一種改良肝浸液培養基的制備方法技術

本發明專利技術提供一種改良肝浸液培養基的制備方法，步驟如下：稱取豬肝500g，洗凈、絞碎，加水500ml，加熱30分鐘，冷卻后絨布過濾，高壓滅菌115℃20分鐘，然后再用脫脂棉過濾，濾液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤蘚醇4g，氯化鈉5g，甘油20ml，血清20ml，瓊脂粉17g，另稱取硝酸鑭2g，加熱溶解到10ml蒸餾水中，待高壓滅菌后的培養基和加熱溶解的硝酸鑭冷卻至50℃時，將硝酸鑭倒入培養基中，余量加蒸餾水至1000ml；優點為：培養基不加瓊脂粉可用于布魯氏桿菌增菌；加入瓊脂粉可用于布魯氏桿菌分離，而且與血平板培養基相比較，更易觀察結果。

【技術實現步驟摘要】
一種改良肝浸液培養基的制備方法
本專利技術涉及微生物培養基領域，尤其涉及一種改良肝浸液培養基的制備方法。
技術介紹
苛養菌是一大類對環境、營養要求較苛刻的細菌，在普通環境中不能或難以生長，體外培養需添加特殊因子或其他營養成分。布魯氏菌即屬于苛養菌，也是人畜共患病菌。目前，布魯菌現增菌用肝浸液培養基和胰眎肉湯，分離用血平板，還沒有一種用于布魯桿菌增菌培養和分離培養的專用培養基。
技術實現思路
本專利技術的目的在于為解決現有技術的不足，而提供一種改良肝浸液培養基的制備方法。本專利技術新的技術方案是：一種改良肝浸液培養基的制備方法，包括以下組分組成：豬肝400-600g，蛋白眎3-7g,胨3-7g，酵母浸粉3-7g，葡萄糖6-14g，硝酸鑭1-3g，赤蘚醇3-6g，甘油10-30ml，氯化鈉3-7g，血清10-30ml，瓊脂12-22g，余量加蒸餾水至800-1100ml。所述質量配比為：豬肝500g，蛋白眎5g，胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，硝酸鑭2g,赤蘚醇4g,甘油20ml，氯化鈉5g，血清20ml，瓊脂17g，余量加蒸餾水至1000ml。步驟如下：稱取豬肝500g，洗凈、絞碎，加水500ml,加熱30分鐘，冷卻后絨布過濾，高壓滅菌115℃20分鐘，然后再用脫脂棉過濾，濾液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤蘚醇4g,氯化鈉5g，甘油20ml，血清20ml，瓊脂粉17g，另稱取硝酸鑭2g,加熱溶解到10ml蒸餾水中，待高壓滅菌后的培養基和加熱溶解的硝酸鑭冷卻至50℃時，將硝酸鑭倒入培養基中，余量加蒸餾水至1000ml。本專利技術的有益效果是：培養基不加瓊脂粉可用于布魯氏桿菌增菌；加入瓊脂粉可用于布魯氏桿菌分離，而且與血平板培養基相比較，無論是從顏色上、還是從菌落大小上都有明顯變化，更易觀察結果。具體實施方式下面對本專利技術作進一步的說明。一種改良肝浸液培養基的制備方法，包括以下組分組成：豬肝400-600g，蛋白眎3-7g,胨3-7g，酵母浸粉3-7g，葡萄糖6-14g，硝酸鑭1-3g，赤蘚醇3-6g，甘油10-30ml，氯化鈉3-7g，血清10-30ml，瓊脂12-22g，余量加蒸餾水至800-1100ml。一種改良肝浸液培養基的制備方法，所述質量配比為：豬肝500g，蛋白眎5g，胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，硝酸鑭2g,赤蘚醇4g,甘油20ml，氯化鈉5g，血清20ml，瓊脂17g，余量加蒸餾水至1000ml。一種改良肝浸液培養基的制備方法，步驟如下：稱取豬肝500g，洗凈、絞碎，加水500ml,加熱30分鐘，冷卻后絨布過濾，高壓滅菌115℃20分鐘，然后再用脫脂棉過濾，濾液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤蘚醇4g,氯化鈉5g，甘油20ml，血清20ml，瓊脂粉17g，另稱取硝酸鑭2g,加熱溶解到10ml蒸餾水中，待高壓滅菌后的培養基和加熱溶解的硝酸鑭冷卻至50℃時，將硝酸鑭倒入培養基中，余量加蒸餾水至1000ml。蛋白眎、胨5.0g，酵母浸粉5.0g，葡萄糖10.0g的加入量由正交試驗得來。見表1培養基各組分的確定：將菌種牛流產布魯氏菌生物1型制成1.5×106cfu/L菌懸液，各取菌懸液100ul，以滅菌的△型玻璃棒依次涂布接種到M1~M9培養基上，置37℃培養箱培養72h，然后取出，觀察布魯氏桿菌的生長情況。結果通過比較布魯氏菌在M5培養基上生長最好。經查證M5培養基各組分為：豬肝500g，蛋白眎胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖10g，氯化鈉5g，甘油20ml，血清（無布魯氏桿菌凝集素）20ml,余量加蒸餾水至1000ml，此培養基為改良肝浸液培養基。若加瓊脂粉17g，則為改良肝浸液瓊脂培養基。改良肝浸液培養基需碳水化合物量的優化試驗：按照培養基中碳水化合物量的不同（培養基中碳水化合物量值表見表3），制備9種培養基，進行試驗，這9種培養基暫命名為M1~M9。M1培養基的制作如下：稱取豬肝500g，洗凈、絞碎，加水500ml,加熱30min，冷卻后絨布過濾，高壓滅菌20磅20min，然后再用脫脂棉過濾，濾液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖4g，赤蘚醇4g，氯化鈉5g，甘油20ml，血清（無布氏桿菌凝集素）20ml，瓊脂粉17g，余量加蒸餾水至1000ml，加熱溶化，經115℃20min，高壓滅菌。M2~M9培養基的制作按表2第3行~10行里的組分（豬肝，蛋白眎、胨，酵母浸粉，氯化鈉，甘油，血清，瓊脂粉的量不變），依次制成。培養基各組分的確定：將菌種牛流產布氏桿菌生物1型制成1.5×108cfu/L，稀釋至1.5×106cfu/L，各取菌懸液100μl，以滅菌的△型玻璃棒依次涂布接種到M1~M9培養基上，置37℃培養箱培養96h，然后取出觀察結果，看以上布氏桿菌在各個配方培養基上的生長情況。結果：通過比較布氏桿菌在M7培養基上生長最好，經查證M7培養基各組分為豬肝500g，蛋白眎胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，赤蘚醇4g，氯化鈉5g，甘油20ml，血清（無布氏桿菌凝集素）20ml，此培養基為改良肝浸液培養基。若加瓊脂粉17g，則為改良肝浸液瓊脂培養基。硝酸稀土加入改良肝浸液培養基的試驗：稱取豬肝500g，洗凈、絞碎，加水500ml,加熱30min，冷卻后絨布過濾，高壓滅菌8磅20min，然后再用脫脂棉過濾，濾液中加入蛋白眎、胨5g，酵母浸粉5g，氯化鈉5g，甘油20ml，血清（無布氏桿菌凝集素）20ml，另稱取硝酸鑭2g，加熱溶解到10ml蒸餾水中，待高壓滅菌后的培養基和加熱溶解的硝酸鑭冷卻至50℃時，將硝酸鑭倒入培養基中，余量加蒸餾水至1000ml。將菌種牛流產布氏桿菌生物1型制成1.5×108cfu/L，稀釋至1.5×106cfu/L，各取菌懸液100μl，以滅菌的△型玻璃棒依次涂布接種到改良肝浸液瓊脂培養基上，置37℃培養箱培養96h，然后取出觀察結果。并與未加硝酸鑭相比較。結果：加硝酸鑭的比不加硝酸鑭的生長好。改良肝浸液培養基與血瓊脂平板的比較研究：將牛布氏桿菌生物1型制成1.5×108cfu/L，稀釋至1.5×106cfu/L，各取菌懸液100μl，以滅菌的△型玻璃棒依次涂布接種到改良肝浸液培養基、改良肝浸液瓊脂培養基和血瓊脂培養基上，置37℃培養96h，取出觀察結果，并做比較。結果：牛流產布氏桿菌在改良肝浸液培養基中37℃培養96h，呈白色沉淀生長；在改良肝浸液瓊脂培養基上，37℃培養96h，有乳白色，光滑濕潤，圓形隆起，大者直徑為3mm~4mm的菌落；血瓊脂上37℃培養120h，光滑濕潤，圓形隆起，大者直徑為2mm~3mm的灰白色菌落。該項研究應用菌種羊種布魯氏菌生物2型進行驗證：將羊種布魯氏菌生物2型制成1.5×108cfu/L，稀釋至1.5×106cfu/L，各取菌懸液100μl，（即1.5×108cfu/L的菌液10ml稀釋至1000ml，得到的是1.5×106cfu/L之菌液）以滅菌的△型玻璃棒依次涂布接種到M1～M9培養基上，翻轉平板，置37oC電熱恒溫培養箱培養96h，然后取出觀察結果，看以上布氏桿菌在各個配方培養基上的生長情況。結果改良肝浸液培養基驗證試驗生長情況符合實驗結果，即與試驗菌株在各培養基上生長情況結果一致。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種改良肝浸液培養基的制備方法，其特征在于：包括以下組分組成：豬肝400?600g，蛋白眎3?7g，胨3?7g，酵母浸粉3?7g，葡萄糖6?14g，硝酸鑭1?3g，赤蘚醇3?6g，甘油10?30ml，氯化鈉3?7g，血清10?30ml，瓊脂12?22g，余量加蒸餾水至800?1100ml。

【技術特征摘要】
1.一種改良肝浸液培養基的制備方法，其特征在于：包括以下組分組成：豬肝400-600g，蛋白眎3-7g，胨3-7g，酵母浸粉3-7g，葡萄糖6-14g，硝酸鑭1-3g，赤蘚醇3-6g，甘油10-30ml，氯化鈉3-7g，血清10-30ml，瓊脂12-22g，余量加蒸餾水至800-1100ml。2.一種改良肝浸液培養基的制備方法，其特征在于：所述質量配比為：豬肝500g，蛋白眎5g，胨5g，酵母浸粉5g，葡萄糖8g，硝酸鑭2g,赤蘚醇4g,甘油20ml，氯化鈉5g，血清20ml，瓊脂17...

【專利技術屬性】
技術研發人員：明儒成，李汝期，
申請(專利權)人：明儒成，
類型：發明
國別省市：山東,37