【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)是從1982年12月28日公開的“鱟試劑質(zhì)量和中試工藝研究鑒定書”發(fā)展而來的。增加完整細(xì)胞的收獲量和將細(xì)胞徹底破碎是制備鱟試劑的關(guān)鍵，公知的鱟試劑生產(chǎn)工藝，采用N-乙基馬來酰胺(N-ethy maleimide，簡稱NEM)或其它黃嘌呤類藥物作為抗凝劑，使在采血、分離血細(xì)胞、洗滌血細(xì)胞等過程中。鱟血細(xì)胞不因崩解而凝集。鱟血細(xì)胞的胞膜含有巰基。NEM，茶堿、咖啡因等黃嘌呤類的藥物能和巰基結(jié)合，使胞膜得到鞏固，因此在采血和分離細(xì)胞的過程中細(xì)胞不會崩解凝集，但這類抗凝劑與鱟血細(xì)胞接觸時間過長，就會損害血細(xì)胞，影響試劑靈敏度。并將因與巰基結(jié)合太過牢固，細(xì)胞不易破裂，凝聚縮小成片狀硬塊，即使加進(jìn)崩解液，細(xì)胞也不會完全崩解，從而使有效成分的提取量大為減少。因此要嚴(yán)格控制這類抗凝劑的用量并在分離血漿后立即用洗滌劑洗棄。洗棄抗凝劑需要重復(fù)2～3次以上，這樣就增加了細(xì)胞破碎和污染的機會，所以工效低、得率少、成本高。本專利技術(shù)的任務(wù)是研究一種得率高，操作簡便，可大量收集、洗滌鱟血細(xì)胞的生產(chǎn)工藝及相應(yīng)的抗凝方法。
【技術(shù)保護(hù)點】
鱟血細(xì)胞洗滌收集工藝，在盛有含氯化鈉３％至３．１％的抗凝劑的無菌容器中采集鱟血，分離、洗滌鱟血細(xì)胞，提取鱟血細(xì)胞，本專利技術(shù)的特征是：一份３．２％至３．５％的氯化鈉溶液與兩份以上的新鮮鱟血混合，離心沉淀，抽棄血漿，留下血細(xì)胞，再用二倍量以上的３．２％至３．５％氯化鈉溶液洗滌血細(xì)胞，并把原分散在各自容器中的這種血細(xì)胞與氯化鈉溶液的混合液多份歸并在一個容器中，離心沉淀，抽棄上清液，留下適宜抽取鱟變形細(xì)胞溶解物的鱟血細(xì)胞。
【技術(shù)特征摘要】
1的特征部分解決了此任務(wù)，以0.05M三羥甲基氨基甲烷鹽酸為緩沖劑，配制PH7.2，濃度為3.3%的氯化鈉溶液，把配好的3.3%氯化鈉溶液一份盛入無菌容量瓶，再采取新鮮鱟血2份以上與一份3.3%氯化鈉溶液混合立即以1000轉(zhuǎn)/分的速度離心沉淀八分鐘，抽棄藍(lán)色上清液。留下白色沉淀物(即鱟血細(xì)胞)，加入2倍量以上的3.3%氯化鈉溶液，輕輕擺動洗滌細(xì)胞，同時把原分開在各自容器中的血細(xì)胞與氯化鈉溶液的混合液多份歸并在一個容器中，再以1600轉(zhuǎn)/分的速度離心沉淀八分鐘，抽棄上清液。得到濃集的鱟血細(xì)胞。本工藝中采用滲透壓略高于鱟血液的氯化鈉溶液，利用滲透壓差，使鱟血細(xì)胞內(nèi)液輕度外滲，細(xì)胞輕度皺縮，達(dá)到在短時間內(nèi)細(xì)胞不會崩解破碎，與公知的抗凝技術(shù)相比，因為不采用含NEM，茶堿等黃嘌呤類藥物的抗凝劑，避免了因NEM，茶堿等黃嘌呤類藥物與胞膜結(jié)合而引起的細(xì)胞損害而影響鱟試劑靈敏度及需立即多次洗滌去除抗凝劑的問題。因此分離血漿后也只需洗滌一次，加上采用歸并離心棄除洗滌劑的辦法，不必逐瓶處理，減少了血細(xì)胞因多次洗滌而破碎和受污染的機會。又提高了細(xì)胞得率，使工效提高四倍以上，成本下降50%，試劑質(zhì)量好而穩(wěn)定。生產(chǎn)操作流程1、試劑配制(1)配制3.3%氯化鈉溶液，并用0.05M三羥甲基氨基甲烷鹽酸調(diào)至PH7.2作為抗凝劑和洗滌劑。(2)無熱源蒸餾水用0.02M三羥甲基氨基甲烷鹽酸調(diào)至PH7.2作為崩解液。(3)準(zhǔn)備0.4M氯化鈣溶液(A)、1M氯化鎂溶液(B)、3.42M氯化鈉溶液(C)作為增感劑。2、所有與鱟血接觸的玻璃器皿均用清潔液浸泡、蒸餾水洗凈，于250℃干烤30分鐘。3、采血，用自來水將鱟體表的泥沙洗凈，...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：吳偉洪，
申請(專利權(quán))人：廈門市鱟試劑試驗廠，
類型：發(fā)明
國別省市：35[中國|福建]
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