新CD40結(jié)合抗體制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及能夠結(jié)合人CD40的新抗體，以及能夠結(jié)合人CD40且能夠結(jié)合人Vγ9Vδ2T細胞受體的新多特異性抗體。本發(fā)明專利技術(shù)還涉及包含本發(fā)明專利技術(shù)抗體的藥物組合物，以及本發(fā)明專利技術(shù)抗體用于醫(yī)學治療的用途。療的用途。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】新CD40結(jié)合抗體


[0001]本專利技術(shù)涉及能夠結(jié)合人CD40的新抗體，以及能夠結(jié)合人CD40且能夠結(jié)合人Vγ9Vδ2 T細胞受體的新多特異性抗體。本專利技術(shù)還涉及包含本專利技術(shù)抗體的藥物組合物，以及本專利技術(shù)抗體用于醫(yī)學治療的用途。

技術(shù)介紹

[0002]CD40是存在于大量細胞類型上的共刺激受體，所述細胞類型包括B淋巴細胞、樹突細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、造血祖細胞、血小板和基底上皮細胞。CD40配體(CD40 ligand，CD40L)與CD40的結(jié)合激活胞內(nèi)信號傳導途徑，其產(chǎn)生多種不同的生物效應(yīng)，這取決于細胞類型和微環(huán)境。CD40/CD40L結(jié)合在動脈粥樣硬化、移植排斥、凝血、感染控制和自身免疫中發(fā)揮作用。許多腫瘤細胞也表達CD40，包括B細胞惡性腫瘤和實體瘤，使CD40成為癌癥治療的潛在靶標(Vonderheide(2007)Clin Cancer Res 13：1083)。
[0003]CD40激動性以及CD40拮抗性藥物二者均已被考慮用于癌癥治療。大多數(shù)選擇CD40激動劑，根本原因有兩個：首先，CD40激動劑可通過使宿主抗原呈遞細胞活化來觸發(fā)免疫刺激，其然后驅(qū)動針對腫瘤的T細胞應(yīng)答以導致腫瘤細胞死亡。其次，CD40連接可對表達CD40的腫瘤賦予直接的腫瘤細胞毒性(Vonderheide(2007)Clin Cancer Res 13：1083)。Tai et al.(2005)Cancer Res 65：5898描述了人拮抗性抗CD40抗體(盧卡木單抗(lucatumumab)，CHIR
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12.12或HCD 122)針對多發(fā)性骨髓瘤的抗腫瘤活性。發(fā)現(xiàn)了在患有晚期淋巴瘤的復發(fā)性/難治性患者中具有適度活性(Fanala et al.(2014)Br J Haematol 164：258)。已經(jīng)研究了不同的拮抗性CD40抗體作為自身免疫病的潛在治療(Schwabe et al.(2018)J Clin Pharmacol，Aug 16)。
[0004]雖然已經(jīng)取得了顯著進展，但迄今為止還沒有CD40抗體被批準用于醫(yī)療用途，并且仍然需要治療有效但具有可接受毒性的新CD40抗體。
[0005]專利技術(shù)概述
[0006]本專利技術(shù)提供了用于基于CD40的治療的新抗體。構(gòu)建了其中CD40
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結(jié)合區(qū)與能夠結(jié)合Vγ9Vδ2 T細胞受體并因此接合Vγ9Vδ2 T細胞的結(jié)合區(qū)組合的雙特異性抗體。出人意料地，雙特異性抗體能夠拮抗CD40刺激并有效地介導對原發(fā)性慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)細胞以及原發(fā)性多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)細胞的殺傷。即使在CLL細胞已被CD40L刺激時，殺傷仍是有效的。此外，雙特異性抗體使CLL細胞對維奈托克(venetoclax)(用于治療CLL的Bcl
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2阻斷劑)敏感。
[0007]本領(lǐng)域已經(jīng)描述了具有腫瘤靶標結(jié)合特異性和T細胞結(jié)合特異性的雙特異性T細胞接合抗體，參見例如Huehls et al.(2015)Immunol Cell Biol93：290；Ellerman(2019)Methods，154：102；de Bruin et al.(2017)Oncoimmunology 7(1)：e1375641和WO2015156673。然而，結(jié)果在一種腫瘤靶標與另一種腫瘤靶標之間有顯著不同。例如，在其中T細胞靶標(CD3)結(jié)合部分與針對8種不同B細胞靶標(CD20、CD22、CD24、CD37、CD70、CD79b、CD138和HLA
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DR)的結(jié)合部分組合的一項研究中，發(fā)現(xiàn)了靶向不同腫瘤靶標的雙特異
性抗體在細胞毒性能力方面顯示出強變化，并且細胞毒性與抗原表達水平不相關(guān)。例如，盡管有中間至高的HLA
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DR和CD138表達水平，但靶向HLA
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DR或CD138的基于CD3的雙特異性抗體無法誘導細胞毒性(Engelberts et al.(2020)Ebiomedicine52：102625)。
[0008]在第一方面中，本專利技術(shù)提供了包含能夠結(jié)合人CD40的第一抗原結(jié)合區(qū)和能夠結(jié)合人Vγ9Vδ2 T細胞受體的第二抗原結(jié)合區(qū)的多特異性抗體。
[0009]在第二方面中，本專利技術(shù)提供了包含能夠結(jié)合人CD40的第一抗原結(jié)合區(qū)的抗體，其中所述抗體與具有SEQ ID NO：13中所示序列的抗體競爭與人CD40結(jié)合和/或與具有SEQ ID NO：14中所示序列的抗體競爭與人CD40結(jié)合。
[0010]在另一些方面中，本專利技術(shù)涉及包含本專利技術(shù)抗體的藥物組合物，本專利技術(shù)抗體在醫(yī)學治療中的用途，以及涉及用于產(chǎn)生本專利技術(shù)抗體的核酸構(gòu)建體、表達載體，以及涉及包含這樣的核酸構(gòu)建體或表達載體的宿主細胞。
[0011]下文描述了本專利技術(shù)的另一些方面和實施方案。
[0012]附圖簡述
[0013]圖1：抗CD40 VHH與CD40表達細胞結(jié)合。(A)WT(填充直方圖)和經(jīng)CD40轉(zhuǎn)染(未填充直方圖)HEK293T細胞上的CD40表達。(B)將CD40陰性WT或經(jīng)CD40轉(zhuǎn)染的HEK293T細胞與V12t(lμM)、V15t(lμM)、V19t(lμM)或培養(yǎng)基對照一起孵育，并隨后通過流式細胞術(shù)檢測Myc標簽。示出了在3個獨立實驗中獲得的代表性直方圖。
[0014]圖2：抗CD40 VHH與原發(fā)性CLL細胞結(jié)合。(A)原發(fā)性CLL細胞上的CD40表達(黑色直方圖：未經(jīng)染色對照，灰色直方圖：經(jīng)CD40
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PE染色)。示出了5個受試樣品的代表性直方圖。(B)將原發(fā)性CLL細胞(n＝5)與V12t(lμM)、V15t(lμM)、V19t(lμM)或培養(yǎng)基對照一起孵育，并隨后通過流式細胞術(shù)檢測Myc標簽。數(shù)據(jù)表示平均值和平均值的標準誤差(SEM)。*P＜0.05(B：與無VHH相比，進行重復測量單因素ANOVA，隨后進行Dunnett
’
s事后檢驗。)
[0015]圖3：抗CD40 VHH不是CD40的激動劑。將原發(fā)性CLL細胞(n＝6)與指定濃度的抗CD40 VHH、rmCD40L(100ng/mL)或培養(yǎng)基對照一起培養(yǎng)48小時，并通過流式細胞術(shù)進行分析。相對于培養(yǎng)基對照的(A)生存力、(B)CD86表達和(C)CD95表達。數(shù)據(jù)表示平均值和SEM。*P＜0.05。(A至C：與培養(yǎng)基對照相比，進行單因素ANOVA，隨后進行Dunnett
’
s事后檢驗)。
[0016]圖4：單價VHH V15t和V19t拮抗CD40刺激。將原發(fā)性CLL細胞(n＝6)與單價抗CD40 VHH或培養(yǎng)基對照一起預孵育30分鐘，并隨后在存在重組多聚體CD40L(100ng/mL)的情況下培養(yǎng)48小時，并通過流式細胞術(shù)進行分析。相對于培養(yǎng)基對照的(A)生存力、(B)CD86表達和(C)CD95表達。數(shù)據(jù)表示平均值和SEM。*P＜0.05，***P＜0.本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】1.多特異性抗體，其包含能夠結(jié)合人CD40的第一抗原結(jié)合區(qū)和能夠結(jié)合人Vγ9Vδ2 T細胞受體的第二抗原結(jié)合區(qū)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體是雙特異性抗體。3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第一抗原結(jié)合區(qū)是單結(jié)構(gòu)域抗體。4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第二抗原結(jié)合區(qū)是單結(jié)構(gòu)域抗體。5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第一抗原結(jié)合區(qū)和第二抗原結(jié)合區(qū)通過肽接頭共價連接。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的多特異性抗體，其中所述肽接頭包含SEQ ID NO：21中所示序列或由其組成。7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第一抗原結(jié)合區(qū)位于所述第二抗原結(jié)合區(qū)的N端。8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體與CD40單價結(jié)合并且與所述人Vγ9Vδ2 T細胞受體單價結(jié)合。9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體不是人CD40的激動劑。10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體是人CD40的拮抗劑。11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體能夠使人CD40表達細胞對維奈托克敏感。12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體與具有SEQ ID NO：13中所示序列的抗體競爭與人CD40結(jié)合和/或與具有SEQ ID NO：14中所示序列的抗體競爭與人CD40結(jié)合。13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體與具有SEQ ID NO：13中所示序列的抗體結(jié)合人CD40上相同的表位，或與具有SEQ ID NO：14中所示序列的抗體結(jié)合人CD40上相同的表位。14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第一抗原結(jié)合區(qū)包含：
·
SEQ ID NO：1中所示VH CDR1序列、SEQ ID NO：2中所示VH CDR2序列和SEQ ID NO：3中所示VH CDR3序列，或
·
SEQ ID NO：4中所示VH CDR1序列、SEQ ID NO：5中所示VH CDR2序列和SEQ ID NO：6中所示VH CDR3序列。15.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第一抗原結(jié)合區(qū)是人源化的。16.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第一抗原結(jié)合區(qū)包含以下或由以下組成：
·
SEQ ID NO：13中所示序列或SEQ ID NO：14中所示序列，或者
·
與SEQ ID NO：13中所示序列具有至少90％，例如至少92％，例如至少94％，例如至少96％，例如至少98％序列同一性的序列，或與SEQ ID NO：14中所示序列具有至少90％，例如
至少92％，例如至少94％，例如至少96％，例如至少98％序列同一性的序列。17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體能夠使人Vγ9Vδ2 T細胞活化。18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體能夠介導對來自慢性淋巴細胞白血病患者和/或來自多發(fā)性骨髓瘤患者的人CD40表達細胞的殺傷。19.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體能夠介導對來自慢性淋巴細胞白血病患者的被CD40L刺激的人CD40表達細胞的殺傷。20.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體能夠與人Vδ2結(jié)合。21.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體與具有SEQ ID NO：17中所示序列的抗體競爭與人Vδ2結(jié)合或與具有SEQ ID NO：18中所示序列的抗體競爭與人Vδ2結(jié)合。22.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述多特異性抗體與具有SEQ ID NO：17中所示序列的抗體結(jié)合人Vδ2上相同的表位，或與具有SEQ ID NO：18中所示序列的抗體結(jié)合人Vδ2上相同的表位。23.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第二抗原結(jié)合區(qū)包含SEQ ID NO：7中所示VH CDR1序列、SEQ ID NO：8中所示VH CDR2序列和SEQ ID NO：9中所示VH CDR3序列，或包含SEQ ID NO：10中所示VH CDR1序列、SEQ ID NO：11中所示VH CDR2序列和SEQ ID NO：12中所示VH CDR3序列。24.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第二抗原結(jié)合區(qū)是人源化的。25.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的多特異性抗體，其中所述第二抗原結(jié)合區(qū)包含以下或由以下組成：
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SEQ ID NO...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：約翰內(nèi)斯，
申請(專利權(quán))人：拉法醫(yī)療有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：