一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法技術

本發明專利技術公開了一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法，首先采用乙腈對蜜柚外表皮、內表皮、內果皮及果肉等各部位中的化學組分進行提取，然后同時采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器和液相色譜?紫外檢測器進行檢測，對福建琯溪蜜柚各部位中化學組分進行色譜定性分析，準確地檢測出福建琯溪蜜柚中的蛇床子素、檸檬烯、α?亞油酸、棕櫚酸、谷甾醇、油酸酰胺和諾卡酮等特異性物質，成功建立蜜柚特異性物質色譜指紋圖譜。本發明專利技術方法操作簡單、定性準確、檢測快速，是一種全新的快捷、準確、簡易的蜜柚原產地溯源及品質鑒定方法。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于分析化學色譜法領域。具體是一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法，本方法同時利用氣相色譜和液相色譜法對福建琯溪蜜柚中的化學組分進行定性分析。
技術介紹
柚子(citrusjunostanaka)，又名文旦，是蕓香科柑橘亞科柚子屬植物，我國是世界上柚類種植面積最大，產量居第2位的生產大國。我國柚類品種資源豐富、品種(品系)繁多，目前主栽品種有蜜柚、琯溪蜜柚、玉環柚等，占全國柚子栽培面積的80％左右，種植面積均達0.37萬公頃以上，年產量超過1.2萬噸，主要分布于福建、浙江、臺灣、廣西、廣東等多個省份?，g溪蜜柚原產于福建省平和縣，已有500多年栽培歷史。1995年通過全國農作物品種審定委員會審定。2009年平和縣種植50多萬公頃，年總產量達100多萬噸，年創產值15億多元，成為福建省平和縣果業支柱產業，也是果農致富的重要途徑?，g溪蜜柚已先后注冊了“琯溪”商標、“平和琯溪蜜柚”證明商標，獲得了國家、“綠色食品”認證和國家質檢總局原產地標志認證，分別在美國、英國、法國等17個國家和地區進行商標國際注冊，被推薦為與歐盟交換保護的十大地理標志產品之一，被認定為“中國名牌農產品”，但是隨著柚子的營養價值和藥用價值日益受到重視，假冒名優品種柚子的現象時有發生，品質等級劃分和原產地的鑒定技術就顯得尤為重要。本專利技術同時利用氣相色譜和液相色譜技術手段對福建琯溪蜜柚的化學組分進行定性分析，成功建立蜜柚特異性物質色譜指紋圖譜。因此，建立一種簡單、準確、快速的色譜分析方法，對福建琯溪蜜柚子的原產地溯源和鑒定具有重要的意義。針對柚子的鑒定技術，目前，頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜聯用技術(中國農業大學學報,2011,16(6):52)，感官評價和氣質聯用技術(現代食品科技,2014,30(10):274)，化學成分系統預試法(中國民族民間醫藥，2010，5:35-36)，高效液相色譜-質譜聯用技術(色譜，2007，25(5):770-771)，色譜-質譜聯用技術(色譜，2016，34(6):558-566)等方法已被用于柚子的定性分析。頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜聯用技術簡單快速，適合檢測柚子中的揮發性成分，但不合適柚子中的非揮發性成分檢測；高效液相色譜-質譜聯用技術高效準確，適合柚子用的非揮發性成分檢測，但不適合揮發性成分的檢測。目前沒有發現報道對蜜柚采用氣相色譜或液相色譜法進行檢測鑒定。
技術實現思路
本專利技術為了克服現有鑒定技術的不足，提供一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法，對福建琯溪蜜柚中的化學組分定性鑒定。本專利技術解決上述技術問題的技術方案如下：一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法，首先采用乙腈對蜜柚外表皮、內表皮、內果皮及果肉等各部位中的有機物進行提取，然后同時采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器和液相色譜-紫外檢測器進行檢測，對福建琯溪蜜柚各部位中有機物進行色譜定性分析，準確地檢測出福建琯溪蜜柚中的蛇床子素、檸檬烯、α-亞油酸、棕櫚酸、谷甾醇、油酸酰胺和諾卡酮等特異性物質，成功建立蜜柚特異性物質色譜指紋圖譜：1)采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法，操作步驟如下：1.1)氣相色譜儀的色譜柱初始溫度為室溫，升溫速率10℃/min升至溫度50～280℃，為滿足試樣中所有成分的峰完全分離，結合各物質沸點，確定氣相色譜最優分析條件如下：氣相色譜分析儀分析條件色譜柱：30m×0.25mmDB-17色譜柱；載氣：N2；載氣流速：1mL/min；色譜柱溫度：120℃；進樣量：1μL；氣化室溫度：260℃；檢測器溫度：280℃；檢測器為FID檢測器；1.2)外標物溶液的配制：根據外標物的質量分數，分別稱取不同質量的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮，分別用乙腈加入到10mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成濃度為1000mg/L外標物溶液，并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標準外標溶液；1.3)檢測樣品的制備：準確稱取5g樣品(鮮重)于100mL離心管中，加入25mL乙腈，渦旋2min，超聲30min，4500r/min離心3min，抽取上清液1.5mL，經0.22μm微膜過濾，待測樣品的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮；2)采用液相色譜-紫外檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法，操作步驟如下：2.1)液相色譜儀以254nm為紫外吸收波長，梯度洗脫，為滿足試樣中所有成分的峰完全分離，結合各物質極性，確定液相色譜最優分析條件如下：液相色譜分析儀分析條件色譜柱：ZorbaxEclipseXDBC18250mm×4.6mm×5μm色譜柱；流動相：A為水相，B為乙腈；洗脫流速：1mL/min；色譜柱溫度：30℃；進樣量：10μL；梯度洗脫程序：水A％:乙腈B％為70:30，洗脫0～15min、水A％:乙腈B％為40:60，洗脫15～20min、水A％:乙腈B％為40:60，洗脫20～40min、水A％:乙腈B％為20:80，洗脫40～45min、水A％:乙腈B％為20:80，洗脫45～65min、水A％:乙腈B％為70:30，洗脫65～70min；檢測器為紫外檢測器；2.2)外標物溶液的配制：根據外標物的質量分數，分別稱取不同質量的檸檬烯、谷甾醇和油酸酰胺，分別用乙腈溶解加入到10mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成濃度為1000mg/L外標物溶液，并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標準外標溶液；2.3)檢測樣品的制備：準確稱取5g鮮樣品于100mL離心管中，加入25mL乙腈，渦旋2min，超聲30min，4500r/min離心3min，抽取上清液1.5mL，經0.22μm微膜過濾，待測樣品的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮。本專利技術的氣相色譜儀為Agilent7890A氣相色譜儀，色譜柱為分離效能高、分離速度快的石英毛細柱，運用氫火焰檢測器進行檢測，對樣品中的各組分與外標物進行一一對比，準確的檢測出福建琯溪蜜柚中的化學組分。液相色譜儀為Water-e2695高效液相色譜儀，色譜柱為ZorbaxEclipseXDBC18反相柱，運用紫外檢測器，對樣品中的各組分與外標物進行一一對比，準確的檢測出福建琯溪蜜柚中的化學組分。本專利技術與現有的技術相比，具有以下的優點：1.改變以往以感官評價的方法判斷柚子產地和品質在技術上科學性的不足。2.從色譜技術測定內涵物差異性上對蜜柚的產地、品質進行鑒定，結果更客觀，更準確更科學。3.同時采用氣相色譜和液相色譜技術，既可以檢測出揮發性物質，又可以檢測出極性物質，結果更科學可靠。4.在色譜柱不超載的范圍內，定性結果與進樣量重復性無關。5.操作簡單，定性準確，檢測快速，適用于蜜柚及其它柚子中化學組分的定性分析。附圖說明圖1為外標物蛇床子素的氣相色譜圖。圖2為外標物諾卡酮的氣相色譜圖。圖3為外標物棕櫚酸的氣相色譜圖。圖4為外標物α-亞油酸的氣相色譜圖。圖5混合標準外標物的氣相色譜圖。圖6為外標物谷甾醇的液相色譜圖。圖7為外標物油酸酰胺的液相色譜圖。圖8為外標物檸檬烯的液相色譜圖。圖9混合標準外標物的液相色譜圖。圖10為福建琯溪蜜柚外表皮樣品的氣相色譜圖。圖11為福建琯溪蜜柚內表皮樣品的氣相色譜圖本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法，其特征在于，首先采用乙腈對蜜柚外表皮、內表皮、內果皮及果肉等各部位中的有機物進行提取，然后同時采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器和液相色譜?紫外檢測器進行檢測，對福建琯溪蜜柚各部位中有機物進行色譜定性分析，準確地檢測出福建琯溪蜜柚中的蛇床子素、檸檬烯、α?亞油酸、棕櫚酸、谷甾醇、油酸酰胺和諾卡酮等特異性物質，成功建立蜜柚特異性物質色譜指紋圖譜；1)采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法，操作步驟如下：1.1)氣相色譜儀的色譜柱初始溫度為室溫，升溫速率10℃/min升至溫度50～280℃，為滿足試樣中所有成分的峰完全分離，結合各物質沸點，確定氣相色譜最優分析條件如下：氣相色譜分析儀分析條件色譜柱：30m×0.25mm?DB?17色譜柱；載氣：N2；載氣流速：1mL/min；色譜柱溫度：120℃；進樣量：1μL；氣化室溫度：260℃；檢測器溫度：280℃；檢測器為FID檢測器；1.2)外標物溶液的配制：根據外標物的質量分數，分別稱取不同質量的蛇床子素、α?亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮，分別用乙腈加入到10mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成濃度為1000mg/L外標物溶液，并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α?亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標準外標溶液；1.3)檢測樣品的制備：準確稱取5g樣品(鮮重)于100mL離心管中，加入25mL乙腈，渦旋2min，超聲30min，4500r/min離心3min，抽取上清液1.5mL，經0.22μm微膜過濾，待測樣品的蛇床子素、α?亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮；2)采用液相色譜?紫外檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法，操作步驟如下：2.1)液相色譜儀以254nm為紫外吸收波長，梯度洗脫，為滿足試樣中所有成分的峰完全分離，結合各物質極性，確定液相色譜最優分析條件如下：液相色譜分析儀分析條件色譜柱：Zorbax?Eclipse?XDB?C18?250mm×4.6mm×5μm色譜柱；流動相：A為水相，B為乙腈；洗脫流速：1mL/min；色譜柱溫度：30℃；進樣量：10μL；梯度洗脫程序：水A％:乙腈B％為70:30，洗脫0～15min、水A％:乙腈B％為40:60，洗脫15～20min、水A％:乙腈B％為40:60，洗脫20～40min、水A％:乙腈B％為20:80，洗脫40～45min、水A％:乙腈B％為20:80，洗脫45～65min、水A％:乙腈B％為70:30，洗脫65～70min；檢測器為紫外檢測器；2.2)外標物溶液的配制：根據外標物的質量分數，分別稱取不同質量的檸檬烯、谷甾醇和油酸酰胺，分別用乙腈溶解加入到10mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成濃度為1000mg/L外標物溶液，并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α?亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標準外標溶液；2.3)檢測樣品的制備：準確稱取5g鮮樣品于100mL離心管中，加入25mL乙腈，渦旋2min，超聲30min，4500r/min離心3min，抽取上清液1.5mL，經0.22μm微膜過濾，待測樣品的蛇床子素、α?亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮。...

【技術特征摘要】
1.一種采用色譜法鑒定福建琯溪蜜柚的方法，其特征在于，首先采用乙腈對蜜柚外表皮、內表皮、內果皮及果肉等各部位中的有機物進行提取，然后同時采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器和液相色譜-紫外檢測器進行檢測，對福建琯溪蜜柚各部位中有機物進行色譜定性分析，準確地檢測出福建琯溪蜜柚中的蛇床子素、檸檬烯、α-亞油酸、棕櫚酸、谷甾醇、油酸酰胺和諾卡酮等特異性物質，成功建立蜜柚特異性物質色譜指紋圖譜；1)采用氣相色譜儀、氫火焰離子檢測器鑒定福建琯溪蜜柚的方法，操作步驟如下：1.1)氣相色譜儀的色譜柱初始溫度為室溫，升溫速率10℃/min升至溫度50～280℃，為滿足試樣中所有成分的峰完全分離，結合各物質沸點，確定氣相色譜最優分析條件如下：氣相色譜分析儀分析條件色譜柱：30m×0.25mmDB-17色譜柱；載氣：N2；載氣流速：1mL/min；色譜柱溫度：120℃；進樣量：1μL；氣化室溫度：260℃；檢測器溫度：280℃；檢測器為FID檢測器；1.2)外標物溶液的配制：根據外標物的質量分數，分別稱取不同質量的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮，分別用乙腈加入到10mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配成濃度為1000mg/L外標物溶液，并配成濃度為100mg/L的蛇床子素、α-亞油酸、棕櫚酸和諾卡酮的混合標準外標溶液；1.3)檢測樣品的制備：準確稱取5g樣品(鮮重)于100mL離心管中，加入25mL乙腈，渦旋2min，超聲30min，4500r/min離心3min，抽取上清液1.5mL，經0.22μm微...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李雪生，宋世明，陳兆杰，
申請(專利權)人：廣西大學，
類型：發明
國別省市：廣西;45