一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿及其制備方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，其包括無菌培養(yǎng)皿和測試片，測試片平鋪于無菌培養(yǎng)皿底部，測試片上添加有細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基，細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基每100mL含有胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氫二鉀0.05～0.1g、氯化鈉0.05～0.2g、磷酸二氫鉀0.2～0.4g、硫酸鎂0.2～0.4g、顯色酶解底物混合劑0.015～0.04g。本發(fā)明專利技術(shù)測試皿具有操作簡便、成本低廉、節(jié)省人力，檢測時間短等特點，并且測試皿陽性菌落顯紅色，菌落顯示清楚，判定結(jié)果簡單，檢測結(jié)果準確可靠，能在細菌菌落總數(shù)檢測中發(fā)揮重要作用。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿及其制備方法
本專利技術(shù)屬于快速檢測領(lǐng)域，涉及微生物檢測技術(shù)，具體涉及一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，以及該測試皿制備方法。
技術(shù)介紹
細菌廣泛存在于空氣、水和土壤中，是主要衛(wèi)生菌指標之一，有些細菌對人體有害，會刺激人體消化道、胃部等，嚴重的還可對肝臟造成損傷，造成食物中毒，危及生命安全。對于細菌菌落總數(shù)現(xiàn)行檢測技術(shù)主要采用《GB4789.2-2010食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》，該方法為平板法，具有檢測結(jié)果準確可靠的特點，是經(jīng)典的微生物檢測和鑒定方法，然而該方法耗時長，需要現(xiàn)配置培養(yǎng)基，操作步驟繁瑣，難以滿足快檢的實際要求。紙片法的出現(xiàn)，彌補了平板法的缺點，逐步成為微生物檢測和鑒定的主要方法和標準,2007年，PetrifilmTM測試片被正式列為中國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準，該方法正逐漸被越來越多的食品生產(chǎn)加工企業(yè)及各類檢測機構(gòu)所認可。3M創(chuàng)新有限公司公開了一項公告號為CN102985554B，名稱為快速檢測微生物的裝置的專利技術(shù)專利，該裝置的使用依賴于待測樣品的涂布和蓋膜操作，引入了因人為操作不當，導(dǎo)致判讀結(jié)果有誤的可能。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了彌補現(xiàn)有技術(shù)的不足及滿足實際檢測的需要，本專利技術(shù)提供了一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿及測試皿的制備方法。技術(shù)方案：快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，包括無菌培養(yǎng)皿和測試片，所述測試片平鋪于無菌培養(yǎng)皿底部，所述測試片上添加有細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基，所述細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基每100mL含有胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氫二鉀0.05～0.1g、氯化鈉0.05～0.2g、磷酸二氫鉀0.2～0.4g、硫酸鎂0.2～0.4g、顯色酶解底物混合劑0.015～0.04g。所述顯色酶解底物混合劑由2,3,5-氯化三苯基四氮唑與NBT按1～2:1比例溶解于N,N-二甲基甲酰胺得到的。所述測試片是直徑為50～70mm的無紡布。所述無菌培養(yǎng)皿是單次使用的培養(yǎng)皿。本專利技術(shù)的另一個目的還提供了一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿的制備方法，其包括如下步驟：a.配制細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基：每100mL按照以下方式配制，稱量胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氫二鉀0.05～0.1g、氯化鈉0.05～0.2g、磷酸二氫鉀0.2～0.4g、硫酸鎂0.2～0.4g，于燒杯中加蒸餾水100mL加熱攪拌溶解，在121℃高壓滅菌鍋條件下滅菌15min，冷卻至室溫后，加入經(jīng)過濾滅菌的顯色酶解底物混合劑0.015～0.04g，得到細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基，在0～4℃下冷藏備用；b.各組件的前處理測試片的前處理：輻照劑量為2KGy；無菌培養(yǎng)皿的前處理：輻照劑量為2KGy；c.測試皿的制備將經(jīng)步驟b處理后的測試片平鋪于無菌培養(yǎng)皿的底部后，置于平面超凈工作臺上，用紫外線照射30min，然后將步驟a的得到的細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基均勻添加于測試片上，于35～95℃烤制4h后，蓋上無菌培養(yǎng)皿上蓋，得到快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，置于抽真空鋁箔包裝袋中。本專利技術(shù)快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿在現(xiàn)有紙片法檢測的基礎(chǔ)上，利用微生物生化反應(yīng)的特性，將微生物胞內(nèi)酶的種類及反應(yīng)條件作為微生物分類鑒定的主要依據(jù)，通過在分離培養(yǎng)基或選擇性培養(yǎng)基中，加入微生物特異性酶顯色底物，當目的菌在培養(yǎng)基上生長時，其特異性酶就能降解顯色底物，并產(chǎn)生帶有特殊顏色的代謝物，使菌落形成特定的顏色或形態(tài)，從而進行樣品中微生物的培養(yǎng)和檢測。本專利技術(shù)采用培養(yǎng)皿和無紡布為載體，進行細菌菌落總數(shù)培養(yǎng)、檢測，菌落清晰可見，易于判讀和分析，檢測準確度達國標90％以上，能夠滿足實際檢測需求。有益效果：1.通過培養(yǎng)基優(yōu)化，獲得一種適用于細菌菌落總數(shù)生長的培養(yǎng)基；以透氣性好、吸附性強、大小合適的無紡布材料作為培養(yǎng)基的載體，通過無紡布的前處理，培養(yǎng)基的吸附及烘干，將培養(yǎng)基附著在測試片上；通過將待測樣品直接接種于測試片上，實現(xiàn)對待測樣品中細菌菌落總數(shù)的快速培養(yǎng)和檢測。2.本專利技術(shù)快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，與現(xiàn)有測試片相比，避免了由于涂布不均及蓋膜不當產(chǎn)生氣泡的現(xiàn)象，氣泡的產(chǎn)生和存在，對于檢測樣品的計數(shù)結(jié)果將產(chǎn)生較大影響，避免了人為操作不當引起的誤差。同時，采取培養(yǎng)皿為載體，利用特有的培養(yǎng)基配方，可實現(xiàn)細菌菌落總數(shù)立體生長，使其便于觀察和區(qū)分。3.本專利技術(shù)快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，具有使用簡便，可以長期存放，應(yīng)用靈活的特點，可大大節(jié)省培養(yǎng)基配置、培養(yǎng)皿滅菌、清洗等處理的時間，降低了勞動強度，縮短了檢測時間。同時，本專利技術(shù)測試皿制備方法簡單、易行，能夠?qū)崿F(xiàn)自動化生產(chǎn)，成本低廉，使用方便。附圖說明圖1為本專利技術(shù)測試皿制備流程圖；圖2為本專利技術(shù)測試皿的陽性顯色圖。具體實施方式為了進一步理解本專利技術(shù)，下面結(jié)合實施例對本專利技術(shù)優(yōu)選實施方案進行描述，但是應(yīng)當理解，這些描述只是為進一步說明本專利技術(shù)的特征和優(yōu)點，而不是對本專利技術(shù)權(quán)利要求的限制，本專利技術(shù)試劑如無特別說明，均為常規(guī)試劑。實施例1快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿的組成快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，包括無菌玻璃培養(yǎng)皿和直徑為50-70mm的無紡布，無紡布平鋪于無菌培養(yǎng)皿底部，無紡布上均勻涂布有細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基。細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基含有胰蛋白胨、酵母粉、葡萄糖、磷酸氫二鉀、氯化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、顯色酶解底物混合劑，其中顯色酶解底物混合劑由2,3,5-氯化三苯基四氮唑與NBT按1～2:1比例溶解于N,N-二甲基甲酰胺得到的。細菌菌落總數(shù)特征顯色液體培養(yǎng)基的成分，100mL，表1表1細菌菌落總數(shù)特征顯色液體培養(yǎng)基的成分，100mL胰蛋白胨、酵母粉購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，葡萄糖、磷酸氫二鉀、氯化鈉、磷酸二氫鉀、硫酸鎂購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司，2,3,5-氯化三苯基四氮唑、NBT購自生工生物工程(上海)股份有限公司，N,N-二甲基甲酰胺購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。每份快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿檢測一個樣品。實施例2快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿的制備，制備流程見圖12.1細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基的制備其中100mL細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基配制的方法：稱量胰蛋白胨1.6g、酵母粉0.65g、葡萄糖3.0g、磷酸氫二鉀0.08g、氯化鈉0.1g、磷酸二氫鉀0.3g、硫酸鎂0.3g，于燒杯中加蒸餾水100mL加熱攪拌溶解，在121℃高壓滅菌鍋條件下滅菌15min，冷卻至室溫后，加入經(jīng)過濾滅菌的顯色酶解底物混合劑0.030g，得到細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基，在0～4℃下冷藏備用。2.2各組件前處理：2.2.1無紡布的前處理：輻照劑量為2KGy2.2.2無菌培養(yǎng)皿的前處理：輻照劑量為2KGy2.3測試皿的制備：將經(jīng)步驟2.2.1輻照處理后的無紡布平鋪于經(jīng)2.2.2步驟處理的無菌培養(yǎng)皿的底部后，置于平面超凈工作臺上，用紫外線照射30min，然后將步驟2.1的得到的細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基均勻添加于無紡布上，于35～95℃烤制4h后，蓋上無菌培養(yǎng)皿上蓋，得到快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，置于抽真空鋁箔包裝袋中。即得到快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，得到的產(chǎn)品置于2～8℃環(huán)境下，保存本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，其特征在于包括無菌培養(yǎng)皿和測試片，所述測試片平鋪于無菌培養(yǎng)皿底部，所述測試片上添加有細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基，所述細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基每100mL含有胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氫二鉀0.05～0.1g、氯化鈉0.05～0.2g、磷酸二氫鉀0.2～0.4g、硫酸鎂0.2～0.4g、顯色酶解底物混合劑0.015～0.04g。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，其特征在于包括無菌培養(yǎng)皿和測試片，所述測試片平鋪于無菌培養(yǎng)皿底部，所述測試片上添加有細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基，所述細菌菌落特征顯色液體培養(yǎng)基每100mL含有胰蛋白胨0.8～2.0g、酵母粉0.4～0.8g、葡萄糖1.0～4.0g、磷酸氫二鉀0.05～0.1g、氯化鈉0.05～0.2g、磷酸二氫鉀0.2～0.4g、硫酸鎂0.2～0.4g、顯色酶解底物混合劑0.015～0.04g。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，其特征在于所述顯色酶解底物混合劑由2,3,5-氯化三苯基四氮唑與NBT按1～2:1比例溶解于N,N-二甲基甲酰胺得到的。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，其特征在于所述測試片是直徑為50～70mm的無紡布。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速檢測細菌菌落總數(shù)的測試皿，其特征在于所述無菌培養(yǎng)皿是單次使用的培養(yǎng)皿。5.一種權(quán)利要求1～4任一項所述的快速檢測細菌菌落總數(shù)的測...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：萬宇平，馮才偉，何方洋，馮靜，扶勝，侯璐偉，周繪，湛劍龍，賈玲玲，付浩，席蕓蕓，謝體波，易重任，趙正苗，
申請(專利權(quán))人：貴州勤邦食品安全科學(xué)技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：貴州,52