Fc受體結(jié)合蛋白制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)的名稱為Fc受體結(jié)合蛋白。本申請的技術(shù)領域涉及結(jié)合Fc受體的蛋白。對IgG與FcRn結(jié)合的抑制通過阻止IgG再循環(huán)負面地改變了IgG的血清半衰期。阻止IgG再循環(huán)可具有許多治療應用。因此，公開了結(jié)合FcRn的抗體和使用這些抗體的方法。在一個實施方式中，提供了一種檢測受試者中FcRn的方法，所述方法包括：向受試者施用抗-FcRn抗體，并且如果存在，檢測所述抗體和所述FcRn之間的相互作用。抗-FcRn抗體特征為在DX2504抗體的CH結(jié)構(gòu)域中半胱氨酸突變和/或C-末端賴氨酸缺失中的至少一種。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本申請為申請日是2012年6月1日、申請?zhí)柺?01280031902.0(PCT/US2012/040409)、專利技術(shù)名稱為“Fc受體結(jié)合蛋白”的中國申請的分案申請。相關申請本申請根據(jù)35U.S.C.§119要求2011年6月2日提交的美國臨時申請No.61/492,617和2011年6月17日提交的美國臨時申請No.61/498,266的優(yōu)先權(quán)。兩篇臨時申請的全部內(nèi)容以引用的方式整體并入本文。專利
本專利技術(shù)的領域涉及結(jié)合Fc受體的蛋白。專利技術(shù)背景血清中最豐富的抗體同種型是IgG，并且它在介導對病原體的保護以及介導加速免疫系統(tǒng)組分向組織、粘膜和真皮表面的募集的過敏和炎癥反應中具有關鍵作用(Junghans,ImmunologicResearch16(1):29(1997))。此外，它也是多種自身免疫性疾病的關鍵組分。在正常條件下，IgG在血清中的半衰期范圍為小鼠內(nèi)5至7天和人體內(nèi)22至23天，這相對于其它血漿蛋白的血清半衰期而言是較長的時間。在某種程度上，這發(fā)生是因為新生兒FcRn受體(FcRn)從降解的溶酶體中援救出被胞飲的IgG并且將其再循環(huán)回到細胞外室(Junghans和Anderson,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:5512(1996),Roopenian等，J.Immunology170:3528(2003))。FcRn結(jié)合IgG的Fc部分。IgG的Fc區(qū)域和FcRn之間的相互作用是pH依賴性的。通過液相內(nèi)吞作用進入細胞后，IgG被封存到胞內(nèi)體中，并在酸性pH(6～6.5)下以高親和力結(jié)合FcRn；當IgG-FcRn復合物循環(huán)到質(zhì)膜上，在微堿性pH(～7.4)下在血流中IgG與FcRn迅速解離。通過這種受體介導的再循環(huán)機制，F(xiàn)cRn從降解的溶酶體中有效援救出IgG，從而延長了循環(huán)IgG的半衰期。FcRn是非共價的異源二聚體，其通常位于內(nèi)皮細胞和上皮細胞的胞內(nèi)體中。它是單跨膜的膜結(jié)合受體，具有三個重鏈α結(jié)構(gòu)域(α1、α2和α3)和一個單一的可溶性輕鏈β2-微球蛋白(β2M)結(jié)構(gòu)域。在結(jié)構(gòu)上，它屬于具有β2M作為共同輕鏈的主要組織相容性復合物1類分子家族。FcRnα鏈是由包含α1、α2和α3重鏈結(jié)構(gòu)域的細胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜區(qū)域和相對短的胞質(zhì)尾區(qū)組成的46kD蛋白(Burmeister等，Nature372:366(1994))。FcRn首次在新生大鼠腸道中鑒定出，F(xiàn)cRn在其中起作用以介導從母乳中對IgG抗體的吸收，并且促進其運輸?shù)窖h(huán)系統(tǒng)(Leach等，JImmunol157:3317(1996))。FcRn也已從人胎盤中分離，其中FcRn也介導母體IgG吸收和運輸?shù)教パh(huán)。在成人中，F(xiàn)cRn在包括肺上皮組織、小腸、腎，以及鼻、陰道和膽道發(fā)辮表面(biliarytresssurfaces)的許多組織中表達(美國專利第6,030,613號和第6,086,875號；Israel等，Immunology92:69(1997)；Kobayashi等，AmJPhysiol(2002)；RenalPhysiol282:F358(2002))。為了研究FcRn對IgG動態(tài)平衡的貢獻，已將小鼠工程改造為使得編碼β2M和FcRn重鏈的基因的至少部分已被“敲除”，以便不表達這些蛋白(WO02/43658；Junghans和Anderson,ProcNat1AcadSciUS93:5512(1996))。在這些小鼠中，IgG的血清半衰期和濃度急劇降低，這表明IgG動態(tài)平衡的FcRn依賴性機制。還表明，抗-人FcRn抗體可以在這些FcRn敲除小鼠中產(chǎn)生，并且這些抗體可以阻止IgG與FcRn結(jié)合。然而，這樣的抗體還未產(chǎn)生或未經(jīng)測試(WO02/43658)。對IgG與FcRn結(jié)合的抑制通過阻止IgG再循環(huán)而負面地改變了IgG的血清半衰期。已證實此原理在自身免疫性皮膚大皰疾病的小鼠模型中治療上有效(Li等，JClinInvest115:3440-3450(2005))。因此，阻斷或拮抗IgG與FcRn結(jié)合的試劑可以用于治療或阻止以存在不當調(diào)節(jié)的IgG抗體為特征的自身免疫和炎性疾病或病癥。在大鼠被動模型中，在30mg/kg劑量下，拮抗性抗-大鼠FcRn單克隆抗體(mAb)lG3以成功阻止了實驗性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)；該劑量比用于治療MG、SLE和ITP的靜脈內(nèi)IgG(IVIG)低約100倍。另外，發(fā)生如紅斑狼瘡或關節(jié)炎的自身免疫病癥有遺傳性傾向的FcRn-缺陷性小鼠在疾病的嚴重性上顯著降低。專利技術(shù)概述本公開提供了結(jié)合人Fc受體的分離的抗體、編碼這些抗體的核酸以及使用這些抗體以檢測FcRn的存在、調(diào)節(jié)Fc受體活性和治療自身免疫病癥的方法。因此，本公開的一個方面的特征是與人FcRn結(jié)合的分離的抗體。這種抗-FcRn抗體包含輕鏈可變區(qū)(VL)，該區(qū)包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3區(qū)，其中VLCDR3區(qū)與SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)的VLCDR3區(qū)具有至少85％(例如90％或95％)的同源性。任選地，抗-FcRn抗體的VLCDR1和VLCDR2分別與VLCDR1區(qū)TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)和VLCDR2區(qū)GDSQRPS(SEQIDNO:15)具有至少85％(例如90％或95％)的同源性。抗-FcRn抗體在至少一個CDR3區(qū)，例如VLCDR3區(qū)中至少一個的第一位上不具有半胱氨酸。在一些實施方案中，上述抗-FcRn抗體包含與TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)具有至少90％同源性的VLCDR1、與GDSQRPS(SEQIDNO:15)具有至少90％同源性的VLCDR2，和/或與SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)具有至少90％同源性的VLCDR3。在一個實施例中，抗-FcRn抗體包含VLCDR1區(qū)TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)、VLCDR2區(qū)GDSQRPS(SEQIDNO:15)，和/或VLCDR3區(qū)SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)。在其它實施方案中，本文公開的分離的抗-FcRn抗體包含VL，該VL包含與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11具有至少85％(例如至少90％、95％或98％)同源性的氨基酸序列。在一個實施例中，分離的抗體的VL包含SEQIDNO:10或SEQIDNO:11的氨基酸序列。本公開的另一個本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種結(jié)合人FcRn的分離的抗體，所述分離的抗體包含輕鏈可變區(qū)(VL)，其包含VL?CDR1、VL?CDR2和VL?CDR3，其中所述VL?CDR3與下列序列具有至少85％的同源性：SSYAGSGIYV(SEQ?ID?NO:12)或ASYAGSGIYV(SEQ?ID?NO:13)，并且其中所述分離的抗體在至少一個CDR3區(qū)的第一位上不具有半胱氨酸。

【技術(shù)特征摘要】
2011.06.02 US 61/492,617;2011.06.17 US 61/498,2661.一種結(jié)合人FcRn的分離的抗體，所述分離的抗體包含輕鏈可變區(qū)(VL)，其包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3，
其中所述VLCDR3與下列序列具有至少85％的同源性：SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或
ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)，并且
其中所述分離的抗體在至少一個CDR3區(qū)的第一位上不具有半胱氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述VLCDR1和VLCDR2分
別與TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)和GDSQRPS(SEQIDNO:15)具有至少85％的同源性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的分離的抗體，其中：
所述VLCDR1與TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)具有至少90％的同源性，
所述VLCDR2與GDSQRPS(SEQIDNO:15)具有至少90％的同源性，和/或
所述VLCDR3與SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)具有至少
90％的同源性。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的分離的抗體，其中：
(a)所述VLCDR1是TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)，
(b)所述VLCDR2是GDSQRPS(SEQIDNO:15)，和/或
(c)所述VLCDR3是SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的分離的抗體，其中：
所述VLCDR1是TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)，
所述VLCDR2是GDSQRPS(SEQIDNO:15)，和
所述VLCDR3是SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述VL包含
與SEQIDNO:10或SEQIDNO:11具有至少85％的同源性的氨基酸序列。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述VL包含SEQIDNO:10
或SEQIDNO:11的氨基酸序列。
8.一種結(jié)合人FcRn的分離的抗體，所述抗體包含輕鏈可變區(qū)(VL)，其包含VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3區(qū)，
其中所述VLCDR3區(qū)與下列序列SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:
13)相比具有多達3種氨基酸替換，并且
其中所述分離的抗體在至少一個CDR3區(qū)的第一位上不具有半胱氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的分離的抗體，其中所述VLCDR1、VLCDR2和VLCDR3與下列序列
相比總共具有多達10種氨基酸替換：
(a)CDR1:TGTGSDVGSYNLVS(SEQIDNO:14)
(b)CDR2:GDSQRPS(SEQIDNO:15)
(c)CDR3:SSYAGSGIYV(SEQIDNO:12)或ASYAGSGIYV(SEQIDNO:13)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9中任一項所述的分離的抗體，其還包含重鏈可變區(qū)(VH)，其包含
VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，其中所述VHCDR3與LAIGDSY(SEQIDNO:24)具有至少85％的
同源性。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述VHCDR1和VHCDR2
分別與EYAMG(SEQIDNO:22)和SIGSSGGQTKYADSVKG(SEQIDNO:23)具有至少85％的同源
性。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的分離的抗體，其中：
(a)所述VHCDR1與EYAMG(SEQIDNO:22)具有至少90％的同源性，
(b)所述VHCDR2與SIGSSGGQTKYADSVKG(SEQIDNO:23)，具有至少90％的同源性，和/或
(c)所述VHCDR3與LAIGDSY(SEQIDNO:24)具有至少90％的同源性。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的分離的抗體，其中：
(a)所述VHCDR1是EYAMG(SEQIDNO:22)，
(b)所述VHCDR2是SIGSSGGQTKYADSVKG(SEQIDNO:23)，和/或
(c)所述VHCDR3是LAIGDSY(SEQIDNO:24)。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的分離的抗體，其中所述分離的抗體的所述VH包含與SEQID
NO:9具有至少85％同一性的氨基酸序列。
15.根據(jù)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：D·J·塞克斯頓，C·湯乎爾，M·維斯瓦納坦，
申請(專利權(quán))人：戴埃克斯有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US