一種廣譜粘膜免疫防控豬繁殖與呼吸綜合癥的疫苗組合物及其應用制造技術

本發明專利技術公開了一種廣譜粘膜免疫防控豬繁殖與呼吸綜合癥的疫苗組合物及其應用，所述疫苗組合物由滅活純化的完整豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗原和穩定增效劑組成，所述抗原來源于高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒HP-PRRSV-JXM-F5株，其微生物保藏號是：CGMCC?NO.9453。所述穩定增效劑包括：必需和非必需氨基酸混合物、Ⅰ類干擾素誘導劑、雙糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA鹽、表面活性劑以及緩沖溶液。本發明專利技術的疫苗組合物高度安全，具有廣譜粘膜免疫的保護作用。并且提高了規模化生產過程豬繁殖與呼吸綜合癥病毒原液、半成品、成品的貯存穩定性，特別是在極端溫度的環境中能夠保持抗原結構完整、效價不下降，有利于高熱地區豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的貯存及使用。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種疫苗組合物及其應用，尤其涉及一種廣譜粘膜免疫防治豬繁殖與 呼吸綜合癥的組合物及其應用，屬于醫藥生物

技術介紹
細胞培養的病毒類疫苗有3種：減毒活疫苗、全病毒滅活疫苗、病毒亞單位疫苗， 根據病毒不同，其理化性質和生物學特性不同，保存其抗原的賦型劑和條件也不同。為保護 滅活病毒的完整性或減毒活病毒感染性，有必要開發適宜的賦型劑。業已開發出水痘帶狀 皰瘆、麻瘆、雞痘、豬乙型腦炎活疫苗的凍干保護劑，滅活疫苗的凍干保護劑在狂犬病疫苗 中已經成功使用。盡管這樣，滅活疫苗的凍干保護劑因使用的對象、條件也在不斷優化和篩 選。 在滅活病毒疫苗領域中，疫苗配方中常含有動物源性的蛋白、例如牛或人血清白 蛋白、明膠以增強病毒類疫苗的穩定性特別對環境敏感的病毒，但疫苗組份中的蛋白如果 來源于動物傳染病沒有控制的豬或牛，則有傳染病傳播的潛在風險，也有變態反應的風險， 如人白蛋白、馬血清白蛋白或牛血清白蛋白。 因此需要發現一種穩定的不含蛋白、多肽和寡肽的賦型劑用于凍干保護疫苗抗 原，特別是難以保存的包含滅活純化全病毒的豬繁殖與呼吸道病毒疫苗抗原；也需要開發 適合有效劑量低、總蛋白含量小疫苗使用的賦型劑，這種需求特別適合高度純化的疫苗，這 些疫苗含微量的殘余雜質蛋白和核酸，排除了潛在的過敏反應，但會引起純化滅活病毒降 解、吸附或凝聚，從而使疫苗效果減小，因此賦型劑中需含有增強免疫作用的成分，目前疫 苗鋁佐劑、雙向油佐劑很難和病毒抗原凍干而保持疫苗的免疫原性和安全性，因此有必要 開發能凍干且具有佐劑效果的賦型劑成分。 干擾素是具有多種生理功能的蛋白質家族，且這個家族的每個成員在功能上是不 可完全替代的。研宄表明α類干擾素可顯著增強特異性的體液免疫反應。在機體的免疫 網絡中，干擾素是細胞分泌的具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調節等多種生物活性的蛋白質。其 免疫調節活性不僅涉及體內非特異性免疫，也包括特異性免疫的細胞和體液免疫。許多細 胞因子如α類干擾素、IL-12免疫增強劑免疫的作用都有報道，且有抗微生物感染作用，佐 劑的作用是成倍增強機體的免疫反應并在多種動物上使用。豬繁殖與呼吸道綜合癥的流行 要求高效、安全、廣譜的疫苗，目前有4-5個減毒活疫苗和滅活疫苗上市，是經過體外細胞 傳代減毒適應而成，免疫效果達不到預期，對某些毒株的保護水平低且不能預防豬的感染， 可能是豬體沒有產生足夠的細胞免疫和野毒產生了逃逸機體免疫的變異。盡管抗豬繁殖與 呼吸綜合癥病毒的免疫不甚清楚，但研宄發現豬繁殖與呼吸道病毒野毒株和疫苗株均不能 刺激機體產生強烈的病毒清除免疫。病毒特異的T細胞分泌的γ-干擾素和病毒中和抗體 在病毒感染后幾周產生具有病毒清除作用。和其它病毒的特性相比，豬繁殖與呼吸綜合癥 病毒不能或抑制誘導體內干擾素的形成，而豬體內α類干擾素影響病毒特異的T細胞分泌 的γ-干擾素的反應和高效抗病毒的免疫預防。 許多的研宄報道α類干擾素和豬繁殖與呼吸綜合癥病毒聯合使用都不能刺激豬 體產生強烈的抗病毒免疫，病毒本身抑制了豬體的干擾素信號轉導，詳盡的機制仍不明白。 一般情況下干擾素具有廣譜抗病毒作用，抑制病毒復制，可能對活病毒誘導的干擾素水平 有負面作用，但許多的試驗表明干擾素對感染或暴露動物疾病狀態和進程的影響，換句話 說是影響疾病的痊愈或加劇。α類干擾素通過增強特異性的體液免疫和細胞免疫，增強分 泌IL-1、IL-12、IL-18、γ-干擾素發揮其免疫增強作用以及抗病毒免疫作用。由于干擾素 作為佐劑使用，具有明顯的種屬特異性，自然干擾素提取復雜成本高，重組基因工程干擾素 多作為抗病毒、抗腫瘤的藥物藥物使用。盡管這樣，自1970年以來，多種內源性干擾素誘 導劑的種類、作用已被闡明，這些物質來自包括病毒、其他微生物的雙鏈DNA、RNA、內毒素、 甘露聚糖、分裂素、植物血凝素、鏈球菌溶血素、商陸分裂素以及合成的多聚核苷酸、青霉菌 素、木香腦，黃嘌呤二核苷酸、黃嘌呤單核苷酸、核黃素（維生素 Β2)細菌的胞嘧啶-鳥嘌 呤序列CpG基序，必須作為疫苗配方中的組分注冊獲準使用。作為干擾素誘導劑的聚肌胞 復合物（polyIC)或另外混入多聚賴氨酸和羧甲基纖維素的聚肌胞復合物（Poly ICLC)的 干擾素誘導作用、佐劑作用在多種病毒疫苗或動物疫苗中都有研宄報道。 POlyIC和POlyICLC在豬體上具有誘導干擾素的能力，增強細胞介導的免疫和體 液免疫，特別增強特異性體液免疫，增強狂犬病毒疫苗、百日咳疫苗、流感疫苗的特異性抗 體生成。 結合以上的的問題，本專利技術提供了一種穩定高效的疫苗組合物，由作為抗原的滅 活純化的完整豬繁殖與呼吸綜合癥病毒和穩定增效劑組成，穩定增效劑包括：必需和非必 需氨基酸混合物、I類干擾素誘導劑、麥芽糖、山梨糖醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA 鹽、吐溫-20以及緩沖溶液。
技術實現思路
為了克服現有技術的缺陷，本專利技術的目的在于提供純化滅活豬繁殖與呼吸綜合癥 病毒疫苗穩定增效劑組合物及其疫苗組合物，所述的穩定增效劑完全為水溶性的佐劑，并 且能夠安全有效地增強現行滅活豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的安全性，擴大對不同基因 型、遺傳譜系豬繁殖與呼吸綜合癥病毒免疫譜，提高免疫效果，擴大疫苗的使用范圍，延長 免疫期達到120天。結合了豬繁殖與呼吸綜合癥病毒的在不同物理狀態、不同溫度理化性 質，提高豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗原在生產、貯存、冷鏈、使用的穩定性。在2-8°C可保存 2年，效期長達2年；特別是可在極端溫度的環境中45°C保存1周、37°C保存1月病毒結構 完整性和活性不下降，有利于高熱地區豬繁殖與呼吸綜合癥病毒疫苗的冷鏈、疫苗質量保 證、使用效果穩定。本專利技術制備的凍干滅活純化疫苗組合物經鼻內滴注免疫小母豬、母豬、 懷孕母豬可增強中和抗體的生成，減少感染病毒的病毒血癥持續時間，對同型基因、異型基 因、不同遺傳譜系豬繁殖與呼吸綜合病毒感染引起癥狀或死亡具有保護作用，具有廣譜免 疫原性；且對懷孕母豬安全不影響其生殖，免疫期為120天。 為實現上述目的本專利技術所采用的技術方案如下： 本專利技術的一種廣譜粘膜免疫防控豬繁殖與呼吸綜合癥的疫苗組合物，其特征在于 所述疫苗組合物由滅活純化的完整豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗原和穩定增效劑組成； 其中，所述抗原來源于高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒HP-PRRSV-JXM-F5株， 其為在MARC-145細胞上傳至5代的適應株，分類命名為高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病 毒，其微生物保藏號是：CGMCC NO. 9453,保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，保藏日期2014年7月8日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科 學院微生物研宄所。 其中，所述的穩定增效劑包括：必需和非必需氨基酸混合物、I類干擾素誘導劑、 雙糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA鹽、表面活性劑以及緩沖溶液。 在本專利技術中，優選的，HP-PRRSV-JXM-F5工作種子批病毒經a)細胞培養；b)澄清； c)離子交換層析純化；d)透析；e)核酸酶解；f)連續流密度梯度超速純化或分子篩層析純 化；g)滅活；f)透析制備。 在本專利技術中，優選的，所述的疫苗組合物中含有：2. 0?10g/本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種廣譜粘膜免疫防控豬繁殖與呼吸綜合癥的疫苗組合物，其特征在于所述疫苗組合物由滅活純化的完整豬繁殖與呼吸綜合癥病毒抗原和穩定增效劑組成；其中，所述抗原來源于高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒HP?PRRSV?JXM?F5株，其為HP?PRRSV?JXM分離毒在MARC?145細胞上傳至第5代的細胞適應株，微生物保藏號是：CGMCC?NO.9453；其中，所述的穩定增效劑包括：必需和非必需氨基酸混合物、Ⅰ類干擾素誘導劑、雙糖、多元醇、尿素或尿素衍生物、EDTA或EDTA鹽、表面活性劑以及緩沖溶液。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張澍，呂宏亮，
申請(專利權)人：呂宏亮，張澍，山西隆克爾生物制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：北京;11