本發明專利技術描述一種使用季氨氧基庫克森QAOC試劑對包含酚系OH的樣品，如包含酚系OH的類固醇進行質譜分析的方法。所述QAOC試劑可以改進酚系OH樣品的電離和分裂特性，其進而可以改進定量和鑒別。所述方法可以包括用所述QAOC試劑衍生化所述酚系OH樣品以產生加合物和使用質譜法來分析所述加合物。所述樣品的衍生化可以為單步反應，其中所述QAOC試劑包含氨氧基MS標記，或可以為多步反應，其中通過使基于羰基取代的PTAD的試劑與所述樣品反應，接著與氨氧基MS標記組合來形成所述加合物。也可以在使樣品與所述試劑反應之前對所述樣品進行富集。所述方法也可以允許多路復用。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利摘要】本專利技術描述一種使用季氨氧基庫克森QAOC試劑對包含酚系OH的樣品，如包含酚系OH的類固醇進行質譜分析的方法。所述QAOC試劑可以改進酚系OH樣品的電離和分裂特性，其進而可以改進定量和鑒別。所述方法可以包括用所述QAOC試劑衍生化所述酚系OH樣品以產生加合物和使用質譜法來分析所述加合物。所述樣品的衍生化可以為單步反應，其中所述QAOC試劑包含氨氧基MS標記，或可以為多步反應，其中通過使基于羰基取代的PTAD的試劑與所述樣品反應，接著與氨氧基MS標記組合來形成所述加合物。也可以在使樣品與所述試劑反應之前對所述樣品進行富集。所述方法也可以允許多路復用。【專利說明】使用標記化學和LC-MSMS工作流分析具有酚系OH的雌二醇和分析物相關美國串請本申請要求美國臨時申請序列號61/588902的優先權，其全部傳授內容以引用的方式并入本文中。
本專利技術傳授內容涉及質譜和適用于質譜的標記試劑的領域。
技術介紹
標記化學大體上用于改進質譜信號。使用水性烯型反應以使用試劑4-苯基-3H_1，2，4-三唑-3，5(4H)_ 二酮(通常被稱為PTAD或庫克森試劑(Cookson Reagent))衍生酪氨酸的共軛可以提供對于合成雙特異性抗體尤其適用的共軛物(Hitoshi Ban,吉里亞加夫里柳克(Jilia Gavrilyuk),卡洛斯 F.巴巴斯(Carlos F.Barbas),美國化學協會期刊(J.Am.Chem.Soc.) 2010,132,1523-1525)。PTAD也已用于與化合物的維生素D類共軛以用于質譜分析(島田一兵(Kazutake Shimada),大江友之(Tomoyuki Oe),水 口辰人(Tatsuhito Mizuguchi),分析家(Analyst)，1991，116，1393-1397)。開發季氨基氧基庫克森(Cookson) ( “QA0C”), 一種與PTAD具有相同反應核心的試劑以用于分析如美國公開專利申請2011/0212534(其以全文引用的方式并入本文中)中所述的維生素D3代謝物。發現此試劑與維生素D3的共軛二烯官能團反應以對于維生素D3的質譜(MS)分析提供改進的電離和分裂特性。精確分析和定量激素和其它含有酚系OH的化合物變得越來越重要。舉例來說，雌激素和雌激素類化合物經由激素取代療法在現今的社會中正發揮越來越多的作用。并且，分析和定量雌激素和雌激素類化合物幫助處理雌激素相關的疾病，如乳癌。但是，仍需要對于含有酚系OH的化合物，如類固醇或雌激素進行改進質譜分析的標記。通常難以通過質譜來分析這些化合物，所述化合物可以包括激素，如雌二醇。舉例來說，這些化合物中的許多不含可電離基團。因此，可能難以定量生物基質中的這些分子，例如雌二醇，尤其在低濃度下。盡管如五氟芐基溴和丹磺酰氯的試劑常用于使用質譜以進行雌二醇分析的衍生化策略中，但包含利用含有酚系OH的分析物的所述衍生作用的LC/MSMS的當前策略未能達到臨床分析所需的檢測限(島田(Shimada)等人，分析家(Analyst), 116,1393-1397(1991);東謗(Higashi)等人，化學與藥學公報(Chem.Pharm.Bull.) 54 (11),1479-1485(2006))。需要一種克服這些缺點的定量這些分析物的方法。
技術實現思路
根據各種實施例，本專利技術傳授內容提供定量具有一個或一個以上酚系OH部分和其代謝物的化合物(在本文中統稱為酚系OH分析物)的方法。根據各種實施例，公開一種用于對酚系OH分析物進行質譜分析的方法，其可包含用QAOC試劑標記分析物以產生加合物和使用質譜(MS)來分析加合物。在一些實施例中，可以使用LC-MSMS來鑒別和定量加合物。在一些實施例中，可以使用LC-MSMS和多重反應監測(MRM)工作流來分析加合物。在一些實施例中，加合物可以在反相管柱上具有相異保留時間和相異質量。在一些實施例中，在高能碰撞下，可以產生報告子基團。在一些實施例中，對于各報告子基團檢測的強度或峰面積不僅可以用于鑒別，而且可以用于定量。根據各種實施例，所述方法也可以包含樣品富集，例如在用QAOC試劑標記分析物之前。在一些實施例中，可以使用母離子-子離子躍遷監測(PDITM)，例如使用三重四極MS平臺來分析加合物。在一些實施例中，可以使用質譜同時分析已經用QAOC試劑標記的具有酚系OH基團的多種不同分析物。舉例來說，不同QAOC試劑可以用于標記不同分析物，并且可以使用質譜，例如LC-MSMS來分析標記的分析物。在一些實施例中，QAOC試劑含有一個或一個以上同位素標記的原子。根據各種實施例，酚系OH分析物可以為類固醇和雌激素。舉例來說，酚系OH分析物可以為雌激素化合物，如雌酮(El)、雌酮硫酸鹽(Els)、17 α -雌二醇(E2a)、17 β -雌二醇(E2b)、雌二醇硫酸鹽(E2s)、馬烯雌酮(EQ)、17 α-二氫馬烯雌酮(EQa)、17 β - 二氫馬烯雌酮(EQa)、馬萘雌酮(EN)、17 α-二氫馬萘雌酮(ENa)、17 β -二氫馬萘雌酮(ENb)、A8，9_脫氫雌酮(dEl)、Λ 8，9-脫氫 雌酮硫酸鹽(dEls)雌三醇、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇。在一些實施例中，基于羰基取代的苯基-3H_1，2，4-三唑-3，5(4H)_ 二酮(羰基-PTAD)的試劑可以在標記酚系OH分析物之前偶合于氨氧基標記劑(此方法在本文中被稱作單步標記反應)。在其它實施例中，無氨氧基標記劑的基于羰基取代的PTAD的試劑可以與酚系OH分析物反應以標記分析物。標記的分析物可以隨后經質量分析。或者，可以在質量分析之前在標記的分析物的羰基部分用氨氧基標記來標記所述分析物(此方法在本文中被稱作兩步標記反應)。可以通過下式描述QAOC試劑:【權利要求】1.一種用于樣品的質譜分析的方法，其包含以下步驟: 用QAOC試劑處理所述樣品以標記所述樣品中的至少一種酚系OH分析物以產生酚系QAOC加合物；和 使用質譜儀分析所述酚系QAOC加合物。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述QAOC試劑具有下式: R3 3.根據權利要求2所述的方法，其中R2為甲基或乙基并且R3不存在； 和/或LI和L2獨立地為鍵、肽、寡聚物、PEG或C1-C2tl亞烷基鏈。4.根據權利要求2所述的方法，其中所述至少一種酚系OH分析物為類固醇并且任選地其中所述類固醇為選自由以下組成的群組的雌激素化合物:雌三醇、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇、雌酮(El)、雌酮硫酸鹽(Els)、17 α-雌二醇(E2a)、17 0-雌二醇(E2b)、雌二醇硫酸鹽(E2s)、馬烯雌酮(EQ)、17 α-二氫馬烯雌酮(EQa)、17 β - 二氫馬烯雌酮(EQb)、馬萘雌酮(EN)、17 α-二氫馬萘雌酮(ENa)、17 β - 二氫馬萘雌酮(ENb)、Λ 8，9-脫氫雌酮(dEl)、Λ 8，9-脫氫雌酮硫酸鹽(dEls)。5.根據權利要求2所述的方法，其中所述QAOC試劑是通過使具有以下結構的化合物: 6.根據權利要求5所述的方法，其中R2為甲基或乙基，R3不存在，R4為甲基，m為I與5之間的整數，并且本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于樣品的質譜分析的方法，其包含以下步驟：用QAOC試劑處理所述樣品以標記所述樣品中的至少一種酚系OH分析物以產生酚系QAOC加合物；和使用質譜儀分析所述酚系QAOC加合物。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：薩巴卡·戴伊，薩巴辛·普卡雅斯特哈，
申請(專利權)人：DH科技發展私人貿易有限公司，
類型：發明
國別省市：新加坡;SG
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。