本發明專利技術涉及微生物技術領域，公開了一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑及其制備方法。本發明專利技術所述復合微生物菌劑包含保藏編號為CCTCC?No：M?2016277的放線菌CZ1367的孢子，以及保藏編號為CCTCC?No：M?2016276的短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。其中的放線菌和短小芽孢桿菌相配合協同防控稻瘟病菌，不僅彌補了彼此防效上的不足，而且避免使用化學農藥，依然保證了對環境友好，無毒副作用，相比單一稻瘟病拮抗菌更加不易使病原菌產生抗藥性。
【技術實現步驟摘要】
一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑及其制備方法
本專利技術涉及微生物
，具體的說是涉及一種防治稻瘟病的復合微生物菌劑及其制備方法和應用。
技術介紹
水稻稻瘟病(BlastFungus)是全世界稻區危害最嚴重的水稻病害之一，又名稻熱病，俗稱火燒瘟、吊頭瘟、掐頸瘟等。該病一年四季均可對水稻造成危害，其危害遍及水稻的各個部位，有苗稻瘟、葉瘟、葉枕瘟、節稻瘟、穗頸瘟、枝梗瘟和谷粒瘟等。一般造成水稻減產10％～20％。以我國為例，20世紀90年代以來，該病的年發生面積均在380萬公頃hm2以上，年損失稻谷達數億公斤。目前,化學農藥是防治稻瘟病的一種主要措施，但是大量和長期使用化學農藥，既增加生產成本，也易導致病原菌產生抗藥性而降低防治效果，同時造成環境污染和破壞生態平衡，給人類健康及環境安全帶來嚴重隱患。而由于稻瘟病病原菌遺傳復雜、致病多樣和極易變異等特點，新培育的抗病品種需辛苦培育，且常在推廣數年內失去抗性，降低了該方法控制稻瘟病的效果。為此，發展安全、無毒副作用、不污染環境、不易使病原菌產生抗藥性的微生物農藥至關重要。拮抗菌是一種能夠在植物體內存活而不對寄主植物具有明顯危害的微生物，且由于田間操作、氣候變化等因素對其生長、繁殖和防治效果的影響較小，是一種天然的微生物活體農藥。目前所分離得到的抗病性拮抗菌大多是易培養的細菌和真菌類群。中國專利CN104195064A公開了一種體外高效拮抗稻瘟病菌的水稻拮抗放線菌，其從秈稻谷梅4號中篩選獲得一株水稻拮抗放線菌，屬于鏈霉菌屬，其能夠對至少5種不同生理小種的梨孢霉菌(稻瘟病的致病真菌)有拮抗作用；中國專利CN105567596A公開了一種放線菌及其應用，其公開了一種富陽鏈霉菌，通過平板對峙試驗檢測出該菌株對稻瘟病菌的抑制率為48.6％；文獻《稻瘟病生防放線菌A11菌株的發酵條件研究》(張宇等，中國農學通報，第21卷第5期，2005年5月)也公開了放線菌A11對稻瘟病菌的拮抗能力，在特定條件下抑菌率平均達到57.4％。中國專利CN101962623A公開了一種可防止水稻稻瘟病和紋枯病的短小芽孢桿菌，在田間稻瘟病試驗中，噴有該菌株次生代謝物的水稻，病感指數為16.7％，而對照的病感指數為67.8％。雖然以抗稻瘟病菌的拮抗菌活體作為農藥制劑，不僅能以其更安全的生物代謝物避免化學農藥產生的隱患，還可以利用拮抗菌與病原菌之間的拮抗對應關系，減少稻瘟病病菌多樣、易變異帶來的影響，但是篩選出來的拮抗菌本身能力高低不一，且單一使用仍有所欠缺，易產生抗藥性，同時在防效上還需要進一步加強。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑，使得所述復合微生物菌劑具有較高的防效，可應用于稻瘟病的防治中。為了實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：一種防治稻瘟病的復合微生物菌劑，包含保藏編號為CCTCCNo：M2016277的放線菌CZ1367的孢子粉，以及保藏編號為CCTCCNo：M2016276的短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。針對現有水稻稻瘟病拮抗菌在稻瘟病防治效果上不足的缺陷，本專利技術采用放線菌和短小芽孢桿菌兩種微生物菌株組成復合微生物菌劑，兩種菌株通過協同作用提高了對稻瘟病菌的抑制作用。所述放線菌CZ1367和短小芽胞桿菌WX812均于2016年5月23日保藏于中國典型培養物保藏中心。作為優選，所述放線菌CZ1367的孢子濃度為1～50億/g，短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞濃度為50～200億/g。作為優選，所述放線菌CZ1367的孢子由以下方法制備獲得：步驟1、將放線菌CZ1367接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培養7天，獲得試管種；步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm2所述試管種，28℃下于轉速為200r/min震蕩培養7天，獲得種子液；步驟3、先配制固體發酵培養基，固體發酵培養基配方為麩皮1000g，121℃滅菌60分鐘，冷卻后烘干，以30％的接種量接入步驟2中得到的種子液，并補加無菌水，至含水量為50％，28℃下固體發酵7天，獲得所述孢子粉。作為優選，所述短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞由以下方法制備獲得：步驟1、將短小芽胞桿菌WX812接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，瓊脂20g，水1000ml，pH7.2，于30℃下培養1天，獲得試管種；步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm2所述試管種，30℃下于轉速為200r/min震蕩培養6-8h，獲得種子液；步驟3、先配制液體發酵培養基，液體發酵培養基配方為大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl0.2％，CaCO30.1％，MgSO4·7H2O0.05％，KH2PO40.05％，pH7.0；121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入2％的步驟2中得到的種子液，30℃下于轉速為220rpm的發酵罐中培養3天得發酵液，用轉速為4000rpm的離心機離心發酵液10分鐘，取沉淀干燥，獲得所述短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。本專利技術所述復合微生物菌劑對稻瘟病菌多個生理小種，如62、RB3、131、稻農具有較高的抑制率，具有協同增效作用，同時在盆栽試驗和大田試驗中具有比對照農藥稻瘟靈更佳的防效和增產率。基于此，本專利技術提供了所述復合微生物菌劑在防治稻瘟病以及在制備防治稻瘟病農藥制劑中的應用。同時，本專利技術提供了所述復合微生物菌劑的制備方法，制備放線菌CZ1367的孢子和短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞，然后調整兩者的濃度混合，獲得所述復合微生物菌劑。作為優選，所述制備放線菌CZ1367的孢子步驟具體如下：步驟1、將放線菌CZ1367接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培養7天，獲得試管種；步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm2所述試管種，28℃下于轉速為200r/min震蕩培養7天，獲得種子液；步驟3、先配制固體發酵培養基，固體發酵培養基配方為麩皮1000g，121℃滅菌60分鐘，冷卻后烘干，以30％的接種量接入步驟2中得到的種子液，并補加無菌水，至含水量為50％，28℃下固體發酵7天，獲得所述孢子粉。作為優選，所述制備短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞步驟具體如下：步驟1、將短小芽胞桿菌WX812接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，瓊脂20g，水1000ml，pH7.2，于30℃下培養1天，獲得試管種；步本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑，其特征在于，包含保藏編號為CCTCC?No：M?2016277的放線菌CZ1367的孢子粉，以及保藏編號為CCTCC?No：M?2016276的短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。
【技術特征摘要】
1.一種防治水稻稻瘟病的復合微生物菌劑，其特征在于，包含保藏編號為CCTCCNo：M2016277的放線菌CZ1367的孢子粉，以及保藏編號為CCTCCNo：M2016276的短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞。2.根據權利要求1所述復合微生物菌劑，其特征在于，所述放線菌CZ1367的孢子濃度為1～50億/g，短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞濃度為50～200億/g。3.根據權利要求1所述復合微生物菌劑，其特征在于，所述放線菌CZ1367的孢子粉由以下方法制備獲得：步驟1、將放線菌CZ1367接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ml，pH值7.4，于28℃下培養7天，獲得試管種；步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為酵母膏4g，葡萄糖4g，麥芽膏10g，水1000ml，pH值7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm2所述試管種，28℃下于轉速為200r/min震蕩培養3天，獲得種子液；步驟3、先配制固體發酵培養基，固體發酵培養基配方為麩皮1000g，121℃滅菌60分鐘，冷卻后烘干，以30％的接種量接入步驟2中得到的種子液，并補加無菌水，至含水量為50％，28℃下固體發酵7天，獲得所述孢子粉。4.根據權利要求1所述復合微生物菌劑，其特征還在于，所述短小芽胞桿菌WX812的菌體和芽胞由以下方法制備獲得：步驟1、將短小芽胞桿菌WX812接種到試管固體培養基斜面上，培養基配方為：NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，瓊脂20g，水1000ml，pH7.2，于30℃下培養1天，獲得試管種；步驟2、先配制液體種子培養基，液體種子培養基配方為NaCl10g，蛋白胨10g，酵母粉5g，水1000ml，pH7.2；在每個三角瓶中裝入100ml液體培養基，121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入1cm2所述試管種，30℃下于轉速為200r/min震蕩培養6-8h，獲得種子液；步驟3、先配制液體發酵培養基，液體發酵培養基配方為大豆粉2％，蔗糖1％，可溶性淀粉0.5％，蛋白胨0.2％，NaCl0.2％，CaCO30.1％，MgSO4·7H2O0.05％，KH2PO40.05％，pH7.0；121℃滅菌30分鐘，冷卻后接入2％的步驟2中得到的種子液，30℃下于轉速為220rpm的發酵罐中培養3天得發酵液，用轉速為4000rpm的離心機離心發酵液1...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鐘積東，譚志奇，周艷，
申請(專利權)人：湖南神隆高科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：湖南,43
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