重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法技術

本發明專利技術公開了重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法，包括(1)外植體處理、(2)愈傷組織誘導、(3)不定芽誘導、(4)不定芽增殖、(5)生根培養、(6)瓶苗外移培養，其特征在于：(2)中使用的培養基為MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(3)中使用的培養基為MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA)2mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(4)中使用的培養基為MS+吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(5)中使用的培養基為1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭0.8g/L。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及植物組織培養領域，具體地公開了重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法。
技術介紹
一品紅(EuphorbiaPulcherrima)別名“猩猩木”、“圣誕花”、“老來嬌”。屬于大戟科大戟屬常綠或半常綠灌木，原產墨西哥及中美洲，現在我國各地廣泛栽培利用。在人們生活水平日益上升的今天，高品質的一品紅品種將受到市場日益青睞。重瓣一品紅新品種錦上花是歷時17年對變異種進行培育、定型而形成的植物新品種，已獲得國家新品種權保護(品種權號：20110011)。其花形碩大，呈立體雙層皇冠狀的，給人“花上有花”、“錦上添花”的感覺。雖然粵北隆冬寒氣逼人，但一盆盆“錦上花”卻怒張著一簇簇艷紅寬大的花朵，一派喜氣歡騰的模樣，仿佛寒風中在綠枝熊熊燃燒的一團火焰。“錦上花”新品種已獲得國家花卉新品種權保護。這標志著在中國使用極其廣泛的“一品紅”花卉系列中，終于有了第一個具有中國知識產權的產品。“錦上花”新品種市場選育成果曾獲市科技進步一等獎，具有廣闊而良好的推廣應用前景。重瓣一品紅新品種錦上花母本植株極為稀少，而且其枝條較少，引種初期繁殖數量有限，采用傳統育苗技術進行新品種培育推廣時間將非常漫長。而利用組織培養技術進行工廠化育苗，不但可快速、大量繁殖，還可保持其優良性狀的穩定。組培技術的應用和推廣，將大幅度提高該品種繁育數量，縮短育苗時間，以滿足市場對該品種的需求。
技術實現思路
為了解決上述技術問題，本專利技術提供了重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法。本專利技術所采用的技術方案是：重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法，包括(1)外植體處理、(2)愈傷組織誘導、(3)不定芽誘導、(4)不定芽增殖、(5)生根培養、(6)瓶苗外移培養，其特征在于：(2)中使用的培養基為MS+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)2.0mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.5mg/L+萘乙酸(NAA)0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(3)中使用的培養基為MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA)2mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(4)中使用的培養基為MS+吲哚丁酸(IBA)0.3mg/L+6-芐氨基嘌呤(6-BA)0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(5)中使用的培養基為1/2MS+吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L+萘乙酸(NAA)1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭0.8g/L。進一步地，所述步驟(1)具體為：a)取母本的頂芽、腋芽或嫩葉，b)洗衣粉水沖洗，c)用小量的流動水沖洗整晚，d)用70％的酒精消毒5-6秒，e)無菌水沖洗5次，f)用0.1％的升汞消毒8分鐘，g)用無菌水沖洗5-6次，h)用干凈濾紙吸干表面水分。進一步地，所述步驟(1)中，選擇的外植體為切取3—5cm長帶有腋芽的莖段。進一步地，所述步驟(6)具體為：在生根培養基上培養二十天后，根部長出根后就把瓶苗在溫室內煉苗一星期，然后逐漸開瓶煉苗1-2天，即可將苗的根部培養基充分洗凈后，用800-1000倍的多菌靈溶液浸泡1-2分鐘，移栽至滅菌的土壤中，栽植后澆透水，濕度保持在93-97％。進一步地，所述步驟(6)中移栽后的幼苗的培養溫度小于28攝氏度。進一步地，所述步驟(6)中移栽后的幼苗的培養溫度為25-26攝氏度。進一步地，所述步驟(6)瓶苗外移培養成活后，每半個月施腐熟的花生麩水肥一次。本專利技術的有益效果為：“錦上花”是重瓣一品紅的上等品種，迄今為止還沒人通過組培技術來繁殖。與國內一品紅重瓣品種組培技術相比，本專利技術的一品紅新品種“錦上花”組培技術在生根方面有很大優勢，我們的生根率達到88％，而據國內有關機構報道其生根率僅為65％左右。因此，與國內一品紅組培技術相比，本專利技術的一品紅新品種“錦上花”組培技術達到了國內領先水平。重瓣一品紅新品種“錦上花”是一個相當高品質的品種，利用組織培養的方法是目前生物技術上最先進的方法，是在短期內能大量生產苗株的方法，其經濟效益是相當可觀的，值得我們大力推廣。為了更好地理解和實施，下面詳細說明本專利技術。具體實施方式【實施例1】主要技術措施和特點1、外植體的處理一品紅新品種“錦上花”組織培養快速繁殖的外植體以嫩葉(具有主葉脈)或頂芽、側芽、腋芽為好。當時把“錦上花”母本拿過來是正值韶關最冷的2月，因此把母體放在溫室養了2個月，同時在取才的前10天進行了控水。在下午的時候，剪取了母本的頂芽、腋芽還有嫩葉。首先用洗衣粉水沖洗干凈，然后放在水龍頭下以最小量的水下間斷沖洗一個晚上，第二天早上進行處理后接于培養基上。在接種前，用70％的酒精消毒5-6秒，用無菌水沖洗5次，再用0.1％的升汞消毒8分鐘，用無菌水沖洗5-6次。最后用干凈濾紙吸干外植體表面水分，接到誘導愈傷組織的培養基上。2、愈傷組織的誘導把處理好的外植體，接于愈傷組織的誘導培養基上。我們設置了兩個配方的培養進行對比，①MS+2-4D2.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L②MS+6BA0.8mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/LPH值都為5.8，都在25℃條件下培養25-30天。通過對比實驗，結果表明：采用MS+2-4D2.0mg/L+6BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L培養基，植體切口處長出許多愈傷組織，利用莖段誘導率達到90％，是一種適宜的錦上花愈傷組織誘導培養基。3、不定芽的誘導將愈傷組織轉移到不定芽的誘導培養基上，我們也設置了兩個培養基配方。①MS+6BA2mg/L+NAA1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L，②MS+6BA1mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L，PH值都為5.8，溫度在25℃，光照在2000LX條件下進行培養。通過對比實驗，結果表明：以MS+6BA0.35/L+IBA0.3/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L培養基為最佳。4、不定芽的增值要想有大量的生根苗，必需把不定芽大量增值。把誘導培養基上形成的叢生芽剪取下來，在無菌狀態下接種于增值培養基上。增值培養基我們設置了3個配方進行了試驗。①MS+IBA0.05mg/L+6BA0.05mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L，②MS+IBA0.3mg/L+6BA0.05mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L，③MS+IBA0.3mg/L+6BA0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L。通過對比實驗，結果表明：以1/2MS+IBA0.6mg/L++NAA1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L培養基為最佳，生根率達到88％。5、生根的培養有了大量的叢生芽后，就本文檔來自技高網...

【技術保護點】
重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法，包括(1)外植體處理、(2)愈傷組織誘導、(3)不定芽誘導、(4)不定芽增殖、(5)生根培養、(6)瓶苗外移培養，其特征在于：(2)中使用的培養基為MS+2,4?二氯苯氧乙酸2.0mg/L+6?芐氨基嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.3mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(3)中使用的培養基為MS+6?芐氨基嘌呤2mg/L+萘乙酸1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(4)中使用的培養基為MS+吲哚丁酸0.3mg/L+6?芐氨基嘌呤0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(5)中使用的培養基為1/2MS+吲哚丁酸0.6mg/L+萘乙酸1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭0.8g/L。

【技術特征摘要】
1.重瓣一品紅新品種錦上花的組織培養方法，包括(1)外植體處理、(2)愈傷組織誘導、(3)
不定芽誘導、(4)不定芽增殖、(5)生根培養、(6)瓶苗外移培養，其特征在于：(2)中
使用的培養基為MS+2,4-二氯苯氧乙酸2.0mg/L+6-芐氨基嘌呤0.5mg/L+萘乙酸0.3mg/L+
蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(3)中使用的培養基為MS+6-芐氨基嘌呤2mg/L+萘乙酸
1.0mg/L+蔗糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(4)中使用的培養基為MS+吲哚丁酸0.3mg/L+6-芐
氨基嘌呤0.35mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L；(5)中使用的培養基為1/2MS+吲哚丁酸
0.6mg/L+萘乙酸1.0mg/L+糖40g/L+卡拉膠6.5g/L+活性炭0.8g/L。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)具體為：a)取母本的頂芽、腋芽
或嫩葉，b)洗衣粉水沖洗，c)用小量的流動水沖洗整晚，d)用70％的酒精消...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李秋蘭，黃立軍，劉介東，張朝旺，姚為鋒，鐘灼坤，梁韶華，李小兵，陳世明，
申請(專利權)人：韶關市林業科學研究所，
類型：發明
國別省市：廣東;44