CFLAR的抑制劑在治療ARID1A缺失型腫瘤中的應用制造技術

本發明專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及CFLAR的抑制劑在治療ARID1A缺失型腫瘤中的應用。具體地，本發明專利技術提供了以下任意一種或多種基因的抑制劑在制備ARID1A缺失型癌癥藥物中的應用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3?；蛘撸景l明專利技術提供了ARID1A抑制劑與CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3的抑制劑中一種或多種組合使用在制備癌癥藥物中的應用。應用。應用。

【技術實現步驟摘要】
CFLAR的抑制劑在治療ARID1A缺失型腫瘤中的應用


[0001]本專利技術屬于生物醫藥領域，具體涉及CFLAR的抑制劑在治療ARID1A缺失型腫瘤中的應用。

技術介紹

[0002]合成致死（Synthetic lethality）理論由來已久，通俗來講，指兩個非致死基因同時失活將導致細胞死亡的現象。概念最早可以追溯到1992年，美國科學家卡爾文在果蠅的研究中發現，具有pd和 Pdr雙基因突變的果蠅不能存活，而這其中任何一個基因單獨突變都不會導致果蠅死亡。1946年，西奧多
·
多布贊斯基正式提出“合成致死”概念，用來描述這種不同基因之間的互補性致死作用。
[0003]合成致死對癌癥研究有重要影響。合成致死率的概念為癌癥治療的發展開辟了一條新的途徑，即在識別出癌癥特異性突變后，靶向合成致死目標。隨著越來越強大的工具和應用合成致死概念，藥物靶點和遺傳背景的確定無疑將是一種有效的治療選擇和患者的變革機會。許多研究人員已經預見到使用合成致命性基因篩查來識別藥物組合和發現特定基因型癌癥的特定弱點的巨大潛力。
[0004]ARID1A是人類癌癥中最常見的突變基因之一，在多種腫瘤中發生突變或缺失，在卵巢透明細胞癌的突變率高達60%。前期研究顯示，ARID1A可通過多種機制影響腫瘤的發生發展，如調控增強子活性、調節細胞周期和DNA損傷檢查點、與p53相互作用調控p53下游靶基因表達、負調節TERT轉錄活性等。大多數ARID1A突變都是失活突變，也即其細胞是ARID1A缺陷型細胞，ARID1A缺陷與多種腫瘤類型突變負荷增加有關。
[0005]目前針對ARID1A缺陷型腫瘤還沒有特異療法。本專利技術所提供的治療靶點對于ARID1A缺陷型腫瘤治療的影響具有重要的臨床意義。

技術實現思路

[0006]為篩選ARID1A缺失型腫瘤的治療靶點，本專利技術利用CRISPR基因編輯技術針對性篩選ARID1A的合成致死基因，鑒定ARID1A合成致死靶點，為ARID1A缺陷型（ARID1A缺失型）腫瘤患者的治療提供藥物靶點。
[0007]具體地，本專利技術提供以下技術方案：第一方面，本專利技術提供了以下任意一種或多種基因的抑制劑在制備ARID1A缺失型癌癥藥物中的應用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。
[0008]另一方面，本專利技術提供了ARID1A抑制劑與以下一種或多種抑制劑組合使用在制備癌癥藥物中的應用：CFLAR的抑制劑、PHIP的抑制劑、FTO的抑制劑和ADRB3的抑制劑。
[0009]優選地，所述抑制劑（基因抑制劑）包括CRISPR技術、RNA干擾技術、反義寡核苷酸（ASO）技術、TALEN技術、ZFN技術、Cre
?
loxP 基因重組技術等基因編輯技術所使用的試劑。
[0010]在另一種具體實施例中，所述抑制劑還可以是對具體基因表達具有特異性抑制效果的化合物，具體包括競爭性抑制劑或非競爭性抑制劑，非限制性舉例如：FTO的抑制劑有
FB23
?
2、Rheic Acid、Dac51、FB23等。
[0011]優選地，本專利技術所述抑制劑是CRISPR技術中所使用的試劑。
[0012]如本專利技術所使用術語“CRISPR技術”也可稱為CRISPR/Cas技術，該技術中CRISPR是指規律間隔成簇短回文重復序列/規律間隔成簇短回文重復序列相關核酸酶系統（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/CRISPR
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associated proteins）；Cas是指CRISPR
?
associated proteins，也即CRISPR相關蛋白，具有靶向和/或剪切靶核酸的活性。Cas蛋白種類眾多，最常見的例如Cas9、Cas12等，不同cas蛋白的引導序列設計原則不同，但都是本領域技術人員所熟知的。Cas蛋白通過引導序列達到特異性靶向位點，達到精準基因編輯（包括基因敲除）的目的。
[0013]具體地，所述CRISPR技術中所使用的試劑是本領域所熟知的，具體地至少包括Cas蛋白和引導序列（可稱為sgRNA）。如本專利技術所使用的引導序列是通過兩個oligo退火后連接到分子載體上使用的，兩個oligo中反向互補的部分即為引導序列。例如，靶向ARID1A的sgRNA是通過序列分別為caccgATGGTCATCGGGTACCGCTG和aaacCAGCGGTACCCGATGACCATG的oligo反向互補構成的，則靶向ARID1A的引導序列即為ATGGTCATCGGGTACCGCTG，也即得知兩個oligo的情況下，其反向互補序列即為引導序列（sgRNA），也即為Cas蛋白所靶向的位點。
[0014]具體地，本專利技術針對ARID1A、CFLAR、PHIP、FTO、ADRB3設計并合成了特異性引導序列（sgRNA，其oligo如具體實施例所記載），所述特異性引導序列與Cas9蛋白組合使用即可以達到抑制（敲除）ARID1A、CFLAR、PHIP、FTO、ADRB3表達的目的。 也即本專利技術中將針對具體基因設計的特異性引導序列結合Cas蛋白就可以實現抑制具體基因表達的目的。包括針對具體基因所設計的特異性引導序列和Cas蛋白在內的試劑，就稱為該具體基因的抑制劑。
[0015]優選地，所述抑制劑可以通過任意常規技術導入靶細胞（癌細胞），本專利技術具體實施例中具體使用了轉染的方法，所述轉染試劑可以是商品化的產品或自行配制的試劑；示例性的所述商品化產品包括Lipofectamine
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2000（Thermo Fisher Scientific）、Lipofectamine
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3000（Thermo Fisher Scientific）、Lipofectamine
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RNAiMAX（Thermo Fisher Scientific）、Neon
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轉染系統（Thermo Fisher Scientific）、HiPerFect （QIAGEN）、X
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tremeGENE（Roche）、siLentFect
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（Bio
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Rad）等。
[0016]如本文所用，“癌癥”和“腫瘤”是可互換的術語，是指動物中任何異常細胞或組織的生長或增殖。如本文所用，術語“癌癥”和“腫瘤”涵蓋實體癌和血液/淋巴癌，并且還涵蓋惡性、惡性前和良性生長，諸如發育異常。癌癥的非限制性實例包括：肺癌、小細胞肺癌（SCLC）、非小細胞肺癌（NSCLC）、尿道癌、鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、垂體癌、食管癌、星形細胞瘤、軟組織肉瘤、肺腺癌、肺鱗狀癌、腹膜癌、肝癌、胃腸道癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌（liver cancer）、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結腸癌、結直腸癌、子宮內膜或子宮癌（包括子宮體子宮內膜癌）、唾液腺癌、腎癌（kidney cance本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.以下一種或多種基因的抑制劑在制備ARID1A缺失型癌癥藥物中的應用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。2.ARID1A抑制劑與以下一種或多種基因的抑制劑組合在制備癌癥藥物中的應用：CFLAR、PHIP、FTO和ADRB3。3.如權利要求1或2所述的應用，所述抑制劑包括CRISPR技術、RNA干擾技術、反義寡核苷酸技術、TALEN技術、ZFN技術、Cre
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loxP 基因重組技術中所使用的試劑，或者，所述抑制劑是針對基因具有特異性抑制效果的化合物。4.如權利要求3所述的應用，所述抑制劑是CRISPR技術中所使用的試劑。5.如權利要求4所述應用，所述CRISPR技術中所使用的試劑包括Cas蛋白和特異性引導序列。6.如權利要求1或2所述的應用，所述藥物中還包括合適的藥學可接受載體。7.如權利要求1或2所述的應用，所述癌癥包括肺癌、尿道癌、鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、垂體癌、食管癌、星形細胞...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王曉月，梁俊波，王町町，古雅妮，
申請(專利權)人：中國醫學科學院基礎醫學研究所，
類型：發明
國別省市：