本發明專利技術公開了一種分離測定西格列汀有關物質的方法，采用高效液相色譜儀，以PhenomenexLunaC18(2)100A柱為色譜柱，以乙腈和pH=6.2的磷酸鹽緩沖液作為流動相，在波長210nm下進行梯度洗脫。本發明專利技術分析速度快、分離效果好、而且成本低廉，對西格列汀原料藥的有關物質進行了測定和檢查。該方法對有關物質檢出率高，精密度高，重復性和回收率良好，且該方法通過驗證，可用于西格列汀原料藥和制劑的常規分析和質量控制。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于藥物分析檢測領域，涉及一種西格列汀原料藥的質量控制方法，具體來說是一種分離測定西格列汀有關物質的方法。
技術介紹
隨著居民生活水平的提高，Ⅰ型及Ⅱ型糖尿病的發病率逐年升高，糖尿病已經成為威脅人民健康的重大社會問題，從而引起世界各國政府及衛生部門的關注和重視。DPP-4抑制劑可以通過抑制腸促胰素GLP-1的失活，起到促進胰島素分泌，并抑制胰高血糖素的分泌的作用，是Ⅱ型糖尿病一種新的治療藥物。DPP-4抑制劑使用安全，胃腸道反應少。發生低血糖的風險較低，無體重增加等優勢，已成為近年來的研究熱點。由默克公司研制開發的磷酸西他列汀是美國食品藥品管理局(FDA)于2006年10月17日批準用于治療Ⅱ型糖尿病的首個DDP-4抑制劑。西格列汀2010年3月在中國上市，商品名為捷諾維。西格列汀分子量為523.32，分子式為C16H15F6N5O·H3PO4·H2O，化學名稱為7-[(3R)-3-氨基-1-氧-4-(2,4,5-三氟苯基)丁基]-5,6,7,8-四氫-3-(三氟甲基)-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪一水磷酸鹽，CAS號是654671-77-9，結構式：本品合成工藝中利用(R)-3-(叔丁氧羰基)氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸與3-三氟甲基-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]-三唑[4,3-a]并吡嗪鹽酸鹽在縮合試劑EDCI及HOBt作用下，合成了Boc-西他列汀，將其溶解在甲醇中，通入干燥的氯化氫氣體反應后，得到西他列汀鹽酸鹽，再利用氫氧化鈉水溶液中和，并利用有機溶劑萃取濃縮后得到西他列汀游離堿，然后在甲醇中與磷酸反應，形成西他列汀磷酸鹽。合成路線為：該合成路線的主要雜質為原料II-3((R)-3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-4-(2,4,5-trifluorophenyl)butanoi c acid)，原料II-2(3-(trifluoromethyl)-5,6,7,8-tetrahydro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazi ne)，中間體II-1((R)-3-amino-1-(3-(trifluoromethyl)-5,6-dihydro-[1,2,4]triazolo[4,3-a]pyrazin-7(8H)-yl)-4-(2,4,5-trifluorophenyl)butan-1-one)以及未知雜質。西格列汀作為治療Ⅱ型糖尿病的首個DDP-4抑制劑，有著重要作用，但是西格列汀有關物質的分析方法目前尚無文獻報道。
技術實現思路
針對現有技術中的上述技術問題，本專利技術提供了一種分離測定西格列汀有關物質的方法，所述的這種分離測定西格列汀及其有關物質的方法要解決現有技術中的測定西格列汀有關物質的方法靈敏度不高，不太準確的技術問題。本專利技術提供了一種分離測定西格列汀有關物質的方法，包括如下步驟：1)采用高效液相色譜儀，色譜柱溫度為20～30℃；以二極管陣列或者紫外吸收為檢測器，檢測波長為210nm；采用反相高效液相色譜法，按以下流動相條件進行梯度洗脫：流動相A為0.1～0.5mol/L磷酸二氫鉀緩沖液，用氫氧化鉀調節Ph＝6～7，流動相B為甲醇或乙腈，流動相流速為0.9～1.1mL/min；進樣量為10μL；2)一個配制空白溶液或者稀釋液的步驟，將流動相A為和流動相B按照體積比70：30配制；3)一個配制參比溶液(a)的步驟，稱取西格列汀標準品，精密稱定于容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得西格列汀的濃度為0.5mg/mL；4)一個配制參比溶液(b)的步驟，準確移取參比溶液(a)到容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，使得西格列汀濃度為0.5μg/mL；5)一個配制雜質定位溶液的步驟，稱取雜質II-1、II-2、II-3，精密稱定于容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，使得雜質II-1的濃度為100μg/mL，雜質II-2濃度為100μg/mL，雜質II-3濃度為100μg/mL；6)一個配制雜質儲備溶液的步驟，準確移取雜質定位溶液到容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得雜質II-1濃度為25μg/mL，雜質II-2濃度為25μg/mL，雜質II-3濃度為25μg/mL；7)一個配制分離度溶液的步驟，稱取西格列汀標準品，精密稱定于容量瓶中，先加少量的稀釋液溶解再加入雜質儲備溶液，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得西格列汀濃度為0.5mg/mL，雜質II-1濃度為0.5μg/mL，雜質II-2濃度為0.5μg/mL，雜質II-3濃度為0.5μg/mL；8)雜質計算：以主成分參比對照法計算雜質的含量，雜質總和＝∑(已知雜質+未知雜質)。其中，雜質II-1為((R)-3-氨基-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-(2,4,5-三氟苯基)-1-丁酮、雜質II-2為3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-[1,2,4]三唑[4,3-a]吡嗪、雜質II-3為(R)-3-((tert-叔丁氧基)胺基)-4-(2,4,5-三氟苯)丁酸。進一步的，所述的色譜柱為Phenomenex Luna 5μC18(2)100A柱，流速為1.0mL/min，柱溫為30℃。進一步的，所述的流動相的梯度設置為：初始的時候，流動相A和流動相B的體積比為82：18；6分鐘時，流動相A和流動相B的體積比為82：18；7分鐘時，流動相A和流動相B的體積比為69：31；18分鐘時，流動相A和流動相B的體積比為69：31；20分鐘時，流動相A和流動相B的體積比為30：70；30分鐘時，流動相A和流動相B的體積比為30：70。本專利技術采用高效液相色譜儀，以PhenomenexLunaC18(2)100A柱為色譜柱，以乙腈和pH＝6～7的磷酸鹽緩沖液作為流動相，在波長210nm下進行梯度洗脫。具體的，所述的主成分參比對照法計算雜質的含量的技術為本領域的技術人都熟知的技術，在此不再贅述。本專利技術分析速度快、分離效果好、而且成本低廉，對西格列汀原料藥有關物質進行了測定和檢查。該方法對有關物質檢出率高，精密度高，重復性和回收率良好，且該方法通過驗證，可用于西格列汀原料藥和制劑的常規分析和質量控制。本專利技術的方法方便快捷，結果準確可靠，并同時提高了有關物質的定量分析的靈敏度。本專利技術和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本專利技術的方法，省時省力，精密度高，含量測定結果準確。另外，經過了嚴格的方法驗證，可以滿足了研發和生產的需要，為西格列汀在國內早日上市提供了必要的技術支持。附圖說明圖1是空白溶液的液相色譜圖。圖2是分離度溶液液相色譜圖。圖3是雜質II-2定位溶液液相色譜圖。圖4是雜質II-3定位溶液液相色譜圖。圖5是雜質II-1定位溶液液相色譜圖。圖6是雜質II-2線性關系圖。圖7是未知雜質線性關系圖。圖8是雜質II-3線性關系圖。圖9是雜質II-1線性關系圖。具體實施方式下面通過具體實施例子并結合附圖對本專利技術進一步闡述，但并不限制本專利技術。實施例1系統實用性儀器:Agilent1260；色譜柱：Luna 5μC18(2)100A 250×4.6mm，廣州費羅門科學儀器有限公司。流動相流速為1.0mL/min本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種分離測定西格列汀有關物質的方法，其特征在于包括如下步驟：1）采用高效液相色譜儀，色譜柱溫度為20～30℃；以二極管陣列或者紫外吸收為檢測器，檢測波長為210nm；采用反相高效液相色譜法，按以下流動相條件進行梯度洗脫：流動相A為0.1～0.5mol/L磷酸二氫鉀緩沖液，用氫氧化鉀調節Ph=6～7，流動相B為甲醇或乙腈，流動相流速為0.9～1.1mL/min；進樣量為10μL；2）一個配制空白溶液或者稀釋液的步驟，將流動相A為和流動相B按照體積比70：30配制；3）一個配制參比溶液（a）的步驟，稱取西格列汀標準品，精密稱定于容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得西格列汀的濃度為0.5mg/mL；4）一個配制參比溶液（b）的步驟，準確移取參比溶液（a）到容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，使得西格列汀濃度為0.5μg/mL；5）一個配制雜質定位溶液的步驟，稱取雜質((R)?3?氨基?1?(3?(三氟甲基)?5,6?二氫?[1,2,4]三唑[4,3?a]吡嗪?7(8H)?基)?4?(2,4,5?三氟苯基)??1?丁酮、3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪、?(R)?3??((tert?叔丁氧基)?胺基)?4?(2,4,5?三氟苯)丁酸，精密稱定于容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，使得雜質((R)?3?氨基?1?(3?(三氟甲基)?5,6?二氫?[1,2,4]三唑[4,3?a]吡嗪?7(8H)?基)?4?(2,4,5?三氟苯基)??1?丁酮、3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪的濃度為100μg/mL，雜質3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪的濃度為100μg/mL，雜質(R)?3??((tert?叔丁氧基)?胺基)?4?(2,4,5?三氟苯)丁酸的濃度為100μg/mL；6）一個配制雜質儲備溶液的步驟，準確移取雜質定位溶液到容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得雜質((R)?3?氨基?1?(3?(三氟甲基)?5,6?二氫?[1,2,4]三唑[4,3?a]吡嗪?7(8H)?基)?4?(2,4,5?三氟苯基)??1?丁酮、3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪d?濃度為25μg/mL，雜質3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪的濃度為25μg/mL，雜質(R)?3??((tert?叔丁氧基)?胺基)?4?(2,4,5?三氟苯)丁酸的濃度為25μg/mL；7）一個配制分離度溶液的步驟，稱取西格列汀標準品，精密稱定于容量瓶中，先加少量的稀釋液溶解再加入雜質儲備溶液，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得西格列汀濃度為0.5mg/mL，雜質((R)?3?氨基?1?(3?(三氟甲基)?5,6?二氫?[1,2,4]三唑[4,3?a]吡嗪?7(8H)?基)?4?(2,4,5?三氟苯基)??1?丁酮、3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪的濃度為0.5μg/mL，雜質3?(三氟甲基)?5,?6,?7,?8?四氫?[1,?2,?4]三唑[4,?3?a]吡嗪的濃度為0.5μg/mL，雜質(R)?3??((tert?叔丁氧基)?胺基)?4?(2,4,5?三氟苯)丁酸的濃度為0.5μg/mL；8）雜質計算：以主成分參比對照法計算雜質的含量；雜質總和=∑（已知雜質+未知雜質）。...
【技術特征摘要】
1.一種分離測定西格列汀有關物質的方法，其特征在于包括如下步驟：1）采用高效液相色譜儀，色譜柱溫度為20～30℃；以二極管陣列或者紫外吸收為檢測器，檢測波長為210nm；采用反相高效液相色譜法，按以下流動相條件進行梯度洗脫：流動相A為0.1～0.5mol/L磷酸二氫鉀緩沖液，用氫氧化鉀調節Ph=6～7，流動相B為甲醇或乙腈，流動相流速為0.9～1.1mL/min；進樣量為10μL；2）一個配制空白溶液或者稀釋液的步驟，將流動相A為和流動相B按照體積比70：30配制；3）一個配制參比溶液（a）的步驟，稱取西格列汀標準品，精密稱定于容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得西格列汀的濃度為0.5mg/mL；4）一個配制參比溶液（b）的步驟，準確移取參比溶液（a）到容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，使得西格列汀濃度為0.5μg/mL；5）一個配制雜質定位溶液的步驟，稱取雜質((R)-3-氨基-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-(2,4,5-三氟苯基) -1-丁酮、3-(三氟甲基)-5, 6, 7, 8-四氫-[1, 2, 4]三唑[4, 3-a]吡嗪、 (R)-3- ((tert-叔丁氧基) 胺基)-4-(2,4,5-三氟苯)丁酸，精密稱定于容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，使得雜質((R)-3-氨基-1-(3-(三氟甲基)-5,6-二氫-[1,2,4]三唑[4,3-a]吡嗪-7(8H)-基)-4-(2,4,5-三氟苯基) -1-丁酮、3-(三氟甲基)-5, 6, 7, 8-四氫-[1, 2, 4]三唑[4, 3-a]吡嗪的濃度為100μg/mL，雜質3-(三氟甲基)-5, 6, 7, 8-四氫-[1, 2, 4]三唑[4, 3-a]吡嗪的濃度為100μg/mL，雜質(R)-3- ((tert-叔丁氧基) 胺基)-4-(2,4,5-三氟苯)丁酸的濃度為100μg/mL；6）一個配制雜質儲備溶液的步驟，準確移取雜質定位溶液到容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻，使得雜質((R)-3-氨基-1-(3-(三氟甲基)-...
【專利技術屬性】
技術研發人員：潘仙華，李勤勤，王亞萍，于萬盛，曹陽，
申請(專利權)人：上海應用技術學院，
類型：發明
國別省市：上海;31
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。