一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法及組合物技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法及組合物，該技術(shù)方案首先基于柯赫氏法則，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、顯微鑒別及真菌rDNA?ITS序列分析對(duì)梔子葉枯病病原菌進(jìn)行系統(tǒng)的癥狀與病原菌鑒定，首次對(duì)導(dǎo)致梔子葉枯病的病原微生物給出了明確的分析結(jié)論。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，葉枯病研究結(jié)果表明：引起梔子葉枯病病害的病原菌有三種，分別為擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis?sp.)、細(xì)極鏈格孢(Alternaria?tenuissima(Fr.)Wiltshire)與鏈格孢菌(Alternaria?alternata(Fr.)Keissler)。基于以上有益的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明專利技術(shù)確定了一種以殺滅上述三種微生物為核心的梔子葉枯病病害防治方法。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明專利技術(shù)通過體外實(shí)驗(yàn)考察了不同抑菌劑對(duì)上述三種微生物的抑菌效果，從而確定了用于上述梔子葉枯病病害防治方法的組合物。

Method and composition for preventing and curing Gardenia leaf blight disease

The present invention provides a method for controlling and composition of Gardenia leaf blight disease, the technical scheme based on Koch were identified by symptom and pathogen system on pathogenic blight of Gardenia leaves bacteria morphology, microscopic identification and fungus rDNA ITS sequence analysis, analysis of the first clear conclusion lead to pathogenic microorganisms given the Gardenia leaf blight. The experiment found that the results of the study show that: leaf blight caused by pathogenic bacteria of Gardenia leaf blight disease has three kinds, respectively (Phomopsis Phomopsis sp.), Alternaria tenuissima (Alternaria tenuissima (Fr.) Wiltshire) and Alternaria (Alternaria alternata (Fr.) Keissler). Based on the above beneficial discovery, the invention discloses a method for preventing and curing the disease of the Gardenia leaf blight which takes the above three microorganisms as the core. On the basis of the invention, the bacteriostatic effect of different bacteriostatic agents on the three microorganisms is investigated by an in vitro experiment, and a composition for preventing and controlling the disease of the Gardenia leaf blight is determined.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法及組合物
本專利技術(shù)涉及植物病害防治
，進(jìn)一步涉及植物病害機(jī)理的探究及藥物篩選，具體涉及一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法及組合物。
技術(shù)介紹
梔子(GardeniajasminoidesEills)是茜草科(Rubiaceae)植物，藥用部位為其干燥成熟果實(shí)，含有京尼平苷類、藏紅花素類等活性成分，具有保肝、利膽、鎮(zhèn)靜、降壓、消炎、止血等作用。梔子果實(shí)中的西紅花總苷可以用來生產(chǎn)梔子紅、梔子黃、梔子藍(lán)三種色素，作為天然著色劑在食品行業(yè)廣泛使用。由于梔子果實(shí)在醫(yī)藥和食品工業(yè)等方面應(yīng)用廣泛，國(guó)內(nèi)外對(duì)梔子資源的需求量極大。在梔子的栽培過程中，病害現(xiàn)象是對(duì)產(chǎn)量影響最為嚴(yán)重的突發(fā)事件之一，現(xiàn)有技術(shù)中梔子的多發(fā)病害主要包括葉枯病、猝倒病、根腐病、漚根病等，其中又以葉枯病影響最為嚴(yán)重。癥狀表現(xiàn)方面，葉枯病多從葉緣、葉尖侵染發(fā)生，病斑由小到大不規(guī)則狀，紅褐色至灰褐色，病斑連片成大枯斑，干枯面積達(dá)葉片的1/3-1/2，病斑邊緣有一較病斑深的帶；病健界限明顯。后期在病斑上產(chǎn)生一些黑色小粒點(diǎn)。部分植物病葉初期先變黃，黃色部分逐漸變褐色壞死。由局部擴(kuò)展到整個(gè)葉脈，呈現(xiàn)褐色至紅褐色的葉緣病斑，病斑邊緣波狀，顏色較深。病鍵交界明顯，其外緣有時(shí)還有寬窄不等的黃色淺帶，隨后，病斑逐漸向葉基部延伸，直至整個(gè)葉片變?yōu)楹稚粱液稚ｋS后在病葉背面或正面出現(xiàn)黑色絨毛狀物或黑色小點(diǎn)。盡管葉枯病在多種植物中廣泛存在，但不同植物葉枯病的共通性僅限于癥狀表現(xiàn)及疾病名稱，而在致病機(jī)理層面往往存在根本性差異。在這種情況下，應(yīng)當(dāng)針對(duì)梔子葉枯病的實(shí)際特征研究其致病機(jī)理，在明確致病微生物的情況下針對(duì)性的進(jìn)行防治藥劑篩選，才可能取得好的防治效果。現(xiàn)有技術(shù)中未見對(duì)梔子葉枯病病害防治方法的報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法及組合物，以解決現(xiàn)有技術(shù)中梔子葉枯病病原不明確的技術(shù)問題。本專利技術(shù)要解決的另一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中梔子葉枯病的防治效果不佳。為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本專利技術(shù)采用以下技術(shù)方案：一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，該方法是對(duì)梔子植株施加擬莖點(diǎn)霉抑菌劑、細(xì)極鏈格孢抑菌劑、鏈格孢菌抑菌劑。作為優(yōu)選，所述擬莖點(diǎn)霉抑菌劑是N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯；進(jìn)一步優(yōu)選的，N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯的濃度為0.19μg/mL。作為優(yōu)選，所述細(xì)極鏈格孢抑菌劑是己唑醇；進(jìn)一步優(yōu)選的，己唑醇的濃度為9.33μg/mL。作為優(yōu)選，所述鏈格孢菌抑菌劑是己唑醇；進(jìn)一步優(yōu)選的，己唑醇的濃度為14.45μg/mL。同時(shí)，本專利技術(shù)提供了一種用于上述方法的組合物，該組合物包括N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯和己唑醇。作為優(yōu)選，該組合物中N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯的濃度為15μg·mL-1。作為優(yōu)選，該組合物中己唑醇的濃度為500μg·mL-1。在以上技術(shù)方案中，所述抑菌劑并不局限于對(duì)微生物生長(zhǎng)狀況起到抑制作用的物質(zhì)，一切對(duì)指定微生物具有生長(zhǎng)抑制作用或直接殺滅作用的物質(zhì)均應(yīng)當(dāng)屬于所述抑菌劑所限定的技術(shù)范圍。所述抑菌劑應(yīng)當(dāng)以本領(lǐng)域技術(shù)人員的普遍性理解來界定其含義。本專利技術(shù)提供了一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法及組合物，該技術(shù)方案首先基于柯赫氏法則，結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察、顯微鑒別及真菌rDNA-ITS序列分析對(duì)梔子葉枯病病原菌進(jìn)行系統(tǒng)的癥狀與病原菌鑒定，首次對(duì)導(dǎo)致梔子葉枯病的病原微生物給出了明確的分析結(jié)論。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，葉枯病研究結(jié)果表明：引起梔子葉枯病病害的病原菌有三種，分別為擬莖點(diǎn)霉(Phomopsissp.)、細(xì)極鏈格孢(Alternariatenuissima(Fr.)Wiltshire)與鏈格孢菌(Alternariaalternata(Fr.)Keissler)。基于以上有益的發(fā)現(xiàn)，本專利技術(shù)確定了一種以殺滅上述三種微生物為核心的梔子葉枯病病害防治方法。在此基礎(chǔ)上，本專利技術(shù)通過體外實(shí)驗(yàn)考察了不同抑菌劑對(duì)上述三種微生物的抑菌效果。PDA平板抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯(多菌靈)對(duì)擬莖點(diǎn)霉的殺菌效果最好，EC50為0.19μg·mL-1，其次為五硝多菌靈、甲基硫菌靈、甲基托布津、百菌清；而針對(duì)細(xì)極鏈格孢和鏈格孢菌的最佳殺菌物質(zhì)均為己唑醇，二者的半數(shù)有效濃度分別低至9.33μg/mL和14.45μg/mL。在以上實(shí)驗(yàn)成果的指引下，本專利技術(shù)確定了用于上述梔子葉枯病病害防治方法的組合物，從而為梔子葉枯病病害防治藥物的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。本專利技術(shù)方法以梔子葉枯病致病微生物的發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)，提升了防治手段的針對(duì)性，有效保證了梔子葉枯病病害防治效果。附圖說明圖1是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD1菌株菌落形態(tài)圖；圖2是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD2菌株菌落形態(tài)圖；圖3是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD3菌株菌落形態(tài)圖；圖4是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD1菌株孢子鏡檢圖；圖5是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD1菌株菌絲體鏡檢圖；圖6是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD2菌株菌絲體鏡檢圖；圖7是本專利技術(shù)實(shí)施例1中分離得到的GD3菌株菌絲體鏡檢圖；圖8是本專利技術(shù)實(shí)施例1中將GD1菌株接種至葉片后從葉片中再分離得到的病原菌菌落形態(tài)圖；圖9是本專利技術(shù)實(shí)施例1中將GD2菌株接種至葉片后從葉片中再分離得到的病原菌菌落形態(tài)圖；圖10是本專利技術(shù)實(shí)施例1中將GD3菌株接種至葉片后從葉片中再分離得到的病原菌菌落形態(tài)圖；圖11是本專利技術(shù)實(shí)施例1中接種GD1菌株后梔子葉片的病害情況圖；圖12是本專利技術(shù)實(shí)施例1中接種GD2菌株后梔子葉片的病害情況圖；圖13是本專利技術(shù)實(shí)施例1中接種GD3菌株后梔子葉片的病害情況圖；圖14是本專利技術(shù)實(shí)施例1中GD1菌株的rDNA-ITS區(qū)PCR擴(kuò)增結(jié)果；圖15是本專利技術(shù)實(shí)施例1中GD2菌株的rDNA-ITS區(qū)PCR擴(kuò)增結(jié)果；圖16是本專利技術(shù)實(shí)施例1中GD3菌株的rDNA-ITS區(qū)PCR擴(kuò)增結(jié)果。具體實(shí)施方式以下將對(duì)本專利技術(shù)的具體實(shí)施方式進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。以下實(shí)施例中所使用的近似性語(yǔ)言可用于定量表述，表明在不改變基本功能的情況下可允許數(shù)量有一定的變動(dòng)。因此，用“大約”、“左右”等語(yǔ)言所修正的數(shù)值不限于該準(zhǔn)確數(shù)值本身。在一些實(shí)施例中，“大約”表示允許其修正的數(shù)值在正負(fù)百分之十(10％)的范圍內(nèi)變化，比如，“大約100”表示的可以是90到110之間的任何數(shù)值。此外，在“大約第一數(shù)值到第二數(shù)值”的表述中，大約同時(shí)修正第一和第二數(shù)值兩個(gè)數(shù)值。在某些情況下，近似性語(yǔ)言可能與測(cè)量?jī)x器的精度有關(guān)。除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本專利技術(shù)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。以下實(shí)施例中所用的術(shù)語(yǔ)“第一”、“第二”等并不表示任何順序、數(shù)量或重要性，而僅用于區(qū)別一種元件和另一種元件。實(shí)施例1(梔子葉枯病病原菌鑒定)1試驗(yàn)方法1.1病原菌分離挑選梔子葉枯病典型葉片，采用常規(guī)組織分離法對(duì)病原菌進(jìn)行初步的分離純化。用蒸餾水將葉片表面沖洗干凈。在葉片病斑的病健交界處剪取5mm·5mm大小的組織塊，于70％的乙醇中浸泡30s，再放入5％的次氯酸鈉中溶液浸泡5min進(jìn)行表面消毒，之后用無菌水洗去殘余溶液，表面多余水分用無菌吸水紙吸干，接種于PDA培養(yǎng)基本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，其特征在于對(duì)梔子植株施加擬莖點(diǎn)霉抑菌劑、細(xì)極鏈格孢抑菌劑、鏈格孢菌抑菌劑。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，其特征在于對(duì)梔子植株施加擬莖點(diǎn)霉抑菌劑、細(xì)極鏈格孢抑菌劑、鏈格孢菌抑菌劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，其特征在于所述擬莖點(diǎn)霉抑菌劑是N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，其特征在于N-(2-苯駢咪唑基)-氨基甲酸甲酯的濃度為0.19μg/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，其特征在于所述細(xì)極鏈格孢抑菌劑是己唑醇。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種針對(duì)梔子葉枯病病害的防治方法，其特征在于...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：羅光明，龔雨虹，羅揚(yáng)婧，楊雅琴，董艷凱，張風(fēng)波，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江西中醫(yī)藥大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：江西,36