一種花生白絹病溫室苗期接種方法技術
A greenhouse seedling inoculation method of peanut Sclerotium Blight
The invention relates to a greenhouse seedling inoculation method of peanut sclerotium blight. A peanut seedling in greenhouse blight inoculation method, which comprises the following steps: 1). White: white silk silk strains collected from Wuhan field sclerotium peanut Southern Blight Strains, were isolated, in indoor purification, sequencing, alignment, identification of Sclerotium rolfsii; 2). Bacteria inoculum preparation the white silk fungus dish preparation; the toothpick carrier preparation; the carrier of grain Yan preparation; 3). Bacteria inoculum in different ways of inoculation of peanut seedlings; 4). The different number of infected wheat peanut seedlings inoculated with Yan; 5). A carrier oat grains with different ages of peanut seedlings; 6). Bacteria inoculated with different peanut varieties / Yan wheat lines. The invention provides a simple and reliable method for white silk inoculation, peanut seedling Screening Germplasm Resistant to blight, resistant blight materials, provide technical means for disease resistance breeding.
【技術實現步驟摘要】
一種花生白絹病溫室苗期接種方法
本專利技術涉及一種花生白絹病溫室苗期接種方法。
技術介紹
花生白絹病，又稱白腳病，是由半知菌亞門無孢菌目齊整小菌核屬(SclerotiumrolfsiiSacc.)引起的一種土傳維管束病害，花生白絹病在我國長江流域以南的省份發生廣泛，在北方花生產區零星發生。近年來隨全球氣候的變暖，高水肥高密度種植模式下花生冠層郁閉的小環境導致白絹病在我國危害愈來愈嚴重，發生區域從南方蔓延到北方，造成了嚴重的經濟損失。2004年山東臨沂發病面積達6萬公頃，占全市播種面積的40％，重病田病株率達到67.3％。2007年河南鄭州東部重病田發病率達20％；同年該病害在遼寧興城首次大面積發生，一般地塊發病株率為10％左右，嚴重地塊發病株率為30％～40％。由于花生白絹病以菌核在病殘體和土層中越冬，能在土壤中存活多年，防治比較困難。目前針對該病害的防治措施主要包括與非寄主作物的輪作、深耕，這些栽培措施防治效果不理想；利用殺菌劑防治花生白絹病具有一定的防治效果，但殺菌劑防治存在高成本、破壞環境及導致病原產生抗藥性等問題。目前在國家提倡的“減施化肥和農藥”的方針下，急需建立經濟有效的防治措施。防治花生白絹病最經濟有效的防治方法是種植抗病品種，我國目前尚無高抗品種的報道，而篩選抗病品種必須建立穩定可靠的抗性鑒定技術。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種花生白絹病溫室苗期接種方法，旨建立一種簡便、可靠的白絹菌接種方法，便于苗期篩選抗白絹病的花生種質，獲得抗白絹病的材料，為抗病育種提供技術手段。為實現上述目的，本專利技術所采取的技術方案是：一種花生白絹病溫室苗...
【技術保護點】
一種花生白絹病溫室苗期接種方法，其特征在于包括如下步驟：1)白絹菌株的獲得：從田間花生白絹病株上采集白絹菌核，在室內進行分離、純化，然后利用真菌DNAITS區間通用引物ITS1和ITS4PCR擴增后序列測定，經BLAST在GenBanK比對，鑒定為Sclerotium?rolfsii；獲得白絹病菌(Sclerotium?rolfsii)菌株；2)帶菌接種物的制備：白絹菌的活化：將4℃保存白絹病菌菌株的菌核利用70wt％乙醇表面消毒30s，1wt％次氯酸鈉浸泡2min，無菌蒸餾水沖洗3次，蘸干后接種于PDA培養基上，30℃黑暗條件下培養至菌絲長出，得到活化的白絹菌絲；①白絹菌碟的制備：取活化的白絹菌絲接種于PDA培養上，30℃黑暗條件下培養3～4d，利用0.5cm的滅菌打孔器在菌落邊緣菌絲處打孔，獲得白絹菌碟；②帶菌牙簽的制備：滅菌牙簽呈扇形插入中央放置白絹菌碟的PDA培養中，培養至牙簽布滿菌絲，得到帶菌牙簽；③帶菌燕麥粒的制備：燕麥粒用水浸泡后高壓滅菌，冷卻后接種白絹菌碟，培養至燕麥粒上布滿菌絲，每天搖動培養瓶，確保燕麥粒均有菌絲生長，得到帶菌燕麥粒；3)帶菌接種物以不同方式接種花生幼...
【技術特征摘要】
1.一種花生白絹病溫室苗期接種方法，其特征在于包括如下步驟：1)白絹菌株的獲得：從田間花生白絹病株上采集白絹菌核，在室內進行分離、純化，然后利用真菌DNAITS區間通用引物ITS1和ITS4PCR擴增后序列測定，經BLAST在GenBanK比對，鑒定為Sclerotiumrolfsii；獲得白絹病菌(Sclerotiumrolfsii)菌株；2)帶菌接種物的制備：白絹菌的活化：將4℃保存白絹病菌菌株的菌核利用70wt％乙醇表面消毒30s，1wt％次氯酸鈉浸泡2min，無菌蒸餾水沖洗3次，蘸干后接種于PDA培養基上，30℃黑暗條件下培養至菌絲長出，得到活化的白絹菌絲；①白絹菌碟的制備：取活化的白絹菌絲接種于PDA培養上，30℃黑暗條件下培養3～4d，利用0.5cm的滅菌打孔器在菌落邊緣菌絲處打孔，獲得白絹菌碟；②帶菌牙簽的制備：滅菌牙簽呈扇形插入中央放置白絹菌碟的PDA培養中，培養至牙簽布滿菌絲，得到帶菌牙簽；③帶菌燕麥粒的制備：燕麥粒用水浸泡后高壓滅菌，冷卻后接種白絹菌碟，培養至燕麥粒上布滿菌絲，每天搖動培養瓶，確保燕麥粒均有菌絲生長，得到帶菌燕麥粒；3)帶菌接種物以不同方式接種花生幼苗：通過不同白絹菌的接種物接種花生幼苗，所述接種物為白絹菌碟、帶菌牙簽或帶菌燕麥粒，不同時間觀察癥狀表現；4)不同數量的帶菌燕麥粒接種花生幼苗：播種15d的花生幼苗澆水后，將帶菌燕麥粒利用撒表土法接種于花生莖基部周圍，接種量分別為1粒、2粒、3粒、4粒和5粒；每天澆水一次，接種4d后開始病害調查，間隔3d調查一次，調查4周；5)帶菌燕麥粒接種不同苗齡的花生幼苗：將帶菌燕麥粒利用撒表土法接種于播種后15d、20d、25d、30d和35d的花生植株莖基部周圍，接種量為4粒/植株，接種4d后開始病害調查，間隔3d調查一次，調查4周；6)帶菌燕麥粒接種不同花生品種/系：將帶菌燕麥粒利用撒表土法接種于播種后15d的19份品種/品系花生幼苗莖基部周圍，4粒/植株，接種4d后開始病害調查，間隔3d調查一次，調查4周。2.根據權利要求1所述的一種花生白絹病溫室苗期接種方法，其特征在于步驟1)中在室內進行分離、純化為：白絹菌核表面消毒后...
【專利技術屬性】
技術研發人員：晏立英，廖伯壽，雷永，萬麗云，淮東欣，康彥平，
申請(專利權)人：中國農業科學院油料作物研究所，
類型：發明
國別省市：湖北,42
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