用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物制造技術

本發明專利技術提供了一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物，屬于移植物抗宿主病治療用組合物領域，包括按重量份數計的如下組分：WDR5抑制劑：1份，DOT1L抑制劑：1份；WDR5抑制劑包括WDR5?MLL抑制劑，通過WDR5抑制劑抑制組蛋白甲基化轉移酶MLL1與其催化復合物WDR5蛋白?蛋白相互作用，通過DOT1L抑制劑抑制組蛋白H3賴氨酸79甲基轉移酶DOT1L；兩種藥物合用起到協同作用，作用時間短，副作用輕微，療效維持時間長；減輕器官移植后淋巴細胞向Th1，Th17效應細胞方向分化的同時仍保留一定的分化，避免影響移植后的抗感染能力和移植物抗腫瘤效應。

Composition for the prevention and treatment of acute graft-versus-host disease

【技術實現步驟摘要】
用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物
本專利技術屬于移植物抗宿主病治療用組合物領域，具體涉及一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物及其應用。
技術介紹
移植物抗宿主病是由于移植后異體供者移植物中的T淋巴細胞，經受者發動的一系列“細胞因子風暴”刺激，大大增強了其對受者抗原的免疫反應，以受者靶細胞為目標發動細胞毒攻擊，其中皮膚、肝及腸道是主要的靶目標。根據移植物抗宿主病在移植后發生的時間，如在100天內發生者稱為急性移植物抗宿主病，在100天后發生者稱為慢性移植物抗宿主??；急性移植物抗宿主病的發生率為30％～45％，發生在移植后早期，是移植后早期死亡的重要并發癥之一，慢性者發生率低于急性。目前用于治療急性排異的藥物均為免疫抑制劑，如環孢素，他克莫司等，這類藥物有比較嚴重的腎毒性，這類藥物均需要長期使用，停藥后其免疫抑制作用均消失，部分急性排異不能控制。另一類藥物如舒萊(CD25單抗)，將急性排異中產生的大量效應T細胞清除，這類藥物雖然對急性排異相比較傳統免疫抑制劑效果稍好，但也需要反復給藥。因為大量清除效應T細胞，后期感染并發癥高，并且嚴重影響移植物抗腫瘤效應。目前有關于WDR5-MLL抑制劑和DOT1L抑制劑均處于臨床實驗階段，均用來治療腫瘤的臨床試驗，比如在clinicaltrials上的NCT02141828，NCT03701295，(DOT1L抑制劑)，發表在NatureChemicalBiologyvolume11,pages571–578(2015)上治療急性白血病的WDR5-MLL抑制劑，目前將WDR5MLL抑制劑應用在治療急性GVHD中，在世界范圍內仍未有嘗試。
技術實現思路
針對現有技術存在的不足，本專利技術的目的一是提供一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物。為實現本專利技術的上述專利技術目的，本專利技術提出以下技術方案：一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物，包括按重量份數計的如下組分；WDR5抑制劑：1-8份；DOT1L抑制劑：1-8份。優選的，包括按重量份數計的如下組分；WDR5抑制劑：1-5份；DOT1L抑制劑：1-5份。優選的，包括按重量份數計的如下組分；WDR5抑制劑：3-5份；DOT1L抑制劑：1份。優選的，包括按重量份數計的如下組分；WDR5抑制劑：5份；DOT1L抑制劑：1份。優選的，所述WDR5抑制劑包括WDR5-MLL抑制劑。本專利技術的目的二是提供一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物的應用。為實現本專利技術的上述專利技術目的，本專利技術提出以下技術方案：一種WDR5抑制劑和DOT1L抑制劑用于制備預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物的應用。通過專利技術人的研究，僅為小鼠注射DOT1L抑制劑，并不能減輕急性GVHD，只有將DOT1L抑制劑和WDR5MLL抑制劑聯合注射，才能夠減輕急性GVHD，起到治療急性GVHD的效果。綜上所述，與現有技術相比，本專利技術具有如下的有益效果：(1)本專利技術組合物為表觀遺傳學抑制劑，作用在T細胞向效應細胞分化方向，便于減輕器官移植后淋巴細胞向Th1，Th17效應細胞方向分化，但仍保留一定的分化，故不會嚴重影響移植后的抗感染能力和移植物抗腫瘤效應；(2)使用表觀遺傳學抑制劑在免疫細胞分化增殖的階段可以將這些遺傳信息向下一代遺傳，因此本專利技術組合物具有應用時間短，副作用輕微，療效維持時間長等特點；(3)本專利技術提供的組合物不僅可以用于預防器官移植中的急性排異，也可以用于治療器官移植后的急性排異。附圖說明通過閱讀參照以下附圖對非限制性實施例所作的詳細描述，本專利技術的其它特征、目的和優點將會變得更明顯：圖1為實施例1用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物應用于混合淋巴細胞反應系統的體外試驗后小鼠Th1，Th17，Treg細胞比例示意圖；圖2為實施例1-2、對比例1-4用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物中小鼠非清髓異基因移植模型，在植入供者淋巴細胞后使用OICR-9429或者EPZ5676或者兩種藥聯合使用后的小鼠生存時間示意圖；圖3為實施例1用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物使用兩種化合物注射后的小鼠的肝臟和腸道HE染色、制片圖；圖4為實施例1用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物中使用組合物注射后的小鼠脾臟研磨液的Th1，Th17，Treg細胞的比例圖；圖5為實施例1-8用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物中組分篩選流程示意圖。具體實施方式以下實施例將有助于本領域的技術人員進一步理解本專利技術，但不以任何形式限制本專利技術。對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本專利技術構思的前提下，還可以做出若干變化和改進，這些都屬于本專利技術的保護范圍。下面結合具體實施例對本專利技術進行詳細說明：如圖5所示，從眾多化合物中篩選出有可能治療急性排異的化合物：選取selleck公司的epigeneticcompoundlibrary，共包括464種化合物，體外實驗使用Balb/c小鼠的淋巴細胞(經絲裂霉素滅活，作為抗原提呈細胞)和C57BL/6小鼠的淋巴細胞混合，構建混合淋巴細胞反應。后加入各種化合物，孵育2天后，經流式細胞儀檢測淋巴細胞混合液中Th1，Th17，Treg細胞比例(PS:急性排異的主要效應細胞為Th1細胞和Th17細胞，主要為T細胞接受HLA不同抗原后向效應方向分化而來)。觀察哪些化合物可以減低Th1，Th17細胞數量，但對Treg細胞數量影響不大。經體外實驗篩選，WDR5-MLL抑制劑和DOT1L抑制劑成為備選化合物，進而在實驗中驗證這些化合物的作用。圖1為體外試驗使用WDR5-MLL抑制劑(代表物為OICR-9429)與DOT1L抑制劑(代表物為EPZ5676)，將這些化合物以不同的劑量在體外試驗中應用于混合淋巴細胞反應系統中(這時，淋巴細胞會出現擴增分化，T細胞會向Th1，Th17，Treg細胞進行分化，使用流式細胞檢測不同劑量藥物孵育后Th1，Th17，Treg細胞比例，我們發現，隨著WDR5-MLL抑制劑和DOT1L抑制劑劑量增加，T細胞向Th1，Th17分化逐漸減少；圖2為建立小鼠非清髓異基因移植模型，然后在植入供者淋巴細胞后使用OICR-9429或者EPZ5676或者兩種藥聯合使用后觀察小鼠生存時間，我們發現，兩藥聯合使用并且達到一定劑量后，小鼠生存時間顯著延長；圖3將使用兩種化合物注射后的小鼠處死，取肝臟和腸道做HE染色，制片，我們發現，相比較未用藥組肝臟，腸道急性GVHD明顯減輕。圖4將使用兩種化合物注射后的小鼠處死，取脾臟研磨后使用流式細胞儀檢測Th1，Th17，Treg細胞比例，我們發現，相比較未用藥組Th1，Th17細胞明顯減少，但仍保留一定分化，故仍保留一定抗感染能力及抗腫瘤細胞活性；一、檢測方法與檢測指標1、用于預防器官移植后的急性移植物抗本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物，其特征在于，包括按重量份數計的如下組分：/nWDR5抑制劑： 1-8份；/nDOT1L抑制劑： 1-8份。/n

【技術特征摘要】
1.一種用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物，其特征在于，包括按重量份數計的如下組分：
WDR5抑制劑：1-8份；
DOT1L抑制劑：1-8份。


2.根據權利要求1所述的用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物，其特征在于，包括按重量份數計的如下組分：
WDR5抑制劑：1-5份；
DOT1L抑制劑：1-5份。


3.根據權利要求1或2所述的用于預防和治療急性移植物抗宿主病的組合物，其特征在于，包括按重量份數計的如下組分：
WDR...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馬潔嫻，
申請(專利權)人：華東醫院，
類型：發明
國別省市：上海;31