毛鉤藤堿的應用制造技術

本發明專利技術公開一種毛鉤藤堿的應用，將所述毛鉤藤堿用于制備治療肺癌的藥物。本發明專利技術通過體外肺癌培養實驗，結果證明毛鉤藤堿對肺癌細胞具有濃度及時間依賴性的抑制其生長的作用，通過線粒體損傷途徑誘導肺癌細胞的凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型實驗表明，毛鉤藤堿可抑制裸鼠腫瘤的生長；同時細胞與動物實驗都表明毛鉤藤堿毒性低。

Application of Uncaria

The present invention discloses the application of Uncaria base, and is used for preparing medicine for treating lung cancer. The invention of lung cancer by in vitro culture experiments results show that the inhibition of hirsutine with concentration and time dependent on lung cancer cell growth, apoptosis through mitochondrial damage pathway induced by lung cancer cell; experiment showed that tumor bearing nude mouse model of lung cancer, hirsutine can inhibit tumor growth and cell and animal experiments; show hirsutine low toxicity.

【技術實現步驟摘要】
毛鉤藤堿的應用
本專利技術涉及醫藥領域，主要涉及毛鉤藤堿的應用。
技術介紹
肺癌是目前全世界范圍內發病率、病死率最高的惡性腫瘤之一。目前臨床上藥物的治療主要是采用化療及外科手術治療，但對于該疾病控制和治療還依賴于更多有效藥物的發現。傳統的化療藥物是細胞毒性藥物，在殺傷腫瘤細胞的同時也作用于正常細胞，因此毒副作用大。線粒體是細胞產生能量的主要細胞器，機體內腫瘤細胞的異常增殖依賴于高能量的獲取，因此通過選擇性地誘導腫瘤細胞線粒體損傷導致細胞凋亡，抑制腫瘤的生長是治療腫瘤最直接、最有效的途徑。毛鉤藤堿是一種鉤藤屬植物中的生物堿成分，現有研究表明其在心血管保護、抗高血壓、抗心律失常方面具有很好的作用。至今，尚未見毛鉤藤堿在通過線粒體損傷途徑誘導肺癌細胞的凋亡，進而抑制腫瘤生長的報道。
技術實現思路
鑒于上述現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供一種毛鉤藤堿的應用，具體在于毛鉤藤堿通過線粒體損傷途徑誘導肺癌細胞的凋亡，進而對腫瘤產生抑制作用，旨在提供毛鉤藤堿在腫瘤治療方面的新用途。本專利技術的技術方案如下：一種毛鉤藤堿的應用，其中，將所述毛鉤藤堿用于制備治療肺癌的藥物。所述的毛鉤藤堿的應用，其中，所述藥物的劑型為注射劑型。所述的毛鉤藤堿的應用，其中，所述藥物中還包括藥物輔料，藥物輔料為能溶解難溶性藥物的藥物輔料。所述的毛鉤藤堿的應用，其中，所述藥物輔料為包括丙二醇、β環糊精中的一種或幾種。所述的毛鉤藤堿的應用，其中，注射劑的劑量為1~3mg·kg-1/day。有益效果：本專利技術中提供了毛鉤藤堿及其制劑在肺癌治療方面的新用途，毛鉤藤堿為一種副作用少，毒性低的天然抗肺癌藥物。本專利技術通過體外肺癌培養實驗，結果證明毛鉤藤堿對肺癌細胞具有濃度及時間依賴性抑制其生長的作用，可通過誘導細胞線粒體損傷途徑促進肺癌細胞凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型實驗表明，毛鉤藤堿可抑制裸鼠腫瘤的生長；同時細胞與動物實驗都表明毛鉤藤堿毒性低。所述的毛鉤藤堿可作為治療肺癌的新候選藥物。附圖說明圖1為本專利技術實施例1中不同濃度的毛鉤藤堿作用于癌細胞24h的細胞存活率的結果圖。圖2為本專利技術實施例1中80μM毛鉤藤堿作用于癌細胞不同時間細胞存活率的結果圖。圖3為本專利技術實施例1中80μM毛鉤藤堿作用于癌細胞不同時間的細胞形態的結果圖。圖4為本專利技術實施例2中不同濃度的毛鉤藤堿作用于癌細胞24h細胞凋亡率的結果圖。圖5為本專利技術實施例2中80μM毛鉤藤堿作用于癌細胞不同時間細胞凋亡率的結果圖。圖6為本專利技術實施例2中不同濃度的毛鉤藤堿作用癌細胞24h凋亡蛋白C-PARP、C-Caspase-3的表達量結果圖。圖7為本專利技術實施例2中80μM毛鉤藤堿作用于癌細胞不同時間凋亡蛋白C-PARP、C-Caspase-3的表達量結果圖。圖8為本專利技術實施例3中不同濃度毛鉤藤堿作用于細胞24hATP相對含量的結果圖。圖9為本專利技術實施例3中不同濃度毛鉤藤堿作用于細胞24h細胞漿內CytoC的表達結果圖。圖10為本專利技術實施例3中不同濃度毛鉤藤堿作用24h細胞的膜電位水平的結果圖。圖11為本專利技術實施例4中80μM毛鉤藤堿作用于不同細胞24h的凋亡率的結果圖。圖12為實施例5中對照組和實驗組中裸鼠的體重測量結果圖。圖13為實施例5中對照組和實驗組中腫瘤體積的測量結果圖。圖14為實施例5中對照組和實驗組中腫瘤體積的實物圖。具體實施方式本專利技術提供一種毛鉤藤堿的應用，為使本專利技術的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本專利技術進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限定本專利技術。毛鉤藤堿的結構式如下式所示：本專利技術中，研究發現毛鉤藤堿可通過線粒體損傷途徑誘導肺癌細胞的凋亡進而達到抑制肺癌的生長，并且毒副作用小，有望成為一種治療肺癌的候選藥物。本專利技術中通過體外肺癌細胞培養實驗，結果證明毛鉤藤堿對肺癌細胞具有濃度及時間依賴性抑制其生長的作用，可通過線粒體損傷途徑誘導肺癌細胞的凋亡；裸鼠肺癌荷瘤模型實驗表明，毛鉤藤堿可抑制裸鼠腫瘤的生長；同時細胞與動物實驗都表明毛鉤藤堿毒性低。因此，在本專利技術中提供毛鉤藤堿的應用，將所述毛鉤藤堿用于制備治療肺癌的藥物。進一步地，所述藥物的劑型為注射劑型。所述藥物中還包括藥物輔料，藥物輔料為能溶解難溶性藥物的輔料，具體可以包括由丙二醇、β環糊精等中的一種或幾種組成。注射劑的濃度，換算到人體應為D=1~3mg·kg-1/day。以下通過實施例對本專利技術作進一步說明。實施例1：毛鉤藤堿可抑制腫瘤細胞的生長1．細胞培養人肺癌A549細胞培養在DMEM＋10％胎牛血清（FBS）完全培養基中進行。細胞培養在溫度37℃、5％濃度的CO2及飽和濕度的細胞培養箱中。2．實驗方法及結果將A549腫瘤細胞系狀態穩定后，將細胞鋪于96孔板中，每孔5000個細胞，每孔含完全培養基90μL。人肺癌A549細胞按以下方式分組并處理：（1）對照組：完全培養基溶液10μL處理；（2）毛鉤藤堿組：用DMSO溶解配制成不同的濃度，每孔中加10μL，使培養基的終濃度為100、80、60、40、20、0μM（μmol/L）的毛鉤藤堿溶液，處理不同時間（1、3、6、9、12、24h）后，每孔中加入20μL磷酸鹽緩沖溶液（PBS溶液）配制的5mg/mL的噻唑藍（MTT）溶液繼續培養4小時。吸走上層培養基，每孔中加入150μL二甲亞砜（DMSO）進行溶解，振蕩器上溶解10分鐘后，用酶標儀在A570處檢測吸光度值，細胞存活率根據以下公式計算：細胞存活百分率＝（處理組吸光度－空白孔吸光度）÷（對照組吸光度－空白孔吸光度）×100%。實驗結果見圖1、圖2和圖3。圖1中，縱坐標表示細胞存活率，即處理組相對于對照組的細胞存活率；圖1橫坐標為不同濃度的毛鉤藤堿處理24h后的細胞平均存活率。圖2中，縱坐標表示細胞存活率，橫坐標為毛鉤藤堿80μM處理作用不同時間。圖柱對應的值為各組的平均值。圖3為毛鉤藤堿80μM處理作用不同時間人肺癌A549細胞的形態圖。從圖1中可見，隨著毛鉤藤堿藥物濃度的增加，肺癌細胞的生存率降低；圖2中可見，隨著作用時間的增加，肺癌細胞的生存率也降低。表明毛鉤藤堿對肺癌A549細胞的作用成濃度和時間依賴性。同時在圖3中，還能直觀地觀察到，隨著毛鉤藤堿對肺癌細胞作用時間增長，人肺癌A549細胞的形態發生了明顯的變化，24h后成聚集抱團生長的細胞分散生長，細胞完整形態消失。實施例2：毛鉤藤堿可誘導腫瘤細胞凋亡1.細胞培養：同實施例1。2．實驗方法及結果將A549腫瘤細胞系狀態穩定后，將細胞鋪于6孔板中，每孔100000個細胞，每孔含完全培養基2mL。按以下方式分組并處理：（1）對照組：完全培養基溶液10μL處理；（2）毛鉤藤堿組：用DMSO溶解配制成不同的濃度，每孔中加10μL，使培養基的終濃度為100、80、60、40、20、0μM（μmol/L）的毛鉤藤堿溶液，處理不同時間（1、3、6、9、12、24h）后，根據需要進行不同操作。采用流式細胞技術檢測不同濃度及不同作用時間后細胞的凋亡情況，收集細胞、PBS漂洗、加入AnnexinV-FITC及碘化丙啶避光孵育15min，流式細胞儀檢測；同時采用蛋白免疫印跡技術檢測不同濃度及不同作用時間后對細胞凋亡蛋白的影響，細胞刮收集細胞、裂解細胞、測蛋白本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種毛鉤藤堿的應用，其特征在于，將所述毛鉤藤堿用于制備治療肺癌的藥物。

【技術特征摘要】
1.一種毛鉤藤堿的應用，其特征在于，將所述毛鉤藤堿用于制備治療肺癌的藥物。2.根據權利要求1所述的毛鉤藤堿的應用，其特征在于，所述藥物的劑型為注射劑型。3.根據權利要求2所述的毛鉤藤堿的應用，其特征在于，所述藥物中還包括藥物輔料，藥物...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張蓉，李國兵，唐勤，黃景彬，張倩，劉亞麗，胡長鵬，王慶，周麗，
申請(專利權)人：中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院，
類型：發明
國別省市：重慶,50