量為80Gy，扇蕨綠色球狀體的成苗率為38%，鳳尾蕨綠色球狀體的成苗率為26%。綠色球狀體在6ciCor射線輻照劑量100~120Gy處理下，也獲得了少量植株。本專利技術(shù)建立的蕨類植物綠色球狀體6ciCor射線輻射誘變方法，為在器官水平上開展蕨類植物輻射誘變育種提供新技術(shù)，適用于蕨類植物新品種選育。【附圖說明】圖1SOGy劑量輻射處理的扇蕨綠色球狀體萌發(fā)綠芽。圖280Gy劑量輻射處理的鳳尾蕨綠色球狀體萌發(fā)綠芽。圖380Gy劑量輻射處理的扇蕨綠色球狀體成苗。圖480Gy劑量輻射處理的鳳尾蕨綠色球狀體成苗。【具體實施方式】1.材料和方法1.1試驗材料蕨類植物扇蕨和鳳尾蕨無菌苗購自中國農(nóng)業(yè)科學院蔬菜花卉研究所。以無菌苗誘導產(chǎn)生的綠色球狀體(greenglobularbodies,簡稱GGB)為材料，6ciCor射線為福射源。1.2培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基由MS大量兀素、MS微量兀素(MurashigeT, SkoogF.Arevised mediumfromrapidgrowthandbioassayswithtobaccotissuecultures[J].Physiolplant, 1962, 15:473 ~497)和 B5 維生素(GamborgOL, MillerRA, OjimaK.Nutrientrequirementsofsuspensionculturesofsoybeanrootcells[J].Exp.CellRes., 1968.50:151 ~158)組成，為植物組織培養(yǎng)中一種常用的培養(yǎng)基，蔗糖30g/L，瓊脂條(乘風牌，福建泉州市泉港化工廠)8g/L;綠色球狀體誘導和增殖培養(yǎng)基附加激素:6_芐基氨基嘌呤(簡稱BAP，上海雪滿生物科技有限公司)0.5mg/L，吲哚丁酸(簡稱IBA，上海源聚生物科技有限公司)0.lmg/L ；綠色球狀體成苗培養(yǎng)基附加激素:吲哚丁酸(簡稱IBA，上海源聚生物科技有限公司)0.2mg/L，活性炭質(zhì)量比0.1% (南京助研生物技術(shù)有限公司)；培養(yǎng)基在高壓滅菌前用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)整pH值至5.8。1.3 方法將I)扇蕨和鳳尾蕨無菌苗接種到2)誘導培養(yǎng)基上，在無菌苗基部誘導產(chǎn)生綠色球狀體；綠色球狀體在2)增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)后進行輻射處理；經(jīng)過輻射誘變處理的綠色球狀體轉(zhuǎn)移到2)成苗培養(yǎng)基上，在光照條件下培養(yǎng)，30d左右萌發(fā)產(chǎn)生綠芽；綠芽轉(zhuǎn)移到2)新鮮的成苗培養(yǎng)基上，30d左右形成具有根、莖、葉的完整小植株。離體培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為26±2°C，光照強度為15001x，光照時間為12h/d。綠色球狀體增殖和成苗培養(yǎng)均在光照條件下進行。 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院原子能研究所用6tlCor射線對綠色球狀體進行輻射處理。劑量率為IGy/min，輻射劑量分別設(shè)置0、50、60、70、80、90、100和120Gy八個處理。2.結(jié)果2.160Cor射線對綠色球狀本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
蕨類植物綠色球狀體60Co?r射線輻射誘變方法，其特征在于：1）?材料以蕨類植物無菌苗誘導產(chǎn)生的綠色球狀體為輻射處理材料，60Co?r射線為輻射源；2）?培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基由MS大量元素、MS微量元素與B5維生素組成，添加蔗糖30?g/L，瓊脂條?8?g/L；綠色球狀體誘導和增殖培養(yǎng)基：附加6?芐基氨基嘌呤0.5?mg/L和吲哚丁酸IBA?0.1?mg/L；綠色球狀體成苗培養(yǎng)基：附加吲哚丁酸IBA?0.2?mg/L，活性炭質(zhì)量比?0.1%；上述培養(yǎng)基在高壓滅菌前用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)整pH值至5.8；3）?方法將1）扇蕨和鳳尾蕨無菌苗接種到2）誘導培養(yǎng)基上，在無菌苗基部誘導產(chǎn)生綠色球狀體；綠色球狀體在2）增殖培養(yǎng)基上進行增殖培養(yǎng)后進行輻射處理,?60Co?r射線的輻照劑量是80?Gy或100?~?120?Gy；經(jīng)過輻射誘變處理的綠色球狀體轉(zhuǎn)移到2）成苗培養(yǎng)基上，在光照條件下培養(yǎng)，30?d左右萌發(fā)產(chǎn)生綠芽；綠芽轉(zhuǎn)移到2）新鮮的成苗培養(yǎng)基上，30?d左右形成具有根、莖、葉的完整小植株；離體培養(yǎng)條件：培養(yǎng)室溫度為26±20C，光照強度為1500?lx，光照時間為12?h/d；綠色球狀體增殖和成苗培養(yǎng)均在光照條件下進行。...
【技術(shù)特征摘要】
1.蕨類植物綠色球狀體6tlCor射線輻射誘變方法，其特征在于: O材料 以蕨類植物無菌苗誘導產(chǎn)生的綠色球狀體為輻射處理材料，6°Co r射線為輻射源； 2)培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基由MS大量元素、MS微量元素與B5維生素組成，添加蔗糖30 g/L，瓊脂條8g/L ； 綠色球狀體誘導和增殖培養(yǎng)基:附加6-芐基氨基嘌呤0.5 mg/L和吲哚丁酸IBA 0.1mg/L ； 綠色球狀體成苗培養(yǎng)基:附加吲哚丁酸IBA 0.2 mg/L，活性炭質(zhì)量比0.1% ； 上述培養(yǎng)基在高壓滅菌前用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)整PH值至5.8 ； 3)方法 將I)扇蕨和鳳尾蕨無菌苗接種到2)誘導培養(yǎng)基上...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：葉曉青，佘建明，鄧衍明，賈新平，梁麗建，孫曉波，
申請(專利權(quán))人：江蘇省農(nóng)業(yè)科學院，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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