細胞生長調節因子制造技術

本發明專利技術公開了一種由肌細胞和白血細胞分泌或釋放的新的物質。這種新的物質具有抑制腫瘤細胞增殖和抑制被激活淋巴細胞增殖的活性。該物質不抑制正常細胞的增殖。據本發明專利技術，這種物質可用于治療或預防癌癥，并且，該物質在體液中的，或者在通過個體細胞在其中生長而條件化的液體中的含量，可用于診斷癌癥，或用于測定個體發生癌癥的危險程度。（*該技術在2015年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本專利技術總體來說，屬于人類醫學和獸醫學領域，并涉及影響細胞生長和增殖的一些新物質。本專利技術還涉及這些物質在預防或治療疾病方面的應用。本專利技術進一步涉及一種診斷疾病的方法，或者對易患某種疾病或具有患某種疾病的誘因的個體進行普查的方法。術語匯編為了使本文敘述簡練，將使用幾個新造的術語。其中的某些術語和在本文范圍內它們應當被理解的方式如下面所述“細胞生長調節因子(GR)”-影響細胞生長或增殖的物質。GR對生長或增殖的作用可能是促進細胞的生長或增殖，或者是抑制細胞的生長或增殖。“內源性GR(EGR)”-由體內細胞分泌或釋放出的物質，它能影響體內同種細胞或者其它細胞的生長或增殖。“抑制細胞GR/EGR”-具有停止或明顯減慢細胞生長或增殖作用的GR/EGR，基本上對細胞沒有任何破壞作用。抑制細胞EGR典型地通過在細胞周期的一個階段阻止細胞周期而起作用。“低分子量-EGR(LMW-EGR)”-分子量小于大約3000道爾頓的EGR。“肌肉因子(MF)”-由肌細胞分泌或釋放的LMW-EGR。“白血細胞因子(WBF)”-由白血細胞分泌或釋放的LMW-EGR。“源細胞”-分泌或釋放EGR的細胞。“靶細胞”-受EGR作用的細胞。“條件培養基(CM)”-由于源細胞在其中生長而條件化的培養基。CM因此含有源細胞分泌的EGR。“肌細胞CM”和“白血細胞CM”-分別由于肌細胞和白血細胞在其中生長而條件化的培養基。肌細胞CM和白血細胞CM分別含有MF和WBF。上述術語還應該參照下文來解釋和理解。專利技術背景大量研究工作涉及到被稱為“細胞因子”(cytokines)的EGR的發現、表征、生物檢測和臨床開發工作。至今發現的所有細胞因子都是蛋白質類物質，具有幾千道爾頓至幾萬道爾頓的分子量范圍。細胞因子雖然各具有不同的來源和靶細胞，并具有不同活性模式，但都具有蛋白質類物質的共同特性。已有報道表明，在實驗動物中，運動可顯著地抑制腫瘤的生長和發展(S.A.Hoffman等，1962，癌癥研究，22597-599；V.E.Baracos，1989，生理病理化學雜志，67864-870)A.Szent-Gyorgyi等(1963，科學，1401391-1392)曾報導，在包括胸腺、主動脈、肌肉和腱等幾種組織的提取物中，含有二種物質，一種促進小鼠腹水瘤的生長(被他們稱為“促細胞素”)，另一種抑制其生長(被他們稱為“抑細胞素”)。抑細胞素被描述為小分子量物質，相對不穩定，在室溫下大約一周內就分解了。而且，根據其分離的方式，這種物質看來是親脂性的。T.Namba等(1968，英國實驗病理學雜志，49294-301)也描述了肌細胞提取物對腹水瘤細胞的抑制作用，并發現肌肉提取物的抑制活性是可以通過硅膜透析的。加熱提取物會影響這種抑制活性，盡管對透析液加熱后沒有發現任何作用。E.Watta等(美國專利4,708,948)公開了一種抑制腫瘤生長的大分子量多肽，也是可以從肌肉組織得到的。M.Djaldetti等(美國專利5,242,692)公開了一種來自肌細胞的，能抑制腫瘤細胞增殖的因子。這種因子是從肌細胞培養物的上清液中被分離出的，它具有通過凝膠電泳測定的在25,000-30,000道爾頓范圍內的表觀分子量。專利技術概述本專利技術基于一些由肌細胞或者白血細胞分泌、釋放或產生的新物質的發現，這些物質具有抑制腫瘤細胞增殖的生物活性，而基本上不影響正常的，非腫瘤細胞的增殖。此外，還發現，這些物質對抑制被激活的免疫細胞的增殖是有效的。據此，一方面，本專利技術提供了一種基本上被純化的細胞生長調節因子，它是(a)LMW-EGR，一種具有下列特征的物質i.它是由肌細胞，特別是肌細胞或白血細胞產生、分泌或釋放的，ii其分子量小于大約3000道爾頓，iii.不是蛋白質，iv.可溶于水，v.對熱穩定，vi.有抑制細胞增殖的生物活性，特別是抑制腫瘤細胞的增殖或抑制被激活的淋巴細胞的增殖；或者(b)一種(a)類物質的衍生物，也具有抑制細胞增殖的生物活性。另一方面，本專利技術提供了這種物質在預防和治療疾病方面的應用。據此，提供了用于預防疾病或功能紊亂的方法，包括對需要治療的對象施用有效量的該GR。賦予GR抑制增殖的活性方式之后，典型地在一段時間內對患者定期施用GR。進而，根據本專利技術的這一方面，本專利技術提供了一種含有一定量該GR的組合物。該組合物可以是一種含有治療有效量的GR和藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。這種藥物組合物可以用于預防疾病或失調，或者用于治療疾病或失調。該組合物還可以是非處方組合物，例如作為neutraceutical組合物，食品添加劑，保健食品制劑等等。最后，本專利技術的這一方面還提供了所述GR在制備這些組合物中的應用。特別優選的是用所述GR治療或預防癌癥，或者在治療或預防由于免疫系統活動過度而引起的各種病癥的范圍內，抑制(消除或降低)被激活淋巴細胞的活性，例如用于克服器官排斥作用，治療自身免疫疾病等等。本專利技術還進一步提供了用于診斷癌癥，或檢查個體癌癥狀況的方法，或者用于對易發生癌癥或具有癌癥誘因的個體進行普查的方法，這種方法包從所述個體的體液中，或從所述個體的細胞培養物的上清液中，測定所說的LMW-EGR的含量。本專利技術的另一方面是以適當的條件培養基中的活性級分的純化為基礎，制備本專利技術的GR的方法。專利技術描述新的低分子量EGR的發現是本專利技術的基礎。術語“低分子量”應當被理解為，當通過超濾法測定時，分子量小于大約3000道爾頓，特別是小于大約2000道爾頓，而優選的是小于大約500道爾頓的。技術人員知道，這些分子量都是大致的，不能看作是精確的數值。已發現本專利技術的LMW-EGR是非蛋白質類物質，即它們既不是蛋白質，也不是肽，也不是具有在其生物活性中起作用的蛋白質或肽基元的其它物質。(本專利技術的研究結果不能排除如下可能性這種LMW-EGR可以以同蛋白質或肽結合或絡合的形式存在，但在LMW-EGR作為生長調節劑的活性中，其中的蛋白質或肽基元不起任何作用，或僅有有限的作用)。根據本專利技術，至令為止，LMW-EGR是從肌細胞的CM和從白血細胞的CM中得到的。但是據信，根據本專利技術，LMW-EGR也可以從其它來源得到。因此本專利技術不局限于MF和WBF。相反地，以本專利技術的研究結果作為基礎，并通過應用標準的技術和已有的有關這種物質的知識，技術人員將不難發現其它的LMW-EGR，這些也應屬于本專利技術的范圍。已發現MF和WBF是腫瘤特異性的抑制細胞的EGR。它們在特異性地抑制腫瘤細胞生長和增殖中，具有同等的生物活性，而對正常細胞、非腫瘤細胞都沒有任何顯著的作用。此外，還發現MF和WBF都是腫瘤非特異性的(即能有效地抑制各種腫瘤細胞的生長和增殖)，以及種非特異性的(對來自各種動物物種的腫瘤細胞，都顯示有抑制生長和增殖的活性)。換句話說，MF和WBF在抑制癌細胞生長和增殖中，具有廣譜性。并且，本專利技術的研究結果還意味著，從一種動物，特別是從哺乳動物得到的MF或WBF，可以用于另一種動物，特別是哺乳動物的癌癥治療。應該指出的是，雖然發現MF和WBF是細胞抑制因子，但發現它們對細胞也可能有某種破壞性作用，特別是在長時間暴露之后。例如，在長時間暴露于MF或WBF，以及它們的衍生物之后，靶腫瘤細胞最后可能由于例如細胞凋亡而死亡。除本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種基本上純化的細胞生長調節因子（ＧＲ），它是：（ａ）ＬＭＷ－ＥＧＲ，一種具有下列特征的物質：ｉ．它是由肌細胞或者白血細胞產生、分泌或釋放的，ｉｉ．其分子量小于大約３０００道爾頓，ｉｉｉ．不是蛋白質，ｉｖ．可溶于水， ｖ．對熱穩定，ｖｉ．具有抑制細胞增殖的生物活性；或（ｂ）具有抑制細胞增殖生物活性的（ａ）中物質的衍生物。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：P費徹曼，R吉亞吉斯，
申請(專利權)人：坎菲特生物藥物有限公司，
類型：發明
國別省市：IL[以色列]