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    一種基于多色碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)抗生素的方法技術(shù)

    技術(shù)編號(hào):36690162 閱讀:23 留言:0更新日期:2023-02-27 19:56
    本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種基于多色碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)抗生素的方法,屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)將紙基微流控芯片檢測(cè)技術(shù)與熒光納米材料生物傳感平臺(tái)相結(jié)合,可應(yīng)用于同時(shí)可視化檢測(cè)三種抗生素,并通過結(jié)合生物識(shí)別分子,使檢測(cè)方法具有更好的特異性,能夠解決以往需專業(yè)人員操作和依賴大型檢測(cè)儀器的問題,實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè),同時(shí)該芯片的制造方法簡(jiǎn)單、成本低、便攜,適用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。適用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。適用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。

    【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
    一種基于多色碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)抗生素的方法


    [0001]本專利技術(shù)涉及一種基于多色碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)抗生素的方法,屬于檢測(cè)


    技術(shù)介紹

    [0002]抗生素出現(xiàn)的近一個(gè)世紀(jì)以來,主要應(yīng)用于治療和預(yù)防人類及動(dòng)物的疾病。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中,抗生素通常用來控制各種細(xì)菌性疾病、促進(jìn)水產(chǎn)品生長(zhǎng)、提高飼料利用率和降低某些營養(yǎng)成分的需求量。但抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖的廣泛使用及其難降解性不可避免地造成了水環(huán)境中抗生素的大量殘留,導(dǎo)致對(duì)非目標(biāo)生物的生物累積作用和高毒性。因此對(duì)水產(chǎn)品中抗生素殘留的檢測(cè)對(duì)食品安全具有重要意義。基于微生物法、色譜法和傳統(tǒng)的免疫分析方法的檢測(cè)技術(shù)較為成熟,但是具有成本高、試劑消耗較大和步驟復(fù)雜等不足。
    [0003]紙基微流控芯片(μPADs)是以紙張代替?zhèn)鹘y(tǒng)的微流控芯片基底材料(玻璃、硅片等),通過微加工技術(shù)(蠟印、光刻等)在紙張表面構(gòu)建通道網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析檢測(cè)。集成了液體進(jìn)樣、分子反應(yīng)、信號(hào)檢測(cè)等一系列復(fù)雜的操作,具有成本低廉、便于攜帶、操作簡(jiǎn)單、生物相容性好、可多元檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。
    [0004]碳量子點(diǎn)是近年來發(fā)現(xiàn)的以碳為骨架結(jié)構(gòu)的新型納米材料,是一種分散的、尺寸小于10nm的類球形的納米顆粒。由于碳量子點(diǎn)不僅表現(xiàn)出極好的熒光性、強(qiáng)的穩(wěn)定性、很好的耐光性、耐漂白性好、可調(diào)控的發(fā)射波長(zhǎng)等優(yōu)越的熒光性能,還擁有較低的毒性、很好的生物相容性、較低的相對(duì)分子量和極小的顆粒粒徑等特點(diǎn),因此在替代傳統(tǒng)的熒光染料和量子點(diǎn)而應(yīng)用于光學(xué)、生命科學(xué)上的研究中很有發(fā)展前景。
    [0005]如果能將紙基微流控芯片與熒光納米材料分析檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合,可開發(fā)出靈敏、快速、廉價(jià)的新型紙基微流控芯片多重檢測(cè)分析裝置,對(duì)于未來的生物、化學(xué)分析的領(lǐng)域具有重要的科學(xué)意義和價(jià)值。

    技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

    [0006]本專利技術(shù)披露了一種成本較低的基于多色熒光碳量子點(diǎn)的紙基微流控芯片,該芯片可應(yīng)用于同時(shí)可視化檢測(cè)三種抗生素,并通過結(jié)合生物識(shí)別分子,使檢測(cè)方法具有更好的特異性,能夠解決以往需專業(yè)人員操作和依賴大型檢測(cè)儀器的問題,實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè),同時(shí)該芯片的制造方法簡(jiǎn)單、成本低、便攜,適用于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)。
    [0007]本專利技術(shù)提供了一種基于多色熒光碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)芯片,所述紙基微流控檢測(cè)芯片是扇形的,包括黑色疏水區(qū)域、三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域、三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)域、三條親水通道、一個(gè)親水尖端;所述三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域分別是左側(cè)矩形區(qū)域、中間圓形區(qū)域、右邊六邊形區(qū)域,三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域分別連通三條親水通道;所述三條親水通道平均分布在紙基微流控檢測(cè)芯片上,用于連通親水檢測(cè)區(qū)域和親水尖端;所述三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)域分別位于每條親水通道的中間位置且分別與所述三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域連通;所述一個(gè)親水尖端即扇形試紙的底部尖端,用于在檢測(cè)
    時(shí)吸取待測(cè)溶液;
    [0008]紙基微流控檢測(cè)芯片上除了三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域、三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)域、三條親水通道、一個(gè)親水尖端之外的部分是所述黑色疏水區(qū)域;
    [0009]所述三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域分別用于檢測(cè)待測(cè)樣品中不同的抗生素,分別具有紅色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針、綠色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針、藍(lán)色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針,所述檢測(cè)探針具有能夠與抗生素結(jié)合的核苷酸適配體序列,沒有與抗生素結(jié)合的檢測(cè)探針不呈現(xiàn)熒光,與抗生素結(jié)合的檢測(cè)探針恢復(fù)熒光。
    [0010]所述左側(cè)矩形區(qū)域用于磺胺二甲嘧啶的檢測(cè),所述中間圓形區(qū)域用于土霉素的檢測(cè),所述右邊六邊形區(qū)域用于氯霉素的檢測(cè)。
    [0011]所述紙基微流控芯片為半徑30mm的扇形。
    [0012]所述左側(cè)矩形區(qū)域的尺寸是5mm
    ×
    5mm,所述中間圓形區(qū)域的直徑是5mm,所述右邊六邊形區(qū)域是邊長(zhǎng)3mm的正六邊形。
    [0013]所述三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)均為直徑4mm的圓形。
    [0014]所述三條親水通道長(zhǎng)度均為13mm,寬度均為1.5mm。
    [0015]所述親水尖端為半徑12mm的1/4圓形。
    [0016]本專利技術(shù)的第二個(gè)目的是:提供所述基于多色熒光碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)芯片的制備方法,所述方法包括以下步驟:
    [0017](1)利用碳粉激光打印機(jī)按AutoCAD軟件設(shè)計(jì)的扇形形狀在試紙上打印出扇形圖案,沿扇形圖案邊緣剪裁,得到扇形試紙,再在200℃高溫烘箱中加熱1h,冷卻至室溫后,置于自封袋中備用;
    [0018](2)在待用的紙基微流控芯片上的親水檢測(cè)區(qū)域分別滴加紅色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針、綠色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針、藍(lán)色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針;每個(gè)親水檢測(cè)區(qū)域中檢測(cè)探針的滴加量為25μL。
    [0019]所述紅色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針制備方法:以水熱法利用檸檬酸和中性紅合成紅色熒光發(fā)射的碳量子點(diǎn);
    [0020]具體地,用EDC/NHS超聲活化紅色碳量子點(diǎn)的羧基30min,與濃度為5μM的修飾氨基的適配體1孵育12h;孵育結(jié)束后,與濃度為0.25mg/mL的二硫化鉬納米片孵育15min后待用;所述適配體1是磺胺二甲基嘧啶適配體,序列是CGTACGGTCGACGCTAGCTTAGCTTATGCGTTGGCCGGGATAAGGATCCAGCCGTTGTAG ATTTGCGTTCTAACTCTCCACGTGGAGCTCGGATCC;
    [0021]所述綠色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針制備方法:以水熱法利用檸檬酸和對(duì)苯二胺合成綠色熒光發(fā)射的碳量子點(diǎn);
    [0022]具體地,用EDC/NHS超聲活化綠色碳量子點(diǎn)的羧基30min,與濃度為5μM的修飾氨基的適配體2孵育12h;孵育結(jié)束后,與濃度為0.3mg/mL的二硫化鉬納米片孵育15min后待用;所述適配體2是土霉素適配體,序列是CGTACGGAATTCGCTAGCCGAGTTGAGCCGGGCGCGGTACGGGTACTGGTATGTGTGGGGATCCGAGCTCCACGTG;
    [0023]所述藍(lán)色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針制備方法:以水熱法利用檸檬酸和鄰苯二胺合成藍(lán)色熒光發(fā)射的碳量子點(diǎn);
    [0024]具體地,用EDC/NHS超聲活化藍(lán)色碳量子點(diǎn)的羧基30min,與濃度為5μM的修飾氨基的適配體3孵育12h;孵育結(jié)束后,與濃度為0.3mg/mL的二硫化鉬納米片孵育15min后待用;
    所述適配體3是氯霉素適配體,序列是AGCAGCACAGAGGTCAGATGACTTCAGTGAGTTGTCCCACGGTCGGCGAGTCGGTGGTAGCCTATGCGTGCTACCGTGAA。
    [0025]本專利技術(shù)還提供一種所述基于多色熒光碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)芯片在同時(shí)檢測(cè)三種抗生素方面的應(yīng)用。所述三種抗生素是磺胺二甲基嘧啶、土霉素和氯霉素。
    [0026]本專利技術(shù)還提供一種同時(shí)快速檢測(cè)磺胺二甲基嘧啶、土霉素、氯霉素三種抗生素的方法,所述方法是采用上述基于多色熒光碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)芯片進(jìn)行檢測(cè),將紙基微流控檢測(cè)芯片的親水尖端插入待測(cè)溶液中,反應(yīng)10min后,將熒光紙基微流控芯本文檔來自技高網(wǎng)
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    【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

    【技術(shù)特征摘要】
    1.一種基于多色熒光碳量子點(diǎn)的紙基微流控檢測(cè)芯片,其特征在于,所述紙基微流控檢測(cè)芯片是扇形的,包括黑色疏水區(qū)域、三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域、三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)域、三條親水通道、一個(gè)親水尖端;所述三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域分別是左側(cè)矩形區(qū)域、中間圓形區(qū)域、右邊六邊形區(qū)域,三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域分別連通三條親水通道;所述三條親水通道平均分布在紙基微流控檢測(cè)芯片上,用于連通親水檢測(cè)區(qū)域和親水尖端;所述三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)域分別位于每條親水通道的中間位置且分別與所述三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域連通;所述一個(gè)親水尖端即扇形試紙的底部尖端,用于在檢測(cè)時(shí)吸取待測(cè)溶液;紙基微流控檢測(cè)芯片上除了三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域、三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)域、三條親水通道、一個(gè)親水尖端之外的部分是所述黑色疏水區(qū)域;所述三個(gè)不同形狀的親水檢測(cè)區(qū)域分別用于檢測(cè)待測(cè)樣品中不同的抗生素,分別具有紅色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針、綠色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針、藍(lán)色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針,所述檢測(cè)探針具有能夠與抗生素結(jié)合的核苷酸適配體序列,沒有與抗生素結(jié)合的檢測(cè)探針不呈現(xiàn)熒光,與抗生素結(jié)合的檢測(cè)探針恢復(fù)熒光。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紙基微流控檢測(cè)芯片,其特征在于,所述左側(cè)矩形區(qū)域用于磺胺二甲嘧啶的檢測(cè),所述中間圓形區(qū)域用于土霉素的檢測(cè),所述右邊六邊形區(qū)域用于氯霉素的檢測(cè)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紙基微流控檢測(cè)芯片,其特征在于,所述紙基微流控芯片為半徑30mm的扇形,所述左側(cè)矩形區(qū)域的尺寸是5mm
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    5mm,所述中間圓形區(qū)域的直徑是5mm,所述右邊六邊形區(qū)域是邊長(zhǎng)3mm的正六邊形,所述三個(gè)圓形的親水緩沖區(qū)均為直徑4mm的圓形,所述三條親水通道長(zhǎng)度均為13mm,寬度均為1.5mm,所述親水尖端為半徑12mm的1/4圓形。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的紙基微流控檢測(cè)芯片,其特征在于,(1)紅色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針制備方法:用EDC/NHS超聲活化紅色碳量子點(diǎn)的羧基3,與修飾氨基的適配體1孵育;孵育結(jié)束后,與濃度為0.25mg/mL的二硫化鉬納米片孵育15min后待用;所述適配體1是磺胺二甲基嘧啶適配體;綠色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針制備方法:用EDC/NHS超聲活化綠色碳量子點(diǎn)的羧基,與修飾氨基的適配體2孵育;孵育結(jié)束后,與濃度為0.3mg/mL的二硫化鉬納米片孵育15min后待用;所述適配體2是土霉素適配體;藍(lán)色熒光碳量子點(diǎn)的檢測(cè)探針制備方法:用EDC/NHS超聲活化藍(lán)色碳量子點(diǎn)的羧基,與修飾氨基的適配體3孵育;孵育結(jié)束后,與濃度為0.3mg/mL的二硫化鉬納米片孵育15min后待用;所述適配體3是氯霉素適配體。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的紙基微流控檢測(cè)芯片,其特征在于,所述適配體1的序列是CGTACGGTCGACGCTAGCTTAGCTTATGCGTTGGCCGGGATAAGGATCCAGCCGTTGTAGATTTGCGTTCTAACTCTCCACGTGGAGCTCGGATCC;所述適配體2的序列是CGTACGGAATTCGCTAGCCGAGTTGAGCCGGGCGCGGTAC...

    【專利技術(shù)屬性】
    技術(shù)研發(fā)人員:吳世嘉佟鑫玉段諾林先鋒
    申請(qǐng)(專利權(quán))人:江南大學(xué)
    類型:發(fā)明
    國別省市:

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