強力地中和狂犬病毒和其它狂犬病毒屬病毒的抗體和其用途制造技術

本發明專利技術涉及強力地中和RABV和非RABV狂犬病毒屬病毒二者感染的抗體和其抗原結合片段。本發明專利技術還涉及與抗體和抗原結合片段結合的抗原位點，以及編碼這樣的抗體和抗體片段的核酸和產生這樣的抗體和抗體片段的無限增殖化B細胞和培養的漿細胞。另外，本發明專利技術涉及本發明專利技術的抗體和抗體片段在篩選方法以及在診斷、預防和治療RABV感染和非RABV狂犬病毒屬病毒的感染中的用途。中的用途。

Antibodies that strongly neutralize rabies virus and other rabies viruses and their uses

【技術實現步驟摘要】
強力地中和狂犬病毒和其它狂犬病毒屬病毒的抗體和其用途
[0001]本申請為分案申請，原申請的申請日是2015年11月8日，申請號是201580073641.2(PCT/EP2015/002305)，專利技術名稱為“強力地中和狂犬病毒和其它狂犬病毒屬病毒的抗體和其用途”。
[0002]本專利技術涉及強力地中和狂犬病毒(rabies virus)(RABV)和非RABV狂犬病毒屬病毒(lyssavirus)二者的感染的抗體和其抗原結合片段。本專利技術還涉及與抗體和抗原結合片段結合的抗原位點，以及編碼這樣的抗體和抗體片段的核酸和產生這樣的抗體和抗體片段的無限增殖化B細胞和培養的漿細胞。另外，本專利技術涉及本專利技術的抗體和抗體片段在篩選方法以及在診斷、預防和治療RABV感染和非RABV狂犬病毒屬病毒感染中的用途。
[0003]狂犬病是一種病毒感染，其引起腦部的急性炎癥。狂犬病幾乎在全世界都有分布并且主要影響野生動物和家畜，但是也牽涉人，導致毀滅性疾病，其在不接受暴露后預防(PEP)的個體中幾乎是100％一定致死的。狂犬病的早期癥狀可以包括發燒和在暴露部位處的麻刺感。這些癥狀之后是下列癥狀中的一種或多種：劇烈運動、不受控制的興奮、恐水、不能移動身體的組成部分、精神錯亂和意識喪失。在癥狀出現之后，狂犬病幾乎總是導致死亡。感染(contract)疾病和癥狀的開始之間的時期通常是一至三個月。但是，該時期可以在少于一周至多于一年之間變化。該時期取決于病毒必須行進到達中樞神經系統的距離。
[0004]狂犬病由許多狂犬病毒屬病毒引起，包括狂犬病毒和其它狂犬病毒屬病毒，例如歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒。
[0005]狂犬病毒屬病毒具有螺旋狀對稱，具有大約180nm的長度和大約75nm的橫截面。這些病毒是有包膜的并且具有單鏈負義RNA基因組。遺傳信息被包裝為核糖核蛋白絡合物，其中RNA被病毒核蛋白緊密地結合。病毒的RNA基因組編碼順序高度保守的五種基因：核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基質蛋白(M)、糖蛋白(G)和病毒RNA聚合酶(L)。
[0006]狂犬病毒屬被細分為三個遺傳譜系(phylogroup)。遺傳譜系I包括物種：狂犬病毒(RABV)、1型(EBLV
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1)和2型(EBLV
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2)歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒、杜文黑基病毒(DUVV)、澳大利亞蝙蝠狂犬病毒屬病毒(ABLV)、阿拉萬病毒(Aravan virus)(ARAV)、庫詹德病毒(Khujand virus)(KHUV)、博克洛(Bokeloh)蝙蝠狂犬病毒屬病毒(BBLV)和伊爾庫特(Irkut)病毒(IRKV)。遺傳譜系II包括拉哥斯蝙蝠病毒(LBV)、莫科拉病毒(MOKV)和希莫尼蝙蝠病毒(SHIV或SHIBV)。其余的病毒——西高加索蝙蝠病毒(WCBV)和伊科馬(Ikoma)狂犬病毒屬病毒(IKOV)不能包含在這些遺傳譜系的任一種中，但是彼此系統發生地相關聯，但是，它們的遺傳距離大于遺傳譜系I和II之間的距離(Bourhy,H.等.Journal of Clinical Microbiology 30,2419
–
2426,1992；Bourhy,H.等.Virology 194,70
–
81,1993；Amengual,B.等.J Gen.Virol 78,2319
–
2328,1997；Hooper,P.T.等.Bulletin de l'Institut Pasteur 95,209
–
218,1997；Kuzmin,I.V.等.Virus Res 149,197
–
210,2010；Badrane,H.等.J Virol 75,3268
–
3276,2001；Marston,D.A.等.Emerg Infect Dis 18,664
–
667,2012)。重要地，這些狂犬病毒屬病毒的所有基因型本質上已經引起人和/或動物死亡(Badrane,H.等.J Virol 75,3268
–
3276,2001)。
[0007]狂犬病毒(RABV)是待鑒定的十四種狂犬病毒屬病毒基因型中的第一種。狂犬病毒
被分類為大的子彈狀的、有包膜的、單鏈RNA病毒并且狂犬病毒的基因組編碼五種病毒蛋白：RNA依賴性RNA聚合酶(L)；核蛋白(N)；磷酸化蛋白(P)；基質蛋白(M)，其位于病毒包膜的內側上；和外表面糖蛋白(G)。G蛋白(62
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67kDa)是由505個氨基酸組成的I型糖蛋白，其具有兩個至四個潛在的N
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糖基化位點。G蛋白覆蓋病毒粒子包膜的外表面并且是唯一的靶抗原，其能夠誘發中和病毒的抗體。
[0008]狂犬病在全球范圍內是普遍的并且在暴露于狂犬病之后，通常在來自被感染動物(狗、蝙蝠、狐貍、貓、猴子、浣熊、臭鼬、牛、狼、土狼和其它家畜及野生動物)的咬傷之后，大約10
×
106個人/年被治療。每年，一些40,000到70,000個人被估計死于該疾病，主要在非洲、中國和印度，并且在全世界50％的狂犬病病例在兒童中發生。這些數據強調了對于安全的、有效的和負擔得起的狂犬病治療的重要的、未滿足的醫療需要。
[0009]狂犬病預防通過暴露前或暴露后接種疫苗來實現，主要使用現代的、基于組織培養的疫苗。對于處于高風險下的那些人而言，推薦暴露之前的免疫(暴露前預防(PrEP))，并且通過施用狂犬病疫苗(主動免疫接種)實現。高風險組包括與蝙蝠一起工作的人或者在狂犬病普遍的世界區域內度過長時間的人。而且，對于旅行至非洲和亞洲國家——在這里狂犬病是地方病——的人而言，推薦抗狂犬病疫苗。
[0010]當前可利用的狂犬病疫苗包括最廣泛使用的但是高風險傾向的神經組織疫苗，或者更安全的但是成本更高的細胞培養和雞胚培養(embryonated egg)疫苗(CCEEV)。在德國，例如，僅兩種抗狂犬病疫苗處于市售中，和“Tollwut
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Impfstoff(人二倍體細胞[HDC])inaktiviert”。這些疫苗包含滅活的狂犬病毒。對于暴露前和暴露后使用而言，兩種疫苗均是推薦的。
[0011]在暴露于病毒之后，如果人在感染之后盡可能早的接受治療，即在感染后的頭幾天期間，則利用狂犬病疫苗的暴露后預防(PEP)和狂犬病免疫球蛋白(RIG)是預防疾病的標準治療。如果不治療直到癥狀開始，則狂犬病幾乎是100％致死的。因而，當前，不存在用于狂犬病的治療。
[0012]當某人假定被病毒感染時，當前使用的“治療”是暴露后預防(PEP)，其將狂犬病免疫球蛋白(RIG)——具體而言，人或馬狂犬病免疫球蛋白(分別為HRIG和ERIG)——與狂犬病疫苗組合。具體而言，根據狂犬病疫苗制造商的信息，患者接受一個劑量的RIG(被動免疫接種)和若干劑量的狂犬病疫苗(主動免疫接種)。在廣泛使用的標準療法中，例如，五個劑量的疫苗在28天的時期內被施用，即第一劑量的狂犬病疫苗在暴露后盡快給予，優本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種分離的抗體或其抗原結合片段，其以低于10000ng/ml的IC
50
中和(i)RABV和(ii)至少50％的非RABV狂犬病毒屬病毒的狂犬病毒屬病毒感染，所述非RABV狂犬病毒屬病毒選自DUVV、EBLV
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1、EBLV
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2、ABLV、IRKV、KHUV、ARAV、LBV、MOK、SHIV、BBLV和WCBV。2.根據權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其特征在于所述抗體或抗原結合片段中和(i)RABV和(ii)至少50％的非RABV狂犬病毒屬病毒的所有分離群的狂犬病毒屬病毒感染，所述非RABV狂犬病毒屬病毒選自ABLV/澳大利亞/蝙蝠/9810AUS
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1998/V1039
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2011/ABLV、98010/ABLV、1301博克洛蝙蝠狂犬病毒屬病毒/BBLV、86132SA/DUVV、DUVV/南非/人/96132SA
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1971/RS639
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2012/DUVV、EBLV1a/法國/蝙蝠/122938
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2002/V3951
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2009/EBLV
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1、EBLV1b/法國/蝙蝠/8918
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1989/EBLV
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1、EBLV2/UK/蝙蝠/RV1332
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2002/V3951
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2009/EBLV
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2、94112/EBLV
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2、02053/EBLV
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2、8619/LBV、MOK/MOK、希莫尼蝙蝠病毒/SHIV、西高加索蝙蝠病毒/WCBV、澳大利亞蝙蝠狂犬病毒屬病毒/RV634/ABLV、阿拉萬病毒/ARAV、杜文黑基病毒RSA2006/DUVV、杜文黑基病毒ZIM86
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RV131/DUVV、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒1.RV20/EBLV
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1、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒1.RV9/EBLV
?
1、EBLV1a/法國/蝙蝠/122938
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2002/V3951
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2009/EBLV
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1、EBLV2/UK/蝙蝠/RV1332
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2002/V3951
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2009/EBLV
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2、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒2.RV1787/EBLV
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2、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒2.RV628/EBLV
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2、伊爾庫特病毒/IRKV、庫詹德病毒/KHUV、8619/LBV、拉哥斯蝙蝠病毒NIG56
?
RV1/LBV、拉哥斯蝙蝠病毒SA2004/LBV、莫科拉病毒NIG68.RV4/MOK、莫科拉病毒98/071RA36/MOK和伊科馬狂犬病毒屬病毒/IKOV，對于作為傳染性病毒測試的ABLV/澳大利亞/蝙蝠/9810AUS
?
1998/V1039
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2011/ABLV、98010/ABLV、1301博克洛蝙蝠狂犬病毒屬病毒/BBLV、86132SA/DUVV、DUVV/南非/人/96132SA
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1971/RS639
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2012/DUVV、EBLV1a/法國/蝙蝠/122938
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2002/V3951
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2009/EBLV
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1、EBLV1b/法國/蝙蝠/8918
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1989/EBLV
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1、EBLV2/UK/蝙蝠/RV1332
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2002/V3951
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2009/EBLV
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2、94112/EBLV
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2、02053/EBLV
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2、8619/LBV、MOK/MOK，具有低于10000ng/ml的IC
50
，并且對于作為假型病毒測試的希莫尼蝙蝠病毒/SHIV、西高加索蝙蝠病毒/WCBV、澳大利亞蝙蝠狂犬病毒屬病毒/RV634/ABLV、阿拉萬病毒/ARAV、杜文黑基病毒RSA2006/DUVV、杜文黑基病毒ZIM86
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RV131/DUVV、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒1.RV20/EBLV
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1、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒1.RV9/EBLV
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1、EBLV1a/法國/蝙蝠/122938
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2002/V3951
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2009/EBLV
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1、EBLV2/UK/蝙蝠/RV1332
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2002/V3951
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2009/EBLV
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2、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒2.RV1787/EBLV
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2、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒2.RV628/EBLV
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2、伊爾庫特病毒/IRKV、庫詹德病毒/KHUV、8619/LBV、拉哥斯蝙蝠病毒NIG56
?
RV1/LBV、拉哥斯蝙蝠病毒SA2004/LBV、莫科拉病毒NIG68.RV4/MOK、莫科拉病毒98/071RA36/MOK和伊科馬狂犬病毒屬病毒/IKOV，具有低于10000ng/ml的IC
90
。3.根據權利要求1或2所述的抗體或其抗原結合片段，其特征在于所述抗體或抗原結合片段以低于10000ng/ml的IC
50
值中和至少70％的非RABV遺傳譜系I狂犬病毒屬病毒的狂犬病毒屬病毒感染，所述非RABV遺傳譜系I狂犬病毒屬病毒選自DUVV、EBLV
?
1、EBLV
?
2、ABLV、IRKV、KHUV和ARAV。4.根據權利要求1
?
3中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其特征在于所述抗體或抗原結合片段中和至少70％的非RABV遺傳譜系I狂犬病毒屬病毒的分離群的狂犬病毒屬病毒感染，所述非RABV遺傳譜系I狂犬病毒屬病毒選自ABLV/澳大利亞/蝙蝠/9810AUS
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1998/V1039
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2011/ABLV、98010/ABLV、1301博克洛蝙蝠狂犬病毒屬病毒/BBLV、86132SA/DUVV、DUVV/南非/人/96132SA
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1971/RS639
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2012/DUVV、EBLV1a/法國/蝙蝠/122938
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2002/V3951
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2009/EBLV
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1、EBLV1b/法國/蝙蝠/8918
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1989/EBLV
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1、EBLV2/UK/蝙蝠/RV1332
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2002/V3951
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2009/EBLV
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2、94112/EBLV
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2、02053/EBLV
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2、澳大利亞蝙蝠狂犬病毒屬病毒/RV634/ABLV、阿拉萬病毒/ARAV、杜文黑基病毒RSA2006/DUVV、杜文黑基病毒ZIM86
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RV131/DUVV、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒1.RV20/EBLV
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1、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒1.RV9/EBLV
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1、EBLV1a/法國/蝙蝠/122938
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2002/V3951
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2009/EBLV
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1、EBLV2/UK/蝙蝠/RV1332
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2002/V3951
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2009/EBLV
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2、歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒2.RV1787/EBLV
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2和歐洲蝙蝠狂犬病毒屬病毒2.RV628/EBLV
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2、伊爾庫特病毒/IRKV、庫詹德病毒/KHUV，對于作為傳染性病毒測試的ABLV/澳大利亞/蝙蝠/9810AUS
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1998/V1039
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2011/ABLV、98010/ABLV、1301博克洛蝙蝠狂犬病毒屬病毒/BBLV、86132SA/DUVV、DUVV/南非/人/96132SA
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1971/R...

【專利技術屬性】
技術研發人員：D，
申請(專利權)人：巴斯德研究院，
類型：發明
國別省市：