包含脂解酶變體的組合物和方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了脂解酶變體。具體地講，本發(fā)明專利技術(shù)提供了具有一個或多個修飾的脂解酶變體，與親本脂解酶相比，其具有至少一種改善的特性。此外，本發(fā)明專利技術(shù)提供了包含本發(fā)明專利技術(shù)的脂解酶變體的組合物。本發(fā)明專利技術(shù)還提供了使用包含本發(fā)明專利技術(shù)的脂解酶變體的組合物來進(jìn)行清潔的方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】包含脂解酶變體的組合物和方法相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2012年10月12日提交的美國臨時申請No.61/713,436的權(quán)益，該申請據(jù)此全文以引用方式并入本文。
技術(shù)介紹
包括脂肪酶和角質(zhì)酶在內(nèi)的脂解酶已被用于洗滌劑清潔組合物中，以去除油性污漬。脂解酶功能發(fā)揮作用的一種機(jī)制是通過水解甘油三酯來生成脂肪酸。然而，清潔組合物中存在的表面活性劑和其他組分常常會抑制這些酶，從而干擾其除去油性污漬的能力。因此，需要可在清潔組合物的苛刻環(huán)境中起作用的脂解酶。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供了改善的脂解酶，特別是可用于洗滌劑組合物的酶。具體地講，本專利技術(shù)提供與親本脂解酶相比具有一個或多個修飾(諸如置換)的脂解酶變體。這可通過以下來實(shí)現(xiàn)：通過改善在標(biāo)準(zhǔn)洗滌劑制劑和低表面活性劑洗滌劑制劑中的洗滌性能、酶在洗滌劑組合物中的穩(wěn)定性、酶的熱穩(wěn)定性、底物水解、表達(dá)和/或改善酶在洗滌循環(huán)中的效力的改進(jìn)的電荷/疏水性分布來對酶進(jìn)行改善。本專利技術(shù)提供了特別適合于并且可用于多種清潔應(yīng)用的變體脂解酶，其包括但不限于變體脂肪酶脂解酶。本專利技術(shù)還提供了使用本專利技術(shù)的脂解酶變體來進(jìn)行清潔的方法。在一個實(shí)施例中，本專利技術(shù)為脂解酶變體或其活性片段，其包含對親本脂解酶的氨基酸修飾，其中該修飾是在脂解酶變體的有效位置處，其中在有效位置測試的修飾中的至少一種修飾滿足以下標(biāo)準(zhǔn)中的至少一者：a)某一位置，其中對于表達(dá)、在pH8.2下的CS-61微樣本活性(micro-swatchactivity)、在pH6或pH8.2下對對硝基苯基酯底物的活性以及洗滌劑穩(wěn)定性、LAS穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性來說，相對于TLL親本的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.9，并且對于這些測試中的任一者另外具有大于或等于1.0的PI；b)某一位置，其中對于表達(dá)、在pH8.2下的CS-61微樣本活性、在pH6或pH8.2下對對硝基苯基酯底物的活性以及洗滌劑穩(wěn)定性、LAS穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性來說，相對于TLL親本的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.8，并且對于這些測試中的任一者另外具有大于或等于1.2的PI；c)某一位置，其中對于表達(dá)、在pH8.2下的CS-61微樣本活性、在pH6或pH8.2下對對硝基苯基酯底物的活性以及洗滌劑穩(wěn)定性、LAS穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性來說，相對于TLL親本的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.5，并且對于這些測試中的任一者另外具有大于或等于1.5的PI；并且其中有效位置選自：1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、79、84、85、86、87、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、111、112、114、115、117、118、119、120、121、122、123、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、142、143、149、151、152、153、154、155、156、158、159、162、163、164、165、166、167、168、169、170、176、179、180、181、183、184、187、188、189、190、191、192、193、196、198、199、200、202、205、206、208、209、210、211、212、213、214、216、217、218、221、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、236、237、238、239、242、243、244、246、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、259、260、262、263、264、265、266、267、268以及269，其中脂肪酶變體的氨基酸位置的編號與SEQIDNO:4中所示的疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginosus)脂肪酶TLL的氨基酸序列相對應(yīng)。在一個實(shí)施例中，本專利技術(shù)是脂解酶變體或其活性片段，其包含對親本脂解酶的氨基酸修飾，其中該修飾是在脂解酶變體的有效位置處，其中在有效位置測試的修飾中的至少50％滿足以上所列出的標(biāo)準(zhǔn)a、b以及c中的至少一者，并且其中有效位置選自：1、2、3、4、5、6、8、9、13、23、24、25、26、27、28、29、33、37、38、39、46、51、52、54、58、64、66、68、69、71、72、75、90、93、94、111、120、122、123、130、131、137、140、162、163、189、250、252以及264，其中脂肪酶變體的氨基酸位置根據(jù)與SEQIDNO:4中所示的疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶TLL的氨基酸序列的對應(yīng)關(guān)系來進(jìn)行編號。在一個實(shí)施例中，本專利技術(shù)是脂解酶變體或其活性片段，其包含對親本脂解酶的氨基酸修飾，其中該修飾是在脂解酶變體的有效位置處，其中在有效位置測試的修飾中的至少30％滿足以上所列出的標(biāo)準(zhǔn)a、b以及c中的至少一者，并且其中有效位置選自：18、19、20、30、31、32、47、48、49、50、53、56、60、73、74、85、86、91、95、96、97、98、99、101、105、108、115、125、127、128、132、133、151、159、164、179、183、187、188、190、216、223、232、237、244、251、254、263、267以及269，其中脂肪酶變體的氨基酸位置根據(jù)與SEQIDNO:4中所示的疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶TLL的氨基酸序列的對應(yīng)關(guān)系來進(jìn)行編號。在一個實(shí)施例中，本專利技術(shù)是脂解酶變體或其活性片段，其包含對親本脂解酶的氨基酸修飾，其中該修飾是在脂解酶變體的有效位置處，其中在有效位置測試的修飾中的至少15％滿足以上所列出的標(biāo)準(zhǔn)a、b以及c中的至少一者，并且其中有效位置選自：7、11、12、15、22、35、40、42、43、44、45、61、63、65、67、76、77、84、87、114、117、119、121、134、135、136、143、154、155、156、158、165、166、168、176、180、191、199、200、202、209、211、214、217、221、224、225、228、229、231、233、248、249、253、255、256、265以及268，其中脂肪酶變體的氨基酸位置根據(jù)與SEQIDNO:4中所示的疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶TLL的氨基酸序列的對應(yīng)關(guān)系來進(jìn)行編號。在一個實(shí)施例中，本專利技術(shù)是脂解酶變體或其活性片段，其包含對親本脂解酶的氨基酸修飾，其中該修飾是在脂解酶變體的有效位置處，其中在有效位置測試的修飾中有少于15％滿足以上所列出的標(biāo)準(zhǔn)a、b以及c中本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種脂解酶變體或其活性片段，包含對親本脂解酶的氨基酸修飾，其中所述修飾在所述脂解酶變體的有效位置處，其中在所述有效位置處測試的所述修飾中的至少一個修飾滿足以下標(biāo)準(zhǔn)中的至少一者：a)其中相對于TLL親本，其對于表達(dá)、pH?8.2下的CS?61微樣本活性、pH?6或pH?8.2下對對硝基苯基酯底物的活性、以及洗滌劑穩(wěn)定性、LAS穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.9，并且此外這些測試中任一者的PI大于或等于1.0的位置；b)其中相對于TLL親本，其對于表達(dá)、pH?8.2下的CS?61微樣本活性、pH?6或pH?8.2下對對硝基苯基酯底物的活性、以及洗滌劑穩(wěn)定性、LAS穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.8，并且此外這些測試中任一者的PI大于或等于1.2的位置；c)其中相對于TLL親本，其對于表達(dá)、pH?8.2下的CS?61微樣本活性、pH?6或pH?8.2下對對硝基苯基酯底物的活性、以及洗滌劑穩(wěn)定性、LAS穩(wěn)定性或熱穩(wěn)定性的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.5，并且此外這些測試中任一者的PI大于或等于1.5的位置；并且其中所述有效位置選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、79、84、85、86、87、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、111、112、114、115、117、118、119、120、121、122、123、125、126、127、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、142、143、149、151、152、153、154、155、156、158、159、162、163、164、165、166、167、168、169、170、176、179、180、181、183、184、187、188、189、190、191、192、193、196、198、199、200、202、205、206、208、209、210、211、212、213、214、216、217、218、221、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、236、237、238、239、242、243、244、246、248、249、250、251、252、253、254、255、256、257、259、260、262、263、264、265、266、267、268和269，其中所述脂肪酶變體的氨基酸位置根據(jù)與SEQ?ID?NO:4中所示的疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyces?lanuginosus)脂肪酶TLL的氨基酸序列的對應(yīng)關(guān)系來進(jìn)行編號。...

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2012.10.12 US 61/713,4361.一種衍生自疏棉狀嗜熱絲孢菌(Thermomyceslanuginosus)親本脂肪酶TLL的脂肪酶變體，其中所述變體與親本脂肪酶的區(qū)別在于位置187處的氨基酸修飾187(G,H,N,Q,S,T,W)，其中相對于TLL親本其對于表達(dá)和洗滌劑穩(wěn)定性的最小性能指數(shù)(PI)大于或等于0.8，并且其中相對于TLL親本其清潔性能的最小PI大于或等于1.1，其中所述脂肪酶變體的氨基酸位置根據(jù)與SEQIDNO:4中所示脂肪酶TLL的氨基酸序列的對應(yīng)關(guān)系來進(jìn)行編號，并且其中所述脂肪酶變體的氨基酸序列與SEQIDNO:4具有至少95％的序列同一性。2.權(quán)利要求1的脂肪酶變體，其中相對于TLL親本對于半劑量的清潔性能的最小PI大于或等于1.1。3.權(quán)利要求1的脂肪酶變體，其中相對于TLL親本對于半劑量并具有輔劑下的清潔性能的最小PI大于或等于1.1。4.權(quán)利要求1的脂肪酶變體，其中相對于TLL親本對于全劑量下的清潔性能的最小PI大于或等于1.1，并且其中所述修飾包含187(T)，其中所述脂肪酶變體的氨基酸序列與SEQIDNO:4具有至少95％的序列同一性。5.一種清潔組合物，包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的脂肪酶變體。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的清潔組合物，其中所述清潔組合物為顆粒、粉末、固體、條棒、液體、片劑、凝膠或糊劑組合物。7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的清潔組合物，其中所述清潔組合物為洗滌劑組合物。8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的清潔組合物，其中所述清潔組合物為衣物洗滌劑組合物、餐具洗滌劑組合物或硬質(zhì)表面清潔組合物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的清潔組合物，其中所述餐具洗滌劑為手動餐具洗滌劑組合物或自動餐具洗滌劑組合物。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的清潔組合物，其中所述清潔組合物為衣物洗滌劑組合物。11.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的清潔組合...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：T·P·格雷卡爾，S·普萊斯魯斯，A·J·保羅斯，D·A·埃斯特爾，
申請(專利權(quán))人：丹尼斯科美國公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US