B細胞增殖劑用于產生抗體的用途制造技術

一種有效地產生抗體的方法是用靶標抗原和Ｂ細胞增殖劑如抗ＣＤ４０激動劑來免疫動物。這個方法產生的抗體可在多種疾病和病癥中用作治療藥物、診斷藥物或研究試劑。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】B細胞增殖劑用于產生抗體的用途 專利
本專利技術涉及抗體的產生。更具體的說，本專利技術涉及產生和增強抗 體應答的方法，和從這種方法產生的對至少一種蛋白質或其片段具有 特異性的抗體，包括抗體的指定部分或變體，以及抗獨特型抗體，還 涉及編碼抗體的核酸、互補核酸、載體、宿主細胞和它們的制備和使 用方法，包括治療制劑、給藥和裝置。
技術介紹
單克隆抗體(mAbs)作為治療試劑的使用已成為治療各種疾病的 有效方法。另外，mAbs可代表著增進對各種疾病的免疫發病機制的 更好了解的強大工具。標準的產生mAbs的方法包括將骨髓瘤細胞與從-波免疫BALB/c 小鼠收獲的淋巴結細胞或脾細胞進行融合(K6hler and Milstein， A^ww ■256, 495-497 (1975); K6hler and Milstein, / /畫,/. 6， 511-519 (1976))。 BALB/c小鼠代表著用以產生mAbs的特選宿主，因為它們 容易獲得，且當用外來的T依賴性抗原進行敏化時，這些小鼠中的免 疫應答以所產生的T細胞衍生細胞因子偏向于Th2樣表型為特征 (Reiner and Locksley，i ev. /mmw"o/. 73, 151-177 (1995)纟宗述)。這一 Th2樣應答伴隨著高水平抗原特異性IgGl抗體的產生(Finkelman" a/.，i ev. /mmw"o/, & 303-333 (1990)),這與抗原特異性B細胞克隆的 頻率的增加和b細胞融合后雜合體的數量的增加相關聯。用Kohler和Milstein的方法產生mAb，要依賴于復雜生物過程的 成功加上收獲目的抗原特異性B細胞并使之無限增殖化的體外技術的 成功。盡管如此， 一些抗原在BALB/c小鼠中只產生低的或不可檢測的抗體滴度，這使得難以或不可能在B細胞融合后產生雜合體。因此，為了對使用從偏向Th2的小鼠收獲的B細胞進行的抗原特異性mAbs 產生做出改進，需要增加抗原特異性B細胞克隆的頻率。此外，環境因素如應激會影響適當的體液應答的產生。在與抗原 接觸時經受應激的動物，因為皮質類固醇結合淋巴細胞表面造成的直 接下調作用或者因為抑制因子的激活，其產生的抗原應答減低(Borysenko and Borysenko, Gen Hosp Psychiatry 4:59-67, 1982; Gross and Siegel， J Anim Sci， 66:2091-2094， 1988)。CD40這種細胞表面受體在所有成熟B細胞的表面上、在大多數 成熟B細胞惡性腫瘤和一些早期B細胞急性淋巴細胞性白血病中表 達，但不在漿細胞上表達(Clark， nwwe力""gms 35: 33-36 (1990》。它 還在單核細胞、樹突細胞、內皮細胞和上皮細胞上表達(van Kooten and Banchereau， 《/ lewAo.說'o/. 67: 2-17 (2000》。已發現CD40能介導很多種免疫和炎癥應答(Schonbeck and Libby， Ce〃 M /ec. h/e Sd. 58: 4-43 (2001))。 CD40配體(也稱CD154)主要見 于T細胞上(Gauchat et al., i^^SLe". 315: 259-266 (1993))。 CD40配體 對B細胞上的CD40的激活會造成B細胞增殖、分化、免疫球蛋白同 種型轉換、生發中心形成和體液記憶應答的刺激(Kawabe et al.， //W7w"z7y 1: 167—178 (1994); Castigli et al"戶rac. Ato.5W. 91: 12135-12139(1994》?？笴D40單克隆抗體對CD40的交聯會介導B細胞增殖、黏著和 分化(DiSanto et al" A^w 361: 541-543 (1993); Hollenbaugh et al" ￡MSC^. 11: 4313-4321 (1992))。已用抗CD40激動劑抗體來激活和擴 增人靜息B淋巴細胞。這已導致可供產生人雜交瘤或B細胞克隆的細 胞數的增加(Niedbala and Stott,場Mom"， 17: 299-304 (1998); Lagerkvist et al" Biotechniques, 18: 862-869 (1995》。另外，抗CD40抗 體與IL-4組合能誘導扁桃體B淋巴細胞的同型黏著、增殖和向Ig生 成細胞的分化(Bjorck et al., 1998)。因此，存在著對改進的抗體產生方法的需求，該法是能增加抗原特異性B細胞克隆在嚙齒動物如BALB/c小鼠中的頻率。專利技術概述本專利技術提供產生抗體的方法，所述方法包括用B細胞增殖劑隨同 耙標抗原一起免疫能夠產生抗體的動物。革巴標抗原可以是T細胞依賴 性抗原或T細胞非依賴性抗原。在本專利技術的一個方面，B細胞增殖劑是CD40激動劑，CD40激動 劑如抗CD40抗體激動劑或抗CD40抗體的一部分的使用能增加例如 被免疫嚙齒動物中的抗原特異性B細胞的數量。用于本專利技術的B細胞 增殖劑還可以是BAFF (BLyS)、 IL-6、 APRIL、 CD40L (CD154)和抗 IgM/IL4共刺激。本專利技術的B細胞增殖劑可以隨同用于靶向和/或用于B細胞分化 的第二劑一起使用。示例性的靶向劑是CD21。示例性的B細胞分化 劑是未折疊蛋白應答(UPR)途徑組分和各種B細胞特異性轉錄因子。在本專利技術的方法中，B細胞增殖劑可以以蛋白質形式、以編碼B 細胞增殖劑的DNA的形式或者以這兩種形式的組合進行給藥。另夕卜， 可將B細胞增殖劑(蛋白質或DNA形式)偶聯到小分子或者與隨同小 分子一起給藥。例如，B細胞增殖劑能靶向B細胞表面，而小分子能 增強抗體應答。在本專利技術的另一個方面，在用抗原和B細胞增殖劑免疫嚙齒動物 后，將抗原特異性抗體分離?？贵w生成細胞可從已用目的抗原和B細 胞增殖劑免疫的人或其它合適動物(例如嚙齒動物)的外周血或者優選 脾臟或淋巴結獲得。任何其它合適的宿主細胞也可用來表達編碼本發 明的抗體及其指定片段或變體的異源或內源核酸。融合細胞(雜交瘤) 或重組細胞可用選擇性培養條件或其它合適的公知方法進行分離，并 通過有限稀釋或細胞分選或者其它公知的方法進行克隆。能生產具有 所需特異性的抗體的細胞可通過合適的測定法(例如ELISA)來選出。本專利技術還包括已用B細胞增殖劑產生的分離哺乳動物(包括但不 限于人)抗體、免疫球蛋白、其片段、切割產物和其它指定部分和變體， 以及抗體組合物、抗獨特型抗體、編碼核酸或互補核酸、載體、宿主、組合物(composition)、組合(combination)、制劑、裝置、轉基因動物、 轉基因植物及制備和使用它們的方法。本專利技術還提供至少一種包含(a)編碼用B細胞增殖劑產生的分離 抗體和/或本文所述抗體的核酸和(b)合適的和/或藥物可接受的載體或 稀釋劑的組合物。本專利技術還提供至少一種用B細胞增殖劑組合物產生的抗體，或給 予治療有效量的該組合物來調節或治療細胞、組織、器官、動物或患 者中的至少一種疾病或病癥的方法，和/或在相關病癥之前、之后或過 程中，這是本領域公知的和/或在本文中有描述。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種在宿主動物中產生抗體的方法，所述方法包括以下步驟：　用靶標抗原免疫宿主動物；　將Ｂ細胞增殖劑給予宿主動物；　分離靶標抗原特異性抗體。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：C杜查拉，JM吉勒斯科馬，MA賴滋恩，
申請(專利權)人：森托科爾公司，
類型：發明
國別省市：US[美國]