本發明專利技術提供一種用于培養鏈式激活的免疫細胞的試劑盒，本發明專利技術的本試劑盒可高質量、高數量培養出CAPRI細胞，解決了現有的CAPRI細胞增殖能力差的問題，采用本方法制備CAPRI細胞數量是傳統方法的4倍左右，并保留了CAPRI細胞殺傷能力。本試劑盒可規模化生產，運輸方便，-80℃低溫保存時間長。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于細胞培養
，具體涉及一種用于培養鏈式激活的免疫細胞的試 劑盒。
技術介紹
隨著現在分子生物學技術和腫瘤免疫學的發展，腫瘤生物治療已成為繼手術、放 療和化療后的第四種腫瘤治療模式，以其安全有效、副作用小及適應癥廣等優點逐漸被廣 大醫務工作者、患者及家屬接受。腫瘤生物治療首先采集病人自身的免疫細胞或應用干細 胞，體外培養、激活、擴增，使其具有強大的識別和殺傷腫瘤細胞的能力，然后回輸到病人體 內，直接殺傷腫瘤細胞，同時激發自身免疫功能，達到治療腫瘤的目的。鏈式激活的免疫細 胞(Cascade Primed Immune cells,下簡稱CAPRI細胞)治療是腫瘤生物治療的非常重要的 治療方法，CAPRI細胞療法的效應細胞包括:NK細胞、NKT細胞、DC細胞、以及CD4+的T輔助細 胞(Th)和CD8+的細胞毒T細胞(CTL)，后兩者是主要的殺傷效應細胞，在數量方面，Th和CTL 細胞約占總數的80 %，其余占20 % XAPRI細胞治療適用于早、中、晚各期腫瘤病人，可應用 于肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌、腸癌、腦瘤、黑色素瘤、前列腺癌、頭頸部腫瘤、食道癌、腎癌、 肝癌、膀胱癌、宮頸癌、子宮內膜癌、膽囊癌、肉瘤、皮膚癌等二十多種實體腫瘤和血液腫瘤 (T淋巴細胞瘤除外）的治療。 傳統的CAPRI細胞培養的方法包括以下幾個步驟： ①起始的⑶3激活階段(2-4小時）； ②IL2輔助階段(2-3小時）：加入20單位的IL2/ml; ③引發階段（18-24小時） ④擴充階段(72小時）：細胞因子加入20單位/ml的IL2 傳統的CAPRI細胞培養的方法存在以下缺陷： ①傳統的培養方法細胞增殖能力差，最后獲CAPRI細胞僅擴增2-3倍， ②傳統CAPRI細胞培養方法允許采用加入培養液10%胎牛血清；③傳統CAPRI細胞培養方法加入細胞因子比較單一，且濃度比較低。 ④傳統CAPRI細胞培養方法沒有上升到試劑盒高度，故不能產業化生產。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種用于培養鏈式激活的免疫細胞的試劑盒，從而彌補現有 技術的不足。 本專利技術首先提供一種高增殖力鏈式激活的免疫細胞試劑盒，包含有如下的組分： 1) A號液:所述的A號液為稀釋液； 2 )B號液:所述的B號液為分離液； 3 )C號液:所述的C號液為洗滌液； 4)D號液:所述的D號液為培養液； 5)E號液為CAPRI體外處理試劑，其中包括I液，為rhIL-2和IFN-γ的混合液；Π 液 為rhIL-2、rhIL-15、rhIL-18和IFN-γ 的混合液， 優選的，所述A號液為PH7.2~7.4的PBS釋液液。優選的，所述B號液為由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度為1.077±0.001的分層 液。 優選的，所述C號液為質量比0.9%生理鹽水。 優選的，所述 E 號液中 I 液為 15000-25000U/ml rhIL-2 和 15000-25000U/ml IFN-γ 的培養液。 優選的，E號液中 Π 液為27000-35000U/ml rhIL-2、500-600ng/ml rhIL-15、7500-12500U/ml rhIL-18和27000-35000U/ml IFN-γ 的培養液。 本專利技術另一個方面還提供一種用于培養鏈式激活的免疫細胞的培養液，其組成包 括:氯化鉀 28-32mg/ml、氯化 |丐38-4211^/1111、硫酸鎂 ll-13mg/ml、氯化鈉48-52mg/ml、磷酸二 氫鉀28_32mg/ml、碳酸氫|丐1 l_12mg/ml、氨基酸13mg/ml、維生素21_22mg/ml、微量元素 0 · 93mg/ml、白蛋白43_47mg/ml、膜島素7 · 8-8 · 2mg/ml、亞油酸0 · 38-0 · 42mg/ml、油酸4· 8_ 5 · 2mg/ml、谷胱甘肽2 · 3-2 · 7mg/ml、次黃噪呤0 · 8mg/ml、硫辛酸0 · lmg/ml、丙酮酸 14.5-15 · 5mg/ml、葡萄糖14 · 8_15mg/ml、胸腺啼啶 0 · 12mg/ml。 上述的培養液用于制備用于鏈式激活的免疫細胞培養的試劑盒； 本專利技術還提供上述高增殖力鏈式激活的免疫細胞試劑盒的使用方法，包括以下步 驟： 1)取抗凝外周加入A號液，混勾得混合液； 2)在離心管中加入B號液； 3)將步驟1)的混合液小心沿管壁加入B號液液面上； 4)以2500-3000轉/分離心至離心管中由上至下細胞分為四層； 5)收集第二層細胞，用C號液混勻后，以1800-2000轉/分離心，棄去上清留沉淀重 新用C號液懸浮，洗滌得所需外周血單個核細胞(PBMC); 6)將分離的部分外周血單個核細胞用D號液調整細胞濃度2 X106,加入到抗CD3抗 體和Retronectin-TIOOB包被的細胞培養瓶中； 7)在37°C、C02濃度為5%細胞培養箱中培養2.5-3.5小時后，加入E號液試劑I，調 整細胞因子rhIL-2和IFN-γ 終濃度分別為750-1250U/ml、750-1250U/ml; 8)繼續培養2.5-. 35小時后加入步驟5)分離的剩余的PBMC，混勻后繼續培養，然后 吸取收集培養的細胞，離心清洗后，懸浮培養在D號液中，加入E號液試劑Π ，調整細胞因子 rhIL-2、rhIL-15、rhIL-18和IFN-γ 濃度分別為450-580U/ml、9-10ng/ml、120-200U/ml和 500-600U/ml； 9)繼續培養48小時后換液，補加 D號液和E號液，繼續培養24小時后倍量換液，繼續 培養48小時后收獲凍存。 本專利技術的有益效果是:應用本試劑盒可高質量、高數量培養出CAPRI細胞，解決了 現有的CAPRI細胞增殖能力差的問題，采用本方法制備CAPRI細胞數量是傳統方法的4倍左 右，并保留了 CAPRI細胞殺傷能力。本試劑盒可規模化生產，運輸方便，-80°C低溫保存時間 長。【附圖說明】圖1:傳統方法培養CAPRI細胞與本專利技術技術培養CAPRI細胞數量比較。【具體實施方式】下面通過實施例對本專利技術進行詳細的描述。 實施例1 -種高增殖力鏈式激活的免疫細胞試劑盒，該試劑盒內容物中包括試劑、耗材兩 大部分，其中試劑類包括A號液為稀釋液，B號液為分離液，C號液為洗滌液，D號液為培養液， E號液為CAPRI體外處理試劑(包括I液lml四支，為一定濃度rhIL-2和IFN-γ的配制液，試劑 瓶為藍色帽；Π 液1.5ml八支，為一定濃度rhIL-2、rhIL-15、rhIL-18和IFN-γ的配制液，試 劑瓶為綠色帽）；耗材包括50ml-次性離心管8支，10ml-次性移液管8支，3ml巴氏吸管2支。 其中：① A號液稀釋液為pH7.2~7.4的PBS釋液液；②B號液分離液由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度為1.077 ±0.001的分層液； ③C號液洗滌液為0.9 %生理鹽水；④D號液為培養液，其成分如下：氯化鉀28-32mg/ml、氯化鈣38-42mg/ml、硫酸鎂 1 l_13mg/ml、氯化鈉 48_52mg/ml、磷酸二氫鉀28_32mg/ml、碳酸氫、氨基酸 13mg/ml、維生素 21_22mg/ml、微量元素 0本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種高增殖力鏈式激活的免疫細胞試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包含有如下的組分：1)A號液：所述的A號液為稀釋液；2)B號液：所述的B號液為分離液；3)C號液：所述的C號液為洗滌液；4)D號液：所述的D號液為培養液；5)E號液為CAPRI體外處理試劑，其中包括Ⅰ液，為rhIL?2和IFN?γ的混合液；Ⅱ液為rhIL?2、rhIL?15、rhIL?18和IFN?γ的混合液。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：王盛，齊湘杰，
申請(專利權)人：齊湘杰，
類型：發明
國別省市：山東;37
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