本發明專利技術涉及基因工程領域，具體涉及植酸酶突變體YeAPPA?L162V及其編碼基因和應用。將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的植酸酶的第162位的亮氨酸突變為纈氨酸。相比于野生型，本發明專利技術的植酸酶突變體YeAPPA?L162V的催化效率明顯提高，熱穩定和酸穩定性及蛋白酶抗性明顯改良，有利于發展高效綠色飼料酶工業。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及基因工程領域，具體涉及植酸酶突變體YeAPPA-L162V及其編碼基因和應用。
技術介紹
豆類、谷類等作物動物飼料的主要原料，其中的磷主要以植酸形式存在。植酸不但不能被單胃動物所利用，而且還能夠與金屬陽離子、氨基酸、蛋白質和淀粉等形成復合物從而抑制營養的吸收、影響動物的生產性能，沒有被動物消化吸收的植酸磷排到土壤和水體當中會造成環境污染。在飼料里添加植酸酶能降解植酸生成無機磷和磷酸肌醇，從而提高氨基酸、蛋白質和礦物質元素等營養物質的消化吸收，同時還可以降低植酸所帶來的環境污染。因此植酸酶受到世界學術界和商業界的廣泛關注。植酸酶作為飼料添加劑具有廣闊的應用前景和巨大的商業價值，而目前所生產銷售的植酸酶不能完全滿足工業需求，大多具有熱穩定性差、催化效率低和pH作用范圍窄等缺點。科研工作者多年來致力于基因工程和蛋白質工程研究，希望能改造或合成出綜合性質比天然植酸酶更加優良的新型植酸酶。定點突變技術可以改造植酸酶結構和生物學功能，明確特定氨基酸殘基在影響植酸酶酶學性質方面的重要功能，深化植酸酶催化機理的認識，并可獲得性質改良的新酶，對分子設計具有重要的指導意義。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種催化效率提高且熱穩定性改良的植酸酶。本專利技術另一目的是提供編碼上述催化效率提高且熱穩定性改良的植酸酶基因。本專利技術的另一目的是提供包含上述催化效率提高且熱穩定性改良的植酸酶基因的重組載體。本專利技術的另一目的是提供包含上述催化效率提高且熱穩定性改良的植酸酶基因的重組菌株。本專利技術的另一目的是提供上述催化效率提高且熱穩定性改良的植酸酶基因的應用。本專利技術對小腸結腸炎耶爾森氏菌(Yersinia enterocolitica)來源植酸酶YeAPPA基因進行定點突變，該植酸酶YeAPPA的成熟蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，該成熟蛋白是由如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列編碼的。SEQ ID NO.1MSVAKRNLHLSALTLIMGCFTAGAAPIATPPASYTLERVVILSRHGVRSPTKQTQLMNDVTPDKWPLWPVKAGYLTPRRAELVTLMGGFYGDYFRSQGLLSAGCPVDGSVYAQADVDQRTRLTGQAFLDGIAPDCGLKVHYQADLKKVDPLFHTVEAGVCKLDSAKTHQAVEERLGGPLSDLSQRYAKPFAQMGEVLNFAASPYCKSLQKNGKTCDFATFTANEIKVNEEGTKVSLSGPLALSSTLGEIFLLQDSQAMPDVAWHRLSGEENWVSLLSLRNAQFDLMAKTPYIARHKGTPLLQQIDTALVLQRDAQGQTLPLSPQTKLLFLGGHDTNIANIAGMLGANWQLPQQPDNTPPGGGLVFELWQNPDNHQRYVAVKMFYQTMDQLRNAEKLDMKNNPAKIVPITIEGCENEGDNKLCQLETFQKKVAQVIEPACHI.SEQ ID NO.2Atgtcagttgcaaagagaaatctgcacttatccgcactcactttgataatgggctgttttaccgcaggtgctgccccgattgctacaccgccggccagctacacattagagcgtgtggttattttgagtcgacatggtgttcgctccccgacaaaacaaacccagctaatgaatgatgtcacacctgataaatggcccctgtggccagtaaaagcgggctatttaacaccgcgaagggctgagttagtgactttgatggggggattttatggtgattatttccgcagccaagggttgttgtctgcggggtgtccggtagatggctccgtttatgcacaggcagatgttgaccaacgaacccgcttaaccggacaggcattcttggatgggatcgcaccggattgtggtctgaaagtacattatcaggctgatttgaagaaagttgacccgctatttcataccgtcgaagcgggggtctgtaaactggactcagcgaaaactcatcaggctgttgaggagcgattgggcgggccattgagtgatcttagccagcgctatgccaaaccctttgctcagatgggcgaagtgctgaattttgcagcatcgccttattgcaagtcattgcaaaaaaatggaaaaacctgtgattttgcaacttttacggcaaatgaaattaaggtaaacgaagaaggtactaaagtttctctgagtgggccattggcactatcgtcgacattgggtgaaattttcctgttacaagactcacaagctatgccggatgtggcctggcatcggctcagcggtgaagagaactgggtttcgctattgtcgttgcgcaatgcgcaatttgatttgatggccaaaaccccgtatatcgctcgccataaagggaccccgctgttgcaacaaattgatacggcattagtgctgcaacgcgatgcccaagggcaaacactgccgctgtcaccgcaaaccaaattgctgttcctcggcgggcatgacaccaatattgctaatatcgctggtatgttaggggccaattggcaattaccacagcaacctgataataccccgcctggtggcggattagtctttgagctatggcagaacccagataatcatcagcgctatgtcgccgtgaaaatgttctatcaaacgatggatcagctgcgaaatgccgagaaattagatatgaaaaacaacccagctaaaattgttccaattaccattgaaggttgtgagaacgagggtgataacaaactttgccaacttgagactttccaaaagaaagttgcccaagtgatcgagccagcctgccatatttaa本專利技術采用定點突變的方法，獲得了催化效率提高且熱穩定性改良的突變體，命名為YeAPPA-L162V，即YeAPPA的第162位的亮氨酸突變為纈氨酸。因此根據本專利技術的催化效率提高且熱穩定性改良的植酸酶突變體YeAPPA-L162V，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示SEQ ID NO.3MSVAKRNLHLSALTLIMGCFTAGAAPIATPPASYTLERVVILSRHGVRSPTKQTQLMNDVTPDKWPLWPVKAGYLTPRRAELVTLMGGFYGDYFRSQGLLSAGCPVDGSVYAQADVDQRTRLTGQAFLDGIAPDCGLKVHYQADLKKVDPLFHTVEAGVCKVDSAKTHQAVEERLGGPLSDLSQRYAKPFAQMGEVLNFAASPYCKSLQKNGKTCDFATFTANEIKVNEEGTKVSLSGPLALSSTLGEIFLLQDSQAMPDV本文檔來自技高網...
【技術保護點】
植酸酶突變體YeAPPA?L162V，其特征在于，將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的植酸酶的第162位的亮氨酸突變為纈氨酸。
【技術特征摘要】
1.植酸酶突變體YeAPPA-L162V，其特征在于，將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的植酸酶的第162位的亮氨酸突變為纈氨酸。2.植酸酶突變體編碼基因YeAPPA-L162V，其特征在于，其編碼權利要求1所述的植酸酶突變體YeAPPA-L162V。3.根據權利要求2所述的植酸酶突變體編碼基因YeAPPA-L162V，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。4.包含權利要求2所述的植酸酶...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊培龍，牛燦芳，姚斌，聞治國，李秀梅，王亞茹，羅會穎，馬銳，
申請(專利權)人：中國農業科學院飼料研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11
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