USP35作為用藥靶標在制備治療腎細胞癌的藥物中的用途制造技術

本發明專利技術提供了去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備治療腎細胞癌的藥物中的用途，更具體涉及去泛素化酶USP35通過穩定多種凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)和細胞氧化還原關鍵調控因子NRF2表達抑制腎透明細胞癌細胞凋亡和鐵死亡的機制及其在治療腎透明細胞癌中的應用。本發明專利技術研究發現，USP35以酶活依賴的方式穩定5種凋亡抑制蛋白的水平，抑制細胞凋亡。USP35以酶活依賴的方式穩定NRF2表達，抑制細胞鐵死亡。USP35缺失會降低上述凋亡抑制蛋白和NRF2蛋白水平，抑制腎透明細胞癌生長。綜上所述，抑制USP35可作為腎透明細胞癌治療的潛在方式。胞癌治療的潛在方式。胞癌治療的潛在方式。

【技術實現步驟摘要】
USP35作為用藥靶標在制備治療腎細胞癌的藥物中的用途


[0001]本申請涉及醫藥
，具體涉及去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備藥物中的用途，更具體涉及去泛素化酶USP35在制備治療腎透明細胞癌的藥物中的應用。

技術介紹

[0002]腎細胞癌是常見的泌尿系統惡性腫瘤，全球平均每年新增430000例。腎透明細胞癌是腎細胞癌的主要組織學亞型，約占全部病例的75％，乳頭狀腎細胞癌和嫌色細胞癌分別占15％和5％。腎透明細胞癌也是引發腎細胞癌相關死亡的主要亞型，因此腎透明細胞癌是臨床研究的焦點。
[0003]腎癌的臨床治療經歷了非特異性免疫療法、針對特意受體的靶向治療和目前新的免疫治療藥物幾個階段。非特異性免疫療法主要是使用IL
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2和IFN
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α等細胞因子，但細胞因子使用劑量高，收效微；靶向治療主要包括血管內皮生長因子和血小板源生長因子等相關受體的配體，mTOR、MET和AXL等酪氨酸蛋白激酶受體的抑制劑等；免疫治療藥物主要是免疫檢驗點抑制劑，如PD
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1抑制劑納武單抗和帕博利珠單抗。雖然新的治療策略取得了一定療效，但藥物治療的優化組合仍不明確，劑量強度、患者選擇性和治療時間等仍是有待優化的關鍵方面，新的特異性的生物靶點的鑒定能夠為個性化治療方案的制訂提供有力支撐。

技術實現思路

[0004]本專利技術要解決的技術問題是尋找USP35在腎透明細胞癌發生發展中的作用機制，并由此提出去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備治療腎透明細胞癌藥物中的用途。
[0005]USP家族是去泛素化酶最大的家族，包含50多種半胱氨酸蛋白酶。USPs與多種腫瘤的發生發展密切相關，被認為是腫瘤治療的潛在靶點。本專利技術聚焦USP家族，篩選出USP35通過拮抗凋亡和鐵死亡促進腎透明細胞癌生長。本專利技術揭示了USP35通過發揮去泛素化酶功能穩定凋亡抑制蛋白和氧化還原調節蛋白NRF2的表達，抵抗細胞凋亡和鐵死亡的發生。抑制USP35表達能夠誘導凋亡和鐵死亡，進而抑制腎透明細胞癌生長，為腎透明細胞癌的臨床治療提供潛在靶點。
[0006]通過研究發現，USP35以酶活依賴的方式穩定5種凋亡抑制蛋白(cIAP1，cIAP2，XIAP，Survivin，Livin)的水平，抑制細胞凋亡。USP35以酶活依賴的方式穩定NRF2表達，抑制細胞鐵死亡。USP35缺失會降低上述凋亡抑制蛋白和NRF2蛋白水平，誘導細胞凋亡和鐵死亡，抑制腎透明細胞癌生長。
[0007]具體而言，本專利技術研究發現：
[0008](1)通過對去泛素化酶USP家族系統性篩選，鑒定出USP35與腎透明細胞癌發生發展密切相關；
[0009](2)USP35通過穩定5種凋亡抑制蛋白的表達抑制細胞凋亡，包括cIAP1，cIAP2，XIAP，Survivin和Livin；
[0010](3)USP35催化NRF2去泛素化，穩定NRF2表達；
[0011](4)USP35缺失抑制腎透明細胞癌細胞生長；
[0012](5)USP35缺失抑制裸鼠腎透明細胞癌移植瘤生長。
[0013]根據以上意外的發現完成本專利技術，并提出了USP35通過相互作用底物調控在腎透明細胞癌發生中的作用。
[0014]一方面，本專利技術提供去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
[0015]另一方面，本專利技術提供沉默去泛素化酶USP35表達和/或抑制去泛素化酶USP35活性的物質在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
[0016]優選的，所述腫瘤為腎細胞癌。
[0017]優選的，所述腎細胞癌為腎透明細胞癌。
[0018]進一步地，本專利技術還提供去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備抑制腎細胞癌生長的藥物中的用途。
[0019]進一步地，本專利技術還提供沉默去泛素化酶USP35表達和/或抑制去泛素化酶USP35活性的物質在制備抑制腎細胞癌生長的藥物中的用途。
[0020]優選的，所述去泛素化酶USP35通過穩定多種凋亡抑制蛋白和NRF2表達抑制腎透明細胞癌細胞凋亡和鐵死亡，其包含：(1)USP35以酶活依賴的方式穩定5種凋亡抑制蛋白的表達，抑制細胞凋亡；和(2)USP35以酶活依賴的方式穩定NRF2表達，抑制細胞鐵死亡。
[0021]優選的，所述USP35穩定的5種凋亡抑制蛋白是指cIAP1，cIAP2，XIAP，Survivin和Livin。
[0022]優選的，所述USP35抑制細胞鐵死亡是指USP35降低NRF2泛素化水平，抑制NRF2降解，增強細胞抵抗鐵死亡的能力。
[0023]進一步的，本專利技術還提供了去泛素化酶USP35缺失會降低上述凋亡抑制蛋白和NRF2蛋白水平，誘發細胞凋亡和鐵死亡，抑制腎透明細胞癌生長。
[0024]與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：
[0025](1)針對人源去泛素化酶在腎透明細胞癌發生發展的中的作用和機制仍需深入探究，本專利技術篩選并鑒定了人源去泛素化酶USP35作為腫瘤促進因子在腎透明細胞癌發生發展中的促癌作用。
[0026](2)針對USP35是如何調控腫瘤發生的這一問題，本專利技術闡明了USP35通過穩定5種凋亡抑制蛋白和NRF2蛋白表達，抑制腎透明細胞癌凋亡和鐵死亡的發生，從而促進腫瘤發生發展的作用機制。
附圖說明
[0027]附圖用來提供對本專利技術的進一步理解，并且構成說明書的一部分，與本專利技術的實施例一起用于解釋本專利技術，并不構成對本專利技術的限制。在附圖中：
[0028]圖1為本專利技術實施例1中USP35和6種IAP蛋白表達水平檢測結果圖；
[0029]圖2為本專利技術實施例1中USP35與IAPs相互作用結果圖；其中A為USP35與Survivin相互作用結果圖，B為USP35與clAP2相互作用結果圖，C為USP35與XIAP相互作用結果圖，D表明野生型USP35有效降低cIAP2蛋白泛素化水平，E表明野生型USP35有效降低XIAP蛋白泛素化水平。
[0030]圖3為本專利技術實施例2中驗證USP35催化NRF2去泛素化，穩定NRF2表達的實驗結果圖，其中，A圖表明USP35敲低的腎透明細胞癌細胞系OS
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RC
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2，769
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P和786
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O中NRF2蛋白水平顯著降低；B圖表明過表達USP35以劑量依賴的方式穩定NRF2表達；C圖表明USP35與NRF2相互作用；D圖表明過表達USP35有效抑制NRF2泛素化，而酶活突變的USP35對NRF2泛素化沒有影響。
[0031]圖4為本專利技術實施例3中驗證USP35抑制腎透明細胞癌發生鐵死亡的實驗結果圖，其中，A、B圖表明DOX誘導的USP35敲低能夠顯著增強RSL
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3誘導的鐵死亡；C圖表明在USP35缺失的細胞中恢復NRF2表達有效緩解RSL
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3誘導的鐵死亡。
[0032]圖5為本本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備治療腫瘤的藥物中的用途。2.沉默去泛素化酶USP35表達和/或抑制去泛素化酶USP35活性的物質在制備治療腫瘤的藥物中的用途。3.如權利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述腫瘤為腎細胞癌。4.如權利要求3所述的用途，其特征在于：所述腎細胞癌為腎透明細胞癌。5.去泛素化酶USP35作為用藥靶標在制備抑制腎細胞癌生長的藥物中的用途。6.沉默去泛素化酶USP35表達和/或抑制去泛素化酶USP35活性的物質在制備抑制腎細胞癌生長...

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉晗，王珊珊，王太術，劉書言，張迎秋，
申請(專利權)人：大連醫科大學，
類型：發明
國別省市：