本發(fā)明專利技術(shù)屬于組織工程的生物材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，該制備方法包括以下步驟：選取健康的哺乳動物、剝離動物皮膚、剔除毛發(fā)、制備斷層皮片、激光制孔、低溫凍融、超聲波振蕩、脫脂處理、脫細胞處理、浸泡水溶性殼聚糖、冷凍干燥、包裝和輻照滅菌后得到抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料。本發(fā)明專利技術(shù)的抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料具有膠原三維完整結(jié)構(gòu)，脫細胞徹底，制作周期短并且具有抗菌功能的特點。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物材料
，具體涉及一種抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法。
技術(shù)介紹
表皮、真皮、皮下組織共同構(gòu)成了人體的皮膚結(jié)構(gòu)，皮膚作為人體中最重要的器官之一，覆蓋在人體表面，具有防御功能、感知功能、免疫功能、吸收功能、調(diào)節(jié)體溫功能、排泄功能和分泌等功能。當人體皮膚受到損傷，特別是皮膚燒傷，燒傷后容易引起機體各種損害，比如免疫系統(tǒng)失調(diào)、水分和蛋白質(zhì)及其他細胞成分過度散失、新陳代謝加劇等，燒傷嚴重的還會危及生命。因此，傷后必須用創(chuàng)傷敷料將創(chuàng)面覆蓋，臨時起到皮膚屏障保護作用，并能促進創(chuàng)面愈合，這對大面積燒傷尤其重要。脫細胞真皮基質(zhì)敷料就是一種可以用于全層皮膚缺損的真皮替代物以及用于燒傷等皮膚損傷創(chuàng)面愈合的醫(yī)用敷料，它是天然皮膚經(jīng)過一系列處理去除了表皮和真皮中的細胞成分，但保留了真皮細胞外基質(zhì)成分和其三維空間結(jié)構(gòu)，這樣的結(jié)構(gòu)可以為皮膚再生提供“真皮模板”，誘導(dǎo)移植后宿主細胞成分如成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等在支架結(jié)構(gòu)中分化、生長。但傳統(tǒng)方法制得的脫細胞真皮基質(zhì)（ADM）敷料存在滲透性差、抗菌性能低、生物相容性差等缺點，這嚴重限制了脫細胞真皮基質(zhì)敷料在臨床上的廣泛應(yīng)用。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺點，提出一種制備具有抗菌性的脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，其特點在于采用健康哺乳動物皮膚為原料，依次經(jīng)過剔除毛發(fā)、制備斷層皮片、激光制孔、消毒滅菌、低溫凍融、超聲波振蕩、脫脂處理、脫細胞處理、浸泡水溶性殼聚糖、冷凍干燥、包裝和輻照滅菌后得到抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料。具有膠原三維結(jié)構(gòu)完整，脫細胞徹底，制作周期短并且具有抗菌功能的特點。本專利技術(shù)所提供的上述一種抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，包括以下步驟：對剝離的哺乳動物皮膚進行剔除毛發(fā)的處理；利用取皮器將處理好的動物皮膚制成厚度為0.5mm~1.5mm斷層皮片；采用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，所得孔均勻分布，其中孔徑0.1mm~0.5mm，孔距1.5mm~2.5mm；采用輻照滅菌技術(shù)對含孔的真皮基質(zhì)進行消毒滅菌，其中鈷60輻照劑量為25kGy~50kGy，輻照時間為10h~15h；將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于-30℃~-50℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍2~3h，再在-70℃~-80℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍2~3h后取出，置于37℃水浴中解凍1h，反復(fù)2~4次；將凍融處理的真皮基質(zhì)加入緩沖液中并用超聲波進行震蕩清洗，其中超聲波震蕩處理的頻次為3~7次，每次30分鐘；用質(zhì)量濃度為0.8%~2.0%NaOH溶液和質(zhì)量濃度為0.1%~0.6%表面活性劑混合液對清洗后的真皮基質(zhì)進行脫脂處理；用濃度為0.2%~3.0%TritonX-100對脫脂后的真皮基質(zhì)進行脫細胞處理；將脫細胞真皮基質(zhì)浸泡于濃度為0.5mg/ml~2.5mg/ml的水溶性殼聚糖溶液中；將上述浸泡過殼聚糖溶液的脫細胞真皮基質(zhì)放入冷凍干燥機進行冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)輻照消毒滅菌，即成抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料成品。本專利技術(shù)的優(yōu)點在于：所制得的抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料脫細胞徹底，抗原性低；利用激光制孔技術(shù)所獲得的均勻分布微孔真皮基質(zhì)利于脫細胞、脫脂以及浸泡水溶性殼聚糖后續(xù)處理；制備過程中未使用固定劑、交聯(lián)劑等，使得制得的脫細胞真皮基質(zhì)保留完整的網(wǎng)絡(luò)空間結(jié)構(gòu)；冷凍干燥過程中采取的梯度預(yù)冷凍程序保證得到的脫細胞真皮基質(zhì)力學(xué)性能好且可以很好的維持網(wǎng)絡(luò)空間結(jié)構(gòu)；脫脂處理使用的是陰離子表面活性劑，可以更好的達到脫去脂肪的目的；在脫細胞真皮基質(zhì)中復(fù)合具有抗菌功能的殼聚糖，不僅增加了脫細胞真皮基質(zhì)敷料的抗菌性而且可以增強脫細胞真皮基質(zhì)的止血性能以及促進傷口愈合性能。具體實施方式實施例一剝離健康新生豬皮膚，剔除毛發(fā)；用取皮器將處理好的新鮮豬皮制成厚度為0.8mm斷層皮片；用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，孔徑0.3mm，孔距2mm；再用鈷60對斷層皮片進行輻照消毒滅菌，劑量為30kGy，輻照時間為12h；將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于-40℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍3h，再在-75℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍3h后取出，置于37℃水浴中解凍1h，反復(fù)凍融3次；將凍融處理的真皮基質(zhì)加入緩沖液中并用超聲波進行震蕩清洗，其中超聲波震蕩處理的頻次為5次，每次30分鐘；再用質(zhì)量濃度為1.0%NaOH溶液和質(zhì)量濃度為0.4%十二烷基硫酸銨陰離子表面活性劑混合液對清洗后的真皮基質(zhì)進行脫脂處理；再用濃度為1.0%TritonX-100對脫脂后的真皮基質(zhì)進行脫細胞處理；再將脫細胞真皮基質(zhì)浸泡于濃度為1.5mg/ml的水溶性殼聚糖溶液中；最后將上述浸泡過殼聚糖溶液的脫細胞真皮基質(zhì)放入冷凍干燥機進行冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)輻照消毒滅菌，即成抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料成品。實施例二剝離健康新生豬皮膚，剔除毛發(fā)；用取皮器將處理好的新鮮豬皮制成厚度為0.5mm斷層皮片；用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，孔徑0.1mm，孔距1.5mm；再用鈷60對斷層皮片進行輻照消毒滅菌，劑量為25kGy，輻照時間為10h；將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于-30℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍2h，再在-70℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍2h后取出，置于37℃水浴中解凍1h，反復(fù)凍融2次；將凍融處理的真皮基質(zhì)加入緩沖液中并用超聲波進行震蕩清洗，其中超聲波震蕩處理的頻次為3次，每次30分鐘；再用質(zhì)量濃度為1.0%NaOH溶液和質(zhì)量濃度為0.1%脂肪醇羥乙基磺酸鈉陰離子表面活性劑混合液對清洗后的真皮基質(zhì)進行脫脂處理；再用濃度為0.2%TritonX-100對脫脂后的真皮基質(zhì)進行脫細胞處理；再將脫細胞真皮基質(zhì)浸泡于濃度為0.5mg/ml的水溶性殼聚糖溶液中；最后將上述浸泡過殼聚糖溶液的脫細胞真皮基質(zhì)放入冷凍干燥機進行冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)輻照消毒滅菌，即成抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料成品。實施例三剝離健康新生豬皮膚，剔除毛發(fā)；用取皮器將處理好的新鮮豬皮制成厚度為1.5mm斷層皮片；用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，孔徑0.5mm，孔距2.5mm；再用鈷60對斷層皮片進行輻照消毒滅菌，劑量為50kGy，輻照時間為15h；將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于-50℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍3h，再在-80℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍3h后取出，置于37℃水浴中解凍1h，反復(fù)凍融4次；將凍融處理的真皮基質(zhì)加入緩沖液中并用超聲波進行震蕩清洗，其中超聲波震蕩處理的頻次為7次，每次30分鐘；再用質(zhì)量濃度為2.0%NaOH溶液和質(zhì)量濃度為0.6%十二烷基磷酸酯陰離子表面活性劑混合液對清洗后的真皮基質(zhì)進行脫脂處理；再用濃度為3.0%TritonX-100對脫脂后的真皮基質(zhì)進行脫細胞處理；再將脫細胞真皮基質(zhì)浸泡于濃度為2.5mg/ml的水溶性殼聚糖溶液中；最后將上述浸泡過殼聚糖溶液的脫細胞真皮基質(zhì)放入冷凍干燥機進行冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)輻照消毒滅菌，即成抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料成品。對照例一剝離健康新生豬皮膚，剔除毛發(fā)；用取皮器將處理好的新鮮豬皮制成厚度為0.8mm斷層皮片；用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，孔徑0.3mm，孔距2mm；再用鈷60對斷層皮片進行輻照消毒滅菌，劑量為30kGy，輻照時間為12h；將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于-75℃的超低溫冰箱中預(yù)冷凍3h后取出，置于37℃水浴中解凍1h，反復(fù)凍融3次；將凍融處理的本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：a．對剝離的哺乳動物皮膚進行剔除毛發(fā)的處理；b.?利用取皮器將處理好的動物皮膚制成一定厚度的斷層皮片；c.?采用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，所得孔均勻分布；d.?采用輻照滅菌技術(shù)對含孔的真皮基質(zhì)進行消毒滅菌；e.?將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于低溫下進行冷融處理；f.?將凍融處理的真皮基質(zhì)加入緩沖液中并用超聲波進行震蕩清洗；g.?用堿液和表面活性劑混合液對清洗后的真皮基質(zhì)進行脫脂處理；h.?用TritonX?100對脫脂后的真皮基質(zhì)進行脫細胞處理；i.?將脫細胞真皮基質(zhì)浸泡于水溶性殼聚糖溶液中；j.?將上述浸泡過殼聚糖溶液的脫細胞真皮基質(zhì)放入冷凍干燥機進行冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)輻照消毒滅菌，即成抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料成品。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：a．對剝離的哺乳動物皮膚進行剔除毛發(fā)的處理；b.利用取皮器將處理好的動物皮膚制成一定厚度的斷層皮片；c.采用激光打孔技術(shù)對斷層皮片進行制孔，所得孔均勻分布；d.采用輻照滅菌技術(shù)對含孔的真皮基質(zhì)進行消毒滅菌；e.將消毒滅菌后的真皮基質(zhì)置于低溫下進行冷融處理；f.將凍融處理的真皮基質(zhì)加入緩沖液中并用超聲波進行震蕩清洗；g.用堿液和表面活性劑混合液對清洗后的真皮基質(zhì)進行脫脂處理；h.用TritonX-100對脫脂后的真皮基質(zhì)進行脫細胞處理；i.將脫細胞真皮基質(zhì)浸泡于水溶性殼聚糖溶液中；j.將上述浸泡過殼聚糖溶液的脫細胞真皮基質(zhì)放入冷凍干燥機進行冷凍干燥，成型包裝、再經(jīng)輻照消毒滅菌，即成抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料成品。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，其特征在于，步驟b所述的斷層皮片包括表皮層和真皮層，并且斷層皮片的厚度為0.5mm~1.5mm。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，其特征在于，步驟c所述激光制得的孔的孔徑為0.1mm~0.5mm，孔距為1.5mm~2.5mm。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗菌性脫細胞真皮基質(zhì)敷料的制備方法，其特征在于，步驟d所述輻照滅菌是鈷...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：盧亢，陳錦濤，吳帥，
申請(專利權(quán))人：廣東泰寶醫(yī)療科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東;44
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