抗結直腸癌的藥物或組合物制造技術

本發明專利技術提供一種抗結直腸癌的藥物或組合物。本發明專利技術首次發現，在結直腸癌發生、發展過程中，過表達特定序列小分子RNA(如ath?miR158a或其變體)可以明顯抑制結直腸癌細胞的增殖并促進結直腸癌細胞的凋亡，從而發揮高效的抗腫瘤作用，對結直腸癌腫瘤的治療具有重要意義。

【技術實現步驟摘要】
抗結直腸癌的藥物或組合物
本專利技術屬于生物醫藥領域，具體地說，涉及一種抗結直腸癌的藥物或組合物。
技術介紹
結直腸癌(Colorectalcancer，CRC)是全球普遍可見的消化系統高發惡性腫瘤，其發病率一直呈上升趨勢，在全球惡性腫瘤發病率中已上升至第三位，并且死亡率居惡性腫瘤死因的第二位。另外，隨著人口老齡化、環境污染及飲食習慣的改變，結直腸癌的發病人數呈逐年上升的趨勢。結直腸癌發病和致死的主要原因是癌細胞轉移，但目前對CRC的轉移機制尚不清楚，使得對結直腸癌的預防和治療更加困難。目前有四種標準化的結直腸癌治療手段：外科手術、放療、化療和靶向藥物治療。市場上用于治療結直腸癌的藥物主要有：常用的西藥包括卡培他濱、氟尿嘧啶以及伊立替康等但大都不完全有效。因此，亟需探明結直腸癌發生發展的分子機制及積極尋找治療結直腸癌的新的治療靶點。小分子RNA(SpecialsRNA)主要包括miRNA和siRNA以及人工合成的miRNA/RNAmimic。miRNA(microRNA)是一類20～22nt的小分子非編碼RNA，miRNA可以通過轉錄后水平參與mRNA的調節作用。目前，在許多生物功能及疾病發生中發揮重要的作用，哺乳動物細胞核中，miRNA首先由RNA聚合酶II轉錄出較長的初始miRNA(pri-miRNA)，接著在Drosha作用下形成前體miRNA(pre-miRNA)，并被復合體轉運出細胞核。在細胞質中，在Dicer的剪切下形成雙鏈miRNA，與AGO蛋白相結合，雙鏈miRNA會被去除其中一條鏈進而形成RNA誘導沉默復合體(RISC)，從而調節基因的表達。siRNA和miRNA有著類似的作用，但是siRNA結合的AGO蛋白又區別于miRNA。miRNA在互補配對的原則下，引導RISC復合體尋找相應的靶基因，通過對下游靶基因的切割或者翻譯抑制而達到降低靶基因的表達及翻譯水平。在動物中，miRNA主要通過轉錄抑制作用，其核心的序列是從成熟序列5’開始的1-8位，第一位堿基的序列影響著miRNA所結合的AGO蛋白，而2-8位則影響了miRNA對下游靶基因翻譯的抑制效率。siRNA幾乎與下游靶基因完全配對，其核心區域從第一個堿基到最后一個堿基都非常重要。miRNA和siRNA在經過Dicer剪切后形成的復合體都能結合上AGO蛋白，它們都會對下游靶基因特異性的識別并抑制下游靶基因的表達或翻譯。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種抗結直腸癌的藥物或組合物。本專利技術的另一目的是提供ath-miR158a在制備用于抑制結直腸癌細胞生長與遷移的藥物以及結直腸癌治療中的應用。為了實現本專利技術目的，第一方面，本專利技術提供ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體或其模擬物或其衍生物或含有ath-miR158a的生物材料在制備抗結直腸癌的藥物或組合物中的應用。本專利技術中，所述ath-miR158a可以是ath-miR158a-3p和/或ath-miR158a-5p。優選地，所述ath-miR158a為ath-miR158a-5p，序列為：5’-CUUUGUCUACAAUUUUGGAAA-3’(SEQIDNO:1)。進一步地，ath-miR158a-5p的變體是指SEQIDNO:1所示序列的第2-13位發生1或2個堿基取代。進一步地，ath-miR158a-5p的變體可選自①～⑤中的任一個(SEQIDNO:2-6)：①5’-CUUUGUCCACAAUUUUGGAAA-3’；②5’-CUUUGUUCACAAUUUUGGAAA-3’；③5’-CUUUGUCUAUAAUUUUGGAAA-3’；④5’-CUUUGUCUACAACUUUGGAAA-3’；⑤5’-CUUUGUCUACAUUUUUGGAAA-3’。本專利技術中，ath-miR158a的模擬物(RNAmimics)是根據ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體的序列設計的雙鏈RNA。優選地，所述雙鏈RNA含有ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體的序列和/或其互補序列。本專利技術中，ath-miR158a的衍生物是指ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體或其模擬物序列中一個或多個核糖核苷酸被LNA、甲基化和/或磷酸化修飾。本專利技術中，所述生物材料可以是重組DNA、表達盒、轉座子、質粒載體、噬菌體載體、病毒載體、工程菌、轉基因細胞系或非可再生的植物部分等。第二方面，本專利技術提供ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體或其模擬物或其衍生物或含有ath-miR158a的生物材料在抑制結直腸癌細胞的生長與遷移以及結直腸癌治療中的應用。第三方面，本專利技術提供抗結直腸癌的藥物或組合物，其有效成分為ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體或其模擬物或其衍生物或含有ath-miR158a的生物材料。優選地，所述藥物或組合物中還含有化療劑。ath-miR158a和化療劑可以同時給藥或先后給藥。優選地，所述藥物或組合物還包含藥學及免疫學上可接受的載體。優選地，所述藥物或組合物可以是凍干粉針、注射劑、口服液、片劑、膠囊、滴丸、噴劑或貼劑等劑型。所述藥物或組合物的遞送方式包括：直接裸RNA注射法、脂質體包裹RNA直接注射法、細菌攜帶質粒表達RNA法或病毒包裝表達RNA法、納米材料組裝法。小分子化合物常用的用藥方法可以是胃腸道給藥或者是胃腸外給藥。siRNA、shRNA、抗體則一般采用胃腸外給藥。可以是局部給藥亦可以為全身給藥。借由上述技術方案，本專利技術至少具有下列優點及有益效果：本專利技術首次發現，在結直腸癌發生、發展過程中，過表達特定序列小分子RNA(如ath-miR158a或其變體)可以明顯抑制結直腸癌細胞的增殖并促進結直腸癌細胞的凋亡，從而發揮高效的抗腫瘤作用，對結直腸癌腫瘤的治療具有重要意義。附圖說明圖1為本專利技術較佳實施例中用CCK-8法檢測SpecialsRNA對HCT116細胞增殖活性的影響。圖2為本專利技術較佳實施例中用Transwell法檢測SpecialsRNA對HCT116細胞遷移活性的影響。圖3為本專利技術較佳實施例中通過蛋白質免疫印跡檢測上皮細胞間質轉化相關蛋白標志物Ecadherin(E-cad)和MMP9蛋白質表達差異。具體實施方式本專利技術提供一類特定序列的小分子RNA(SpecialsRNA)或其模擬物或其促進劑在制備抗結直腸癌藥物以及治療結直腸癌中的應用，特定序列的小分子RNA包括miRNA，siRNA，RNAmimic等小分子RNA物質。特定序列RNA序列從5’端開始，主要包括1-13位堿基序列；特定序列的小分子RNA物質包括，miRNA，siRNA以及合成的miRNA/RNAmimic等物質。包括任何應用特定序列的藥物、植物、食物等，所述序列如SEQIDNO:1-6所示。本專利技術通過體外實本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體或其模擬物或其衍生物或含有ath-miR158a的生物材料在制備抗結直腸癌的藥物或組合物中的應用。/n

【技術特征摘要】
1.ath-miR158a或其前體或其初級轉錄物或其變體或其模擬物或其衍生物或含有ath-miR158a的生物材料在制備抗結直腸癌的藥物或組合物中的應用。


2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述ath-miR158a為ath-miR158a-3p和/或ath-miR158a-5p。


3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述ath-miR158a為ath-miR158a-5p，序列如SEQIDNO:1所示。


4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，ath-miR158a-5p的變體是指SEQIDNO:1所示序列的第2-13位發生1或2個堿基取代。


5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，ath-miR158a-5p的變體選自SEQIDNO:2-6中的任一條序列。


6.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，ath-miR158a的模擬物是根據ath-miR158a或其前體或其初級轉錄...

【專利技術屬性】
技術研發人員：謝琦，王玳瑋，
申請(專利權)人：謝琦，
類型：發明
國別省市：廣東;44