本發明專利技術公開了一種協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物。包括1,2?苯并異噻唑?3?酮和乙二胺四乙酸二鈉。本發明專利技術的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物對細菌浮游菌的生長及其生物膜的形成都有殺滅或者抑制作用，且這種殺滅或者抑制作用比單獨使用任何一種組分都具有更好的效果，因此可以提高BIT藥物的抑制細菌生長及其生物膜形成的效果，從而減少BIT的使用量和降低細菌產生抗藥性的機率。
Composition for synergistic inhibition of bacteria and formation of bacterial resistant biofilms
The present invention discloses a composition for synergistic inhibition of bacteria and formation of bacterial resistant biofilms. Including the 1,2 benzisothiazole 3 ketone and two sodium edta. The formation and growth of biofilm composition inhibit bacteria and anti bacterial biofilm formation on the bacteria of planktonic bacteria are killed or inhibited by killing or inhibiting effect, and the ratio of the use of any one of them has a better effect of separate components, so it can improve the formation of BIT drugs inhibit bacterial growth and the effect of biofilms, thereby reducing the amount of use of BIT and reduce the probability of bacteria resistance.
【技術實現步驟摘要】
一種協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物
本專利技術屬于化學和微生物領域，具體涉及一種協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物。
技術介紹
：異噻唑啉酮類防霉防腐劑是20世紀60年代左右開發使用的一種新型殺菌劑，具有高效、低毒、藥效持續時間長、對環境安全等優點，被譽為新型環保型殺菌劑，市場占有率不斷提高，引起了生物、醫藥、化學界等專家的廣泛關注，并且此類殺菌劑已經被廣泛的應用于海洋防污、工業循環冷卻水處理、工業產品防腐、農用殺菌和日常洗化用品等方面，而原國家經貿委也早在2001年就將異噻唑啉酮殺菌滅藻劑列入《當前國家鼓勵發展的節水設備(產品)目錄(第一批)》(二00一年第5號)中的水處理藥劑使用。1,2-苯并-異噻唑啉-3-酮(BIT)是異噻唑啉酮類防霉防腐劑的典型代表，該藥物在工業環境中得到了廣泛的應用，但由于該藥物的長期和不正當使用，從而導致越來越多的微生物對其產生了抗性，由于抗性的產生從而導致洗發露、洗潔精和涂料等的腐敗變質，給生產企業和使用者帶來巨大的經濟損失，甚至影響到人類的健康。而從頭開發一種高效廣譜性的化學藥劑，則周期長，成本高，難度大，因此，迫切需要對現有的殺菌劑進行必要的復配或者添加藥效促進成份等來提高殺菌劑的藥效，從而降低防霉防腐劑的實際使用劑量，減少環境污染和對人類健康的潛在負面影響。細菌生物膜(Bacterialbiofilm,BF)是細菌的一種生存形式，有數據表明在自然界中高達95％的細菌都是以細菌生物膜的形式存在，它是一種附著于生物或非生物材料表面，被自身分泌的胞外大分子包裹并具有一定三維結構特點的細菌群體，其結構構成主要包括：水、細菌、大分子聚合物(蛋白質、多糖、DNA、RNA、肽聚糖、脂和磷脂等)、吸附的營養物質、代謝產物和細菌裂解產物等。由于生物膜的形成，從而導致細菌抗藥性的產生，有研究表明，細菌生物膜的抗藥性比其在浮游狀態高10-1000倍。細菌生物膜的形成還會導致很多的危害，如對附著的材料表面產生腐蝕作用、污染醫療器械和引發人類疾病等，因此，如何控制及清理細菌生物膜成為一個熱門的課題。目前，雖然開發出了許多新型的控制細菌生物膜形成和發展的方法以及藥劑，但是，利用化學殺菌劑來控制生物膜仍然是最有效的手段，并將長期存在和使用，但與此同時，細菌生物膜對很多殺菌劑產生了抗性，從而使得普遍使用的殺菌劑及其施用濃度已經不能控制生物膜的形成，迫切需要開發出高效的殺菌劑或者復配物來抑制和滅殺細菌生物膜。
技術實現思路
：本專利技術的目的是提供能夠有效的抑制細菌生長及其生物膜形成的效果的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，該協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物能提高BIT藥物的抑制細菌生長及其生物膜形成的效果，從而減少BIT的使用量和降低細菌產生抗藥性的機率。本專利技術的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，其特征在于，包括1,2-苯并異噻唑-3-酮(BIT)和乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)。優選，所述的1,2-苯并異噻唑-3-酮(BIT)和乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)是按物質的量之比為1：20～80復配而成。所述的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物中的細菌是假單胞菌屬(Pseudomonasspp.)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacterspp.)或者葡萄球菌屬(Staphylococcusspp.)等的細菌。進一步優選，所述的細菌為銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、魏氏檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)或者金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)等。本專利技術的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物對細菌浮游菌的生長及其生物膜的形成都有殺滅或者抑制作用，且這種殺滅或者抑制作用比單獨使用任何一種組分都具有更好的效果，因此可以提高BIT藥物的抑制細菌生長及其生物膜形成的效果，從而減少BIT的使用量和降低細菌產生抗藥性的機率。本專利技術配方簡單，配制容易，效果顯著，應用范圍和前景廣闊。具體實施方式以下實施例是對本專利技術的進一步說明，而不是對本專利技術的限制。測試方法范例以下實施例中的測試菌株都是用該實施例中普通Luria-Bertani(LB)液體培養基(每升含有氯化鈉10g，胰蛋白胨10g，酵母粉5g)將測試菌株過夜培養，然后再用新鮮的LB液體培養基將過夜培養物稀釋到OD600＝1.0配制成菌懸液母液，并按照10％的體積分數接種量加入菌懸液母液，制成菌懸液工作液，同時按照梯度稀釋的方法在培養體系中加入一定濃度的BIT以及EDTA-2Na，將BIT和EDTA-2Na以及菌懸液工作液充分混合均勻后，吸取150μl上述混合液到96孔細胞培養板中，然后將培養板放入30℃或者37℃恒溫培養箱靜置培養24小時，最后將96孔板取出，用全波長酶標儀測定菌液的在600nm處的吸光度值(OD600)，以此評價BIT和EDTA-2Na對細菌浮游菌的抑制效果；然后，輕輕的吸棄浮游菌，清洗板孔3次，并在每個板孔內加入200μl1％(v/w)結晶紫染色液，靜置染色30分鐘，吸棄結晶紫染色液，再用無菌水洗板孔三次，室溫干燥30min后，用200μl95％的乙醇脫色30min，利用全波長酶標儀測其在595nm處的吸光度值(OD595)，以此評價BIT和EDTA-2Na對細菌生物膜形成的抑制效果。同時，協同作用的評價方法是使用KullF.C.等(AppliedMicrobiology，19619:538-541)所述的工業上認同的經典方法即協同指數來判斷殺菌劑的協同和拮抗作用。SI(協同指數)＝Qa/QA+Qb/QB，其中QA為化合物A(第一組分)單獨使用時對菌株抑制的最小抑制濃度(MIC)，單位為mM；QB為化合物B(第二組分)單獨作用時對所測定菌株的最小抑制濃度(MIC)，單位為mM；Qa、Qb為混合物中化合物A、B的濃度，單位為mM。當SI＞1時，表示拮抗作用；當SI＝1時，表示相加性，而且SI＜1時表示協同作用，SI值愈低，該特定混合物顯示的協同作用愈大。實施例1：一種協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，用金黃色葡萄球菌(StaphylococcusaureusATCC6538)作為測試菌株，按照上述測試方法范例中的方法進行測試，用96孔細胞培養板在37℃靜置培養菌株24h，測定的BIT對S.aureusATCC6538的MIC為(即QA)：0.4mM；測定的EDTA-2Na對S.aureusATCC6538的MIC為(即QB)：64mM。在S.aureusATCC6538菌株培養液中加入BIT(Qa)，使其終濃度為0.1mM，以及EDTA-2Na(Qb)，使其終濃度為2mM，混合均勻(即96孔細胞培養板中的混合液中含有BIT0.1mM和EDTA-2Na2mM)，BIT(Qa)和EDTA-2Na(Qb)就可有效抑制S.aureusATCC6538的生長，即未見明顯生長，達到復配組合物對菌株生長的最小抑制濃度(MIC)，利用上面提到的公式：SI(協同指數)＝Qa/QA+Qb/QB，計算得到的SI＝0.281，即SI<1，說明BIT和EDTA-2Na具有協同抑細菌復配增效作用；同時，用結晶紫染色法和全波長酶標儀測定菌株在0.1mMBIT和2mM本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，其特征在于，包括1,2?苯并異噻唑?3?酮和乙二胺四乙酸二鈉。
【技術特征摘要】
1.一種協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，其特征在于，包括1,2-苯并異噻唑-3-酮和乙二胺四乙酸二鈉。2.根據權利要求1所述的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，其特征在于，所述的1,2-苯并異噻唑-3-酮和乙二胺四乙酸二鈉是按物質的量之比為1：20～80復配而成。3.根據權利要求1所述的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物，其特征在于，所述的協同抑細菌和抗細菌生物膜形成的組合物中的細菌是假單胞菌...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周剛，施慶珊，彭紅，黃小茉，謝小保，
申請(專利權)人：廣東省微生物研究所廣東省微生物分析檢測中心，
類型：發明
國別省市：廣東,44
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