一種巨噬細胞納米顆粒復合物及其制備方法與應用技術

本發明專利技術公開了一種巨噬細胞納米顆粒復合物及其制備方法與應用，所述巨噬細胞納米顆粒復合物為巨噬細胞通過N3

【技術實現步驟摘要】
一種巨噬細胞納米顆粒復合物及其制備方法與應用


[0001]本專利技術屬于納米材料領域，具體涉及一種巨噬細胞納米顆粒復合物及其制備方法與應用。

技術介紹

[0002]癌癥是當今威脅人類健康的主要疾病之一。近年來提出的近紅外光介導的光熱治療，能夠對腫瘤組織進行定點清除并且對正常組織具有較低的毒副作用，為腫瘤的治療提供了新的方法。納米材料在生物醫學方面的應用和研究是納米科技的一個十分重要方面。研究納米技術在生命醫學上的應用，可以在納米尺度上比較清楚認識生物大分子的精細結構及相應功能的關系，獲取生命信息或物質。
[0003]巨噬細胞是腫瘤微環境的重要組成部分，在血管生成、細胞外基質重塑、癌細胞增殖、轉移和免疫抑制以及對化療藥物的耐藥性和檢查點阻斷免疫治療中發揮作用。適當激活時，巨噬細胞可以介導癌細胞的吞噬和細胞毒性腫瘤殺傷，并與先天性和適應性免疫系統的組成部分進行有效的雙向相互作用。因此，它們已成為癌癥治療中的治療靶點。巨噬細胞本身的吞噬能力很強，易于與藥物結合，這些特點為單核
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巨噬細胞成為藥物載體提供了可能。但藥物直接與單核巨噬細胞結合時有時會出現載藥量過低、藥物提前釋放和藥物活性被細胞影響等問題。因此，修飾巨噬細胞表面，為巨噬細胞納入新的功能是迫切需要的。
[0004]相關技術有采用正電荷納米顆粒吸附于巨噬細胞表面來修飾巨噬細胞表面，但是正負電荷吸附為非共價連接，在復雜溶液環境中容易脫落；也有通過馬來酰亞胺基團和巨噬細胞上的巰基偶聯以實現對巨噬細胞的選擇性修飾，但是新生成的C
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S鍵在生理條件下穩定性不足，會發生逆邁克爾加成，在有競爭性的巰基化合物(例如半胱氨酸)時更不穩定。因此，仍然亟需新的對巨噬細胞表面的修飾方法。

技術實現思路

[0005]本專利技術旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本專利技術提出一種巨噬細胞納米顆粒復合物，所述巨噬細胞納米顆粒復合物連接穩定，特異性好。
[0006]本專利技術還提出一種上述巨噬細胞納米顆粒復合物的制備方法。
[0007]本專利技術還提出一種上述巨噬細胞納米顆粒復合物的應用。
[0008]根據本專利技術的一個方面，提出了一種巨噬細胞納米顆粒復合物，所述巨噬細胞納米顆粒復合物為巨噬細胞通過N3
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DBCO連接納米顆粒得到。
[0009]在本專利技術的一些實施方式中，所述巨噬細胞納米顆粒復合物的粒徑為130
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180nm。
[0010]根據本專利技術的第二方面，提出了一種巨噬細胞納米顆粒復合物的制備方法，所述方法包括以下步驟：
[0011]S1、在巨噬細胞表面修飾疊氮基團；
[0012]S2、制備納米顆粒：將疏水性多聚物溶于第一溶劑，得到第一混合溶液，將吲哚菁綠、卵磷脂和含有二苯并環辛炔的磷脂類物質溶解于第二溶劑得到第二混合溶液，將第一
混合溶液逐滴加入到第二混合溶液中，超聲3
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8min，得到納米顆粒；
[0013]S3、將步驟S1制備得到的表面修飾疊氮基團巨噬細胞與步驟S2制備得到的納米顆粒進行連接，制備得到巨噬細胞納米顆粒復合物。
[0014]在本專利技術的一些實施方式中，所述巨噬細胞為人源巨噬細胞。
[0015]在本專利技術的一些實施方式中，所述在巨噬細胞表面修飾疊氮基團包括以下步驟：誘導巨噬細胞極化，將極化的巨噬細胞加入引入疊氮基團的糖分子進行孵育即得。
[0016]在本專利技術的一些實施方式中，所述糖分子包括甘露糖胺鹽酸鹽、葡萄糖胺鹽酸鹽或半乳糖胺鹽酸鹽、四乙酰甘露糖、四乙酰半乳糖、乙酰唾液酸和四乙酰葡萄糖中的至少一種。
[0017]在本專利技術的一些實施方式中，所述引入疊氮基團的糖分子為四乙酰基
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N
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疊氮乙酰甘露糖胺。
[0018]在本專利技術的一些實施方式中，所述巨噬細胞的培養采用含有5
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15％FBS的培養基。
[0019]在本專利技術的一些實施方式中，所述培養基為RPMI
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1640培養基。
[0020]在本專利技術的一些實施方式中，所述巨噬細胞的培養條件為在30
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40℃，含有2
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7％CO2的環境下進行培養3
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7d。
[0021]在本專利技術的一些實施方式中，在誘導巨噬細胞極化前還包括誘導巨噬細胞分化的步驟，誘導分化的試劑采用佛波酯或集落刺激因子進行。
[0022]在本專利技術的一些實施方式中，所述佛波酯(PMA)的濃度為80
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120ng/mL。
[0023]在本專利技術的一些實施方式中，所述誘導細胞極化的培養液包括脂多糖、IFN
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γ和PMA。
[0024]在本專利技術的一些實施方式中，所述脂多糖的含量為80
?
120ng/mL。
[0025]在本專利技術的一些實施方式中，所述IFN
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γ的含量為10
?
30ng/mL。
[0026]在本專利技術的一些實施方式中，所述佛波酯的濃度為80
?
120ng/mL。
[0027]在本專利技術的一些實施方式中，所述孵育的時間為40
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50h。
[0028]在本專利技術的一些實施方式中，所述疏水性多聚物選自聚乳酸
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羥基乙酸共聚物(又稱聚乙交酯丙交酯)、聚乳酸和聚己內酯的至少一種。
[0029]在本專利技術的一些實施方式中，所述疏水性多聚物為聚乳酸
?
羥基乙酸共聚物(簡寫為PLGA)。
[0030]在本專利技術的一些實施方式中，所述含有二苯并環辛炔的磷脂類物質包括磷脂聚乙二醇二苯基環辛炔。
[0031]在本專利技術的一些實施方式中，所述卵磷脂為大豆卵磷脂。
[0032]在本專利技術的一些實施方式中，所述吲哚菁綠、卵磷脂和含有二苯并環辛炔的磷脂類物質的添加質量比為(40～80)：(6～12)：(4～8)。
[0033]在本專利技術的一些實施方式中，所述吲哚菁綠、卵磷脂含有二苯并環辛炔的磷脂類物質的添加質量比為50：9：6。
[0034]在本專利技術的一些實施方式中，所述第一溶劑為丙酮或乙腈。
[0035]在本專利技術的一些實施方式中，所述第二溶劑為質量分數為2
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10％的乙醇。
[0036]在本專利技術的一些實施方式中，所述第二溶劑為質量分數為3
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5％的乙醇。
[0037]在本專利技術的一些實施方式中，所述超聲采用超聲波細胞破碎儀進行，頻率為10
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30kHz，功率為30
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40W，時間為3
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8min。
[0038]在本專利技術的一些實施方式中，所述納米顆粒的制備還包括超濾步驟，所述超濾采用8
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12KDa的超濾管進行超濾。
[0039]在本專利技術的一些實施方式中，所述步驟S本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種巨噬細胞納米顆粒復合物，其特征在于，所述巨噬細胞納米顆粒復合物為巨噬細胞通過N3
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DBCO連接納米顆粒得到。2.根據權利要求1所述的巨噬細胞納米顆粒復合物，其特征在于，所述巨噬細胞納米顆粒復合物的粒徑為130
?
180nm。3.一種如權利要求1所述的巨噬細胞納米顆粒復合物的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：S1、在巨噬細胞表面修飾疊氮基團；S2、制備納米顆粒：將疏水性多聚物溶于第一溶劑，得到第一混合溶液，將吲哚菁綠、卵磷脂和含有二苯并環辛炔的磷脂類物質溶解于第二溶劑得到第二混合溶液，將第一混合溶液逐滴加入到第二混合溶液中，超聲3
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8min，得到納米顆粒；S3、將步驟S1制備得到的表面修飾疊氮基團巨噬細胞與步驟S2制備得到的納米顆粒進行連接，制備得到巨噬細胞納米顆粒復合物。4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述在巨噬細胞表面修飾疊氮基團包括以下步驟：誘導巨...

【專利技術屬性】
技術研發人員：蔡林濤，陳澤，鄭明彬，吳鋒，石敏，劉狀，侯嘉睿，
申請(專利權)人：珠海中科先進技術研究院有限公司，
類型：發明
國別省市：