產高活性纖溶酶的植物乳桿菌及用其發酵的果蔬汁飲料制造技術

本發明專利技術提供了一株產高活性纖溶酶的植物乳桿菌，所述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌的分類命名為植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保藏于中國科學院微生物研究所的中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCC No.17372，保藏時間為2019年3月20日。本發明專利技術還提供了利用上述植物乳桿菌發酵制備得到的果蔬汁飲料。本發明專利技術所得的產高活性纖溶酶的植物乳桿菌發酵上清液纖溶酶的酶活性為497.72U/mL；菌株發酵上清液具有較強抑菌能力；并且菌株本身對多種抗生素均無多重耐藥，對于胃腸液具有較高耐受性，還具有潛在的腸道附著能力。本發明專利技術飲料達到國家相關活菌數標準，具有良好商業化價值。

Lactobacillus plantarum producing high activity fibrinolytic enzyme and its fermented fruit and vegetable juice beverage

【技術實現步驟摘要】
產高活性纖溶酶的植物乳桿菌及用其發酵的果蔬汁飲料
本專利技術涉及生物技術和食品
，具體涉及產高活性纖溶酶的植物乳桿菌及用其發酵的果蔬汁飲料
技術介紹
植物乳桿菌(lactobacillusplantarum)是乳酸桿菌中的一種，常存在于發酵的蔬菜和果汁中。植物乳桿菌作為人體胃腸道的益生菌，具有維持腸道內菌群平衡、提高機體免疫力和促進營養物質吸收等多種功能。在食品發酵過程中，植物乳桿菌可將食品原料中的糖轉變為乳酸，同時產生抗菌肽、胞外多糖和其他代謝產物。植物乳桿菌在食品中的應用主要是在乳制品、肉制品、果蔬制品、豆制品、谷物和薯類制品等方面，具有廣闊市場。根據《可用于食品的菌種名單》(衛辦監督發〔2010〕65號)相關規定，植物乳桿菌可以直接用于食品生產。但目前鮮有植物乳桿菌產纖溶酶及相關研究報道。血栓性疾病以前多發于老年人群，但是因當代人不健康的生活習慣和飲食方式是血栓性疾病對人們健康的威脅不再僅限于老年人群。根據《中國居民營養與慢性疾病狀況報告(2015年)》數據顯示，2012年全國十八歲以上成年人中因屬于血栓性疾病的心腦血管疾病導致的死亡率為271.8/10萬，是主要的死亡原因。利用溶栓劑溶栓是血栓類疾病主要的治療方法之一，同時利用溶栓劑實現對血栓類慢性疾病的預防也備受關注。目前治療主要用的溶栓劑存在副作用大或者價格昂貴等缺點，不適用于血栓性疾病的預防。微生物種類繁多、代謝產物豐富多樣，且微生物易培養，繁殖快，因此成為發掘新型溶栓劑的重要資源。微生物源纖溶酶如鏈激酶、葡激酶、納豆激酶等都表現出良好的溶栓特性，特別是枯草芽孢桿菌分泌產生的納豆激酶已經制備保健食品實現商業化。篩選能直接用于食品發酵生產的，同時能產高活性纖溶酶的乳酸菌用于研發具有纖溶酶活性的食品可以作為預防血栓性疾病，降低此類疾病發病率的有效措施。
技術實現思路
針對現有技術的缺點和需求，本專利技術的目的之一在于獲得一種可產高活性纖溶酶、具有良好抑菌性且對多種抗生素無多重耐藥的植物乳桿菌。為了實現上述目的，本專利技術提供了一株產高活性纖溶酶的植物乳桿菌，所述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌的分類命名為植物乳桿菌Lactobacillusplantarum，保藏于中國科學院微生物研究所的中國普通微生物菌種保藏管理中心(北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所郵編100101)，保藏號為CGMCCNo.17372，保藏時間為2019年3月20日。如無特別說明，在本專利技術的說明書中，本專利技術所述的產高活性纖溶酶的植物乳桿菌簡稱為植物乳桿菌HQ-3。本專利技術的另一個目的在于提供一種果蔬汁飲料，所述果蔬汁飲料是以果蔬作為原料，并利用上述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌發酵而得。作為本專利技術的一個可選實施方式，所述果蔬為獼猴桃。本專利技術還提供了制備上述果蔬汁飲料的方法，所述方法的步驟包括：將獼猴桃進行榨汁后，加水進行調配，然后利用所述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌進行發酵，即得。作為本專利技術的一個可選的實施方案，所述方法包括如下步驟：(1)獼猴桃的選擇和處理：挑選8～9分成熟度的紅陽獼猴桃，除去病蟲和腐爛果實，備用；將挑選出的紅陽獼猴桃用螺旋榨汁機進行榨汁并果皮分離，留果漿；(2)調配：紅陽獼猴桃果漿與水按體積比1:1混合均勻后，添加80mg/100g羧甲基纖維素鈉、12g/100g白砂糖，并用檸檬酸鈉調節pH＝5.5；(3)殺菌：調配好的紅陽獼猴桃果漿在83℃加熱10min以殺滅有害微生物和致病菌；(4)發酵：滅菌處理后的紅陽獼猴桃漿冷卻至室溫，加入1％經活化后的所述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌發酵，37℃靜止發酵28h，即得。本專利技術的有益效果：本專利技術所得的產高活性纖溶酶的植物乳桿菌的纖溶酶發酵上清液酶活性為497.72U/mL；發酵上清液具有較強的抑菌能力；同時，本專利技術所得的產高活性纖溶酶的植物乳桿菌對多種抗生素均無多重耐藥性；對于胃腸液具有較高耐受性，還具有潛在的腸道附著能力。本專利技術所得的飲料達到國家關于乳酸菌發酵活菌飲料活菌數標準，同時飲料中含有高活性纖溶酶，具有良好的商業化價值。附圖說明圖1為產纖溶酶乳酸菌的篩選的初篩結果圖；圖2為產纖溶酶乳酸菌的篩選的復篩結果圖；圖3為本專利技術植物乳桿菌HQ-3的纖溶酶活性測定時的尿激酶標準曲線；圖4和圖5為本專利技術植物乳桿菌HQ-3的形態學鑒定結果圖；圖6為本專利技術植物乳桿菌HQ-31的16SrDNA擴增電泳圖；圖7為本專利技術植物乳桿菌HQ-3的系統發育樹；圖8為本專利技術植物乳桿菌HQ-3的生長曲線圖；圖9為本專利技術植物乳桿菌HQ-3的特異性黏附素基因PCR電泳圖；圖10和圖11為本專利技術植物乳桿菌HQ-3發酵上清液水解纖維蛋白方式確定的實驗結果圖。具體實施方式下面通過實施例對本專利技術進行具體描述，有必要在此指出的是以下實施例只是用于對本專利技術進行進一步的說明，不能理解為對本專利技術保護范圍的限制，該領域的技術熟練人員根據上述
技術實現思路
所做出的一些非本質的改進和調整，仍屬于本專利技術的保護范圍。實施例11試驗方法：1.1材料與試劑1.1.1實驗樣品從四川各地采集的豆豉，東北發酵大豆醬、發酵蝦醬等傳統發酵食品59份和雅安農貿市場采購的新鮮蔬菜葉等食品原料8份。1.1.2培養基MRS培養基、E-liker培養基、蔗糖硫胺培養基、LB培養基、蛋白胨水培養基、硝酸鹽培養基、MH培養基、血平板、CM培養基、脫脂乳瓊脂平板。1.1.3主要試劑牛纖維蛋白原、凝血酶(生化試劑，40U/mg)、尿激酶標準品(生化試劑，50U/mg)購自上海源葉生物科技有限公司；胃蛋白酶(生化試劑，30000U/mg)、胰蛋白酶(生化試劑，250U/mg)購自上海瑞永生物科技有限公司；SDS-PAGE試劑盒，購自武漢博士德生物工程有限公司。1.1.4菌株大腸桿菌(Escherichiacoli)ATCC25922，金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923，沙門氏菌(salmonella)由四川農業大學食品微生物實驗室提供。1.2方法1.2.1樣品處理分別用MRS液體培養基、E-liker培養基、蔗糖硫胺培養基對樣品進行富集培養，獲得不同的富集培養液。1.2.2產纖溶酶乳酸菌的分離(1)初篩：將篩選獲得乳酸菌接種于含脫脂乳平板上，37℃培養48h。在脫脂乳平板上挑取溶解圈明顯的單菌落，純化。(2)復篩：將篩獲得菌株接種于CM液體培養基中，37℃培養24h。收集菌液1mL于4℃，10000r/min離心10min，取上清液20μL于纖維蛋白平板小孔中點樣。37℃孵育18h，挑選能產生溶解圈的菌株。1.2.3纖溶活性的測定(1)標準曲線繪制：分別取31.25，62.5，125，250，500U/mL尿激本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一株產高活性纖溶酶的植物乳桿菌，其特征在于，所述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌的分類命名為植物乳桿菌Lactobacillus plantarum，保藏于中國科學院微生物研究所的中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCC No.17372，保藏時間為2019年3月20日。/n

【技術特征摘要】
1.一株產高活性纖溶酶的植物乳桿菌，其特征在于，所述產高活性纖溶酶的植物乳桿菌的分類命名為植物乳桿菌Lactobacillusplantarum，保藏于中國科學院微生物研究所的中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號為CGMCCNo.17372，保藏時間為2019年3月20日。


2.一種果蔬汁飲料，其特征在于，所述果蔬汁飲料是以果蔬作為原料，并利用權利要求1所述的產高活性纖溶酶的植物乳桿菌發酵而得。


3.根據權利要求2所述的果蔬汁飲料，其特征在于，所述果蔬為獼猴桃。


4.制備如權利要求3所述的果蔬汁飲料的方法，其特征在于，所述方法的步驟包括：
將獼猴桃進行榨汁后，加水進行調配，然后利用所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：胡欣潔，朱琦琦，何維，曹陽，吳任之，余東梅，趙俊梅，劉書亮，秦文，韓國全，張志清，王彩霞，趙勤，林德容，
申請(專利權)人：四川農業大學，
類型：發明
國別省市：四川;51