一種陰道炎八聯檢試劑盒制造技術

本發明專利技術公開了一種陰道炎八聯檢試劑盒，其特征在于，包括反應板，所述反應板具有檢測以下指標的反應孔：β?葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、乙酰氨基?β?葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、pH；(2)稀釋液；旨在解決無法同時檢測需氧菌性陰道炎、細菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎和霉菌性陰道炎的問題，同時，解決試劑盒檢測精度欠缺的問題。

【技術實現步驟摘要】
一種陰道炎八聯檢試劑盒
本專利技術屬于體外診斷試劑
，具體涉及一種陰道炎八聯檢試劑盒。
技術介紹
陰道微生態的概念在國內經過了10余年的推廣及應用，評價體系日臻完善，檢測內容包括形態學和功能學兩個方面。形態學檢測指標包括陰道菌群密集度、多樣性、優勢菌、病原微生物(真菌及滴蟲)、Nugent評分、白細胞計數等。功能學檢測指標包括pH值、機體炎性反應標志物(白細胞酯酶)及生物化學指標，其中包括代謝產物及酶活性的檢測。陰道炎是婦科門診常見的疾病。常見的陰道炎有細菌性陰道炎(BV)、霉菌性陰道炎(VVC)、滴蟲性陰道炎(TV)和需氧菌性陰道炎(AV)四類。細菌預成酶是細菌在生長繁殖過程中合成的一系列與生長代謝有關的酶類，這些酶類能分解多種生化反應的底物，并且在有氧環境中能較長時間地保留其活性。不同種屬的細菌，其預成酶的種類不同。需氧菌性陰道炎的主要致病菌金黃色葡萄球菌、糞腸球菌、大腸埃希菌均可產生凝固酶，B族鏈球菌和大腸埃希菌代謝可產生β-葡萄糖醛酸酶；所以凝固酶和β-葡萄糖醛酸酶可用于需氧菌性陰道炎的檢測。唾液酸苷酶是某些細菌的毒力因子，在與細菌性陰道炎相關的細菌中，已知加德納菌、普雷沃菌等可產生唾液酸苷酶，唾液酸苷酶常用于檢測細菌性陰道炎。白色念珠菌和滴蟲可產生乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶，結合pH值可以將兩者區分。目前市場上陰道炎聯合檢測試劑盒有四項指標檢測、五項指標和六項指標檢測，能夠檢測細菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎和霉菌性陰道炎。但能夠同時檢測需氧菌性陰道炎、細菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎和霉菌性陰道炎的試劑盒少見報道，而臨床上存在較多的混合感染，各項指標聯合檢測利于實現全面、準確的診斷。此外，已報道試劑盒存在檢測靈敏度不高、穩定性差的問題，另外不同反應孔需要各自的顯色試劑，操作不方便。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種陰道炎八聯檢試劑盒，旨在解決無法同時檢測需氧菌性陰道炎、細菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎和霉菌性陰道炎的問題，同時，解決試劑盒檢測精度欠缺的問題。為解決上述問題，本專利技術所采用的技術方案是：一種陰道炎八聯檢試劑盒，包括反應板，所述反應板具有檢測以下指標的反應孔：β-葡萄糖醛酸酶、凝固酶、過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、pH；(2)稀釋液；所述反應板的β-葡萄糖醛酸酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷、無水乙醇、海藻糖、蒸餾水；所述反應板的凝固酶反應孔的底物包被有甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺鹽酸鹽、海藻糖和PBS緩沖液；所述反應板的過氧化氫反應孔的底物包被有過氧化物酶、4-氨基安替比林、2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸、HRP酶穩定劑、蔗糖和PBS緩沖液；所述反應板的唾液酸苷酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚神經氨酸鹽、無水乙醇、蒸餾水、海藻糖；所述反應板的白細胞酯酶底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽、海藻糖、無水乙醇、蒸餾水；所述反應板的乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶底物包被有4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、海藻糖、無水乙醇、蒸餾水；所述述反應板的脯氨酸氨基肽酶反應孔的底物包被有雙甘氨肽、L-脯氨酸對硝基苯胺三氟乙酸鹽、海藻糖和PBS緩沖鹽；所述反應板的pH反應孔包被有溴甲酚綠、氫氧化鈉；一種陰道炎八聯檢試劑盒制備方法包括以下步驟：(1)將空白濾紙放置在反應板的八個干化學反應孔中，具體地，干化學反應孔中設置倒角，并設置孔位爪；(2)向反應板的空白濾紙上分別滴加相應底物反應試劑和穩定劑保護液；(3)干燥：將完成步驟2的反應板放入37℃培養箱中干燥2h。所述β-葡萄糖醛酸酶反應孔的底物反應試劑為0.1-5g/L5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽的無水乙醇溶液，β-葡萄糖醛酸酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。所述凝固酶反應孔底物反應試劑為甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺鹽酸鹽0.2-4g/L，溶劑為PBS緩沖液；凝固酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。所述過氧化氫反應孔的底物反應試劑為：過氧化物酶40-300kU/L、4-氨基安替比林0.5-2g/L，2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸5-25g/L、HRP酶穩定劑0.1-0.5％、溶劑為PBS緩沖液，過氧化氫反應孔的穩定劑保護液為0.2-5g/L蔗糖的水溶液。所述唾液酸苷酶反應孔的底物反應試劑為：5-溴-4-氯-3-吲哚神經氨酸鹽0.1-4g/L、溶劑為無水乙醇和蒸餾水按照體積比1:1混合；唾液酸苷酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。所述白細胞酯酶反應孔的底物反應試劑為：5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽0.5-5g/L、溶劑為無水乙醇和蒸餾水按照體積比1:1混合；白細胞酯酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。所述乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶反應孔的底物反應試劑為：4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷1-8g/L、溶劑為PBS緩沖液；乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。所述脯氨酸氨基肽酶反應孔的底物反應試劑為；雙甘氨肽5-20g/L、L-脯氨酸對硝基苯胺三氟乙酸鹽2-8g/L、溶劑為PBS緩沖液，脯氨酸氨基肽酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。所述pH反應孔的底物反應試劑為溴甲酚綠0.02-2g/L、0.05mol/LNaOH，溶劑為水，pH反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。檢測試劑盒還包括用于唾液酸苷酶和凝固酶反應孔顯色的顯色劑及用于乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶反應孔的終止液，所述顯色劑為0.5-4g/L固紫B的聚氧乙烯月桂醚溶液，聚氧乙烯月桂醚的使用濃度為1-50g/L；所述終止液為80g/L氫氧化鈉的溶液。本專利技術的有益效果是：1、本專利技術一種陰道炎八聯檢試劑盒，通過對β-葡萄糖醛酸酶、凝固酶、過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶和pH值的測定，可直接區分細菌性陰道炎、霉菌性陰道炎和滴蟲性陰道炎，并可以進一步鑒定出是樣本中的需氧菌/厭氧菌和兼性厭氧菌等菌群，該方法操作簡單、快速，準確性高，適用于臨床常規檢測，此外反應板上的反應孔倒角、孔位爪、設置孔位爪固定反應紙，以防反應紙掉落，增大反應板的牢固性。2、本專利技術一種陰道炎八聯檢試劑盒，β-葡萄糖醛酸酶反應孔的溶劑采用無水乙醇，用乙醇做溶劑，水系組分占比小，解決溶解性問題，相比用乙二醇作溶劑溶液獲得更好的穩定性，傳統地用乙二醇做溶劑，雖然溶解能力強，但容易代謝氧化，生成草酸，溶液穩定性差。3、本專利技術一種陰道炎八聯檢試劑盒，過氧化氫反應孔底物包被過氧化物酶、4-氨基安替比林、2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸、HRP酶穩定劑、蔗糖和PBS緩沖液，檢測時，陰道分泌物中過氧化氫經過過氧化物酶(HRP)作用本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一種陰道炎八聯檢試劑盒，其特征在于，包括反應板，所述反應板具有檢測以下指標的反應孔：β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、pH；(2)稀釋液；/n所述反應板的β-葡萄糖醛酸苷酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷和無水乙醇；/n所述反應板的凝固酶反應孔的底物包被有甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺鹽酸鹽、海藻糖和PBS緩沖液；/n所述反應板的過氧化氫反應孔的底物包被有過氧化物酶、4-氨基安替比林、2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸、HRP酶穩定劑、蔗糖和PBS緩沖液；/n所述反應板的唾液酸苷酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚神經氨酸鹽、無水乙醇、蒸餾水、海藻糖；/n所述反應板的白細胞酯酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽、海藻糖、無水乙醇、蒸餾水；/n所述反應板的乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶反應孔的底物包被有4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、海藻糖、無水乙醇、蒸餾水；/n所述述反應板的脯氨酸氨基肽酶反應孔的底物包被有雙甘氨肽、L-脯氨酸對硝基苯胺三氟乙酸鹽、海藻糖和PBS緩沖鹽；/n所述反應板的pH反應孔的底物包被有溴甲酚綠、氫氧化鈉；/n一種陰道炎八聯檢試劑盒制備方法包括以下步驟：/n(1)將空白濾紙放置在反應板的八個干化學反應孔中，具體地，干化學反應孔中設置倒角，并設置孔位爪；/n(2)向反應板的空白濾紙上分別滴加相應底物反應試劑和穩定劑保護液；/n(3)干燥：將完成步驟2的反應板放入37℃培養箱中干燥2h。/n...

【技術特征摘要】
1.一種陰道炎八聯檢試劑盒，其特征在于，包括反應板，所述反應板具有檢測以下指標的反應孔：β-葡萄糖醛酸苷酶、凝固酶、過氧化氫、唾液酸苷酶、白細胞酯酶、乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶、脯氨酸氨基肽酶、pH；(2)稀釋液；
所述反應板的β-葡萄糖醛酸苷酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷和無水乙醇；
所述反應板的凝固酶反應孔的底物包被有甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺鹽酸鹽、海藻糖和PBS緩沖液；
所述反應板的過氧化氫反應孔的底物包被有過氧化物酶、4-氨基安替比林、2,4,6-三溴-3-羥基苯甲酸、HRP酶穩定劑、蔗糖和PBS緩沖液；
所述反應板的唾液酸苷酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚神經氨酸鹽、無水乙醇、蒸餾水、海藻糖；
所述反應板的白細胞酯酶反應孔的底物包被有5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽、海藻糖、無水乙醇、蒸餾水；
所述反應板的乙酰氨基-β-葡萄糖苷酶反應孔的底物包被有4-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷、海藻糖、無水乙醇、蒸餾水；
所述述反應板的脯氨酸氨基肽酶反應孔的底物包被有雙甘氨肽、L-脯氨酸對硝基苯胺三氟乙酸鹽、海藻糖和PBS緩沖鹽；
所述反應板的pH反應孔的底物包被有溴甲酚綠、氫氧化鈉；
一種陰道炎八聯檢試劑盒制備方法包括以下步驟：
(1)將空白濾紙放置在反應板的八個干化學反應孔中，具體地，干化學反應孔中設置倒角，并設置孔位爪；
(2)向反應板的空白濾紙上分別滴加相應底物反應試劑和穩定劑保護液；
(3)干燥：將完成步驟2的反應板放入37℃培養箱中干燥2h。


2.如權利要求1所述的一種陰道炎八聯檢試劑盒，其特征在于，所述β-葡萄糖醛酸苷酶反應孔的底物反應試劑為0.1-5g/L5-溴-4-氯-3-吲哚葡萄糖醛酸苷鹽的無水乙醇溶液，β-葡萄糖醛酸苷酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。


3.如權利要求1所述的一種陰道炎八聯檢試劑盒，其特征在于，所述凝固酶反應孔底物反應試劑為甘氨酰-精氨酰-4-甲氧基-β-萘酰胺鹽酸鹽0.2-4g/L，溶劑為PBS緩沖液；凝固酶反應孔的穩定劑保護液為20-50g/L海藻糖的水溶液。

【專利技術屬性】
技術研發人員：王訓琨，路雅麗，婁善梅，
申請(專利權)人：青島華晶生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：山東;37