X?連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物及其應用，所述引物如SEQ?ID?NO.1～44所示。本發明專利技術所述的檢測引物及其試劑盒可用于檢測X?連鎖低血磷性佝僂病致病基因PHEX基因的突變體，可以快速方便地查出致病基因的攜帶者以及病人，也可應用于產前診斷，避免X?連鎖低血磷性佝僂病胎兒的出生，降低X?連鎖低血磷性佝僂病的發病率。
Phosphorus rickets disease gene X low blood chain mutation detection primer and Application
Detection and application of mutation primers phosphorus rickets disease gene X chain low blood, the primers such as SEQ ID NO.1 ~ 44 shows. The primers and kits for detection of PHEX gene X chain hypophosphatemic rickets disease gene for mutants, can quickly and easily find the pathogenic gene carriers and patients, but also can be applied to prenatal diagnosis, to avoid the X chain hypophosphataemic rickets and fetal birth, reduce disease X chain hypophosphatemic rickets rate.
【技術實現步驟摘要】
X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物及其應用
本專利技術屬生物
，具體涉及X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物及其應用。
技術介紹
低血磷性佝僂病是兒童常見的代謝性骨病，是由于血磷水平低和活性維生素D生成不足而引起骨骼礦化不良、骨軟化的一組疾病。其中X-連鎖低血磷性佝僂病是最常見的遺傳性低血磷性佝僂病，發病率約為1：20000，約占遺傳性低血磷性佝僂病的80％以上，其臨床特點主要包括生長發育遲緩，身材矮小、低磷血癥、骨骼鈣化缺陷、近曲腎小管重吸收磷障礙以及1,25-(OH)2-D3生成不足等。1995年國際合作研究組確定了XLH致病基因是位于X染色體上的PHEX基因，為存在于X染色體上的與內肽酶同源的磷調節基因。目前X-連鎖低血磷性佝僂病的治療以口服磷酸鹽制劑和骨化三醇。許多臨床研究證實，早期診斷后及時進行治療對患者的預后和生活質量的提高都至關重要，可以減輕患者骨骼畸形，升高血磷，增加成年期身高，維持正常的生長速率，使得下肢畸形逐步矯正，有助于牙齒的礦化，同時避免繼發性甲狀旁腺功能亢進、維生素D中毒所致高血鈣、高尿鈣等并發癥。但X-連鎖低血磷性佝僂病患者的臨床表現多樣，且嚴重程度差異很大，目前主要是靠臨床表現、實驗室檢查及家族史診斷，容易造成誤診而延誤治療。因此，從分子水平對患兒PHEX基因進行檢測，對患兒的早期治療及預后起重要作用。同時通過攜帶者和患者的產前診斷可避免X-連鎖低血磷性佝僂病胎兒的出生，對提高人口素質，減輕社會負擔有重要意義。
技術實現思路
解決的技術問題：本專利技術提供一種采用DNA測序技術檢測導致X-連鎖低血磷性佝僂病發病的PHEX基因是否突變的檢測引物及其應用。技術方案：X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物，如SEQIDNO.1～44所示。SEQIDNO.1～44所示的引物在制備檢測X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因試劑盒中的應用。一種檢測X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測試劑盒，包括如SEQIDNO.1～44所示的引物。試劑盒中還包括PCR擴增試劑、PCR產物純化試劑和DNA測序試劑。所述PCR擴增試劑為dNT和TaqDNA聚合酶。所述PCR產物純化試劑為醋酸鈉和乙醇溶液。所述DNA測序試劑為BigDyemix、EDTA溶液、乙醇溶液和HIDI溶液。有益效果：本專利技術所述的檢測引物及其試劑盒可用于檢測X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因PHEX基因的突變體，可以快速方便地查出致病基因的攜帶者以及病人，也可應用于產前診斷，避免X-連鎖低血磷性佝僂病胎兒的出生，降低X-連鎖低血磷性佝僂病的發病率。附圖說明圖1PHEX基因22個外顯子及側翼序列PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳圖。圖2是檢測的4例PHEX突變檢測陽性結果圖。通過本專利技術檢測了4例X連鎖低血磷性佝僂病患者，發現了4例PHEX突變檢測陽性患者，圖2顯示這4例PHEX突變檢測陽性結果，A為c.1157G>A突變，B為c.842T>A突變，C為c.1824_1825insGAAA突變，D為c.174_174delA。具體實施方式實施例1：本檢測試劑盒主要包括以下成分：1、PHEX基因第1到第22外顯子區PCR擴增與測序引物22對，見表1；2、常規PCR擴增試劑，如dNTP、TaqDNA聚合酶等；3、常規PCR產物純化試劑，如醋酸鈉、乙醇溶液等；4、常規DNA測序試劑，如BigDyemix、EDTA溶液、乙醇溶液、HIDI溶液等。表1PHEX基因22個外顯子PCR擴增引物本試劑盒的使用步驟包括：1、提取樣本的基因組DNA；2、PCR擴增：本專利技術中的PHEX基因序列來源于人類基因組DNA數據庫(NCBI，GenebankNG_007563.2)，根據PHEX基因的22個外顯子及側翼序列，應用引物設計軟件Primer5分別為22對外顯子設計引物。PCR反應擴增體系PCR反應條件：3、PCR產物鑒定配制1.0％瓊脂糖凝膠，PCR產物2μL。在恒壓120V，電泳30分鐘，EB染色后，在紫外燈下觀察。4、PCR產物純化將鑒定后的所有PCR產物按照以下操作步驟進行純化：⑴加入0.5倍體積醋酸鈉(pH＝5.2)、3倍體積無水乙醇，4度放置30分鐘，12000rpm離心30min，棄上清；⑵加入75％乙醇400μL，12000rpm離心20min，棄上清，室溫晾干5-10分鐘；⑶加入20μLddH2O溶解；經NANOdrop定量后，將其稀釋到5-10ng/μL的濃度。5、測序PCR反應PCR反應擴增體系：PCR反應條件：6、測序產物純化⑴每管依次加入5μL125mMEDTA和60μL無水乙醇，蓋好，震蕩4次，室溫放置15分鐘；⑵12000rpm，4度離心30min；⑶小心吸出離心后的上清，加入60μL提前配置好的70％乙醇，震蕩3s，12000rpm4度離心15min；⑷重復上一步一次后，打開管蓋，室溫放置15min，使酒精揮發干凈。7、ABI3130基因測序儀測序加入10μLHi-DiFormamide溶解上一步純化的DNA，在PCR儀上變性：95℃5min，立刻放入—20℃速凍1min，將全部液體轉移至96孔板上機。8、實驗結果：將測序結果與標準序列進行比對分析。本專利技術所述的試劑盒用于檢測X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因PHEX基因的突變體，可以快速方便地查出致病基因的攜帶者以及病人，也可應用于產前診斷，避免X-連鎖低血磷性佝僂病胎兒的出生，降低X-連鎖低血磷性佝僂病的發病率。以上所述，僅為本專利技術最佳實施方式，任何熟悉本
的技術人員在本專利技術披露的技術范圍內，可顯而易見地得到的技術方案的簡單變化或等效替換均落入本專利技術的保護范圍。SEQUENCELISTING<110>楊海軍<120>X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物及其應用<130><160>44<170>PatentInversion3.3<210>1<211>19<212>DNA<213>人工序列<400>1gccttggatgtcaacgcct19<210>2<211>21<212>DNA<213>人工序列<400>2cagccctatacctgtgttatg21<210>3<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>3ttggaataccgtgtcaacactg22<210>4<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>4gcatttcgtacttggtaaacctc23<210>5<211>23<212>DNA<213>人工序列<400>5ggcttggaaactggttgatatgg23<210>6<211>22<212>DNA<213>人工序列<400>6gagaagtcatgcttcaaatccc22本文檔來自技高網...
【技術保護點】
X?連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物，其特征在于如SEQ?ID?NO.1～44所示。
【技術特征摘要】
1.X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測引物，其特征在于如SEQIDNO.1～44所示。2.SEQIDNO.1～44所示的引物在制備檢測X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因試劑盒中的應用。3.一種檢測X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因突變檢測試劑盒，其特征在于包括如SEQIDNO.1～44所示的引物。4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于還包括P...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭必霞，張愛華，陳穎，王春莉，
申請(專利權)人：南京醫科大學附屬南京兒童醫院，
類型：發明
國別省市：江蘇,32
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