【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于細胞制備，涉及一種細胞制備方法，具體地說涉及一種可提高存活率的臍帶間充質干細胞的制備方法。
技術介紹
1、臍帶間充質干細胞是一種存在于新生兒臍帶組織中的多功能干細胞，具有較高的分化潛能，可向多個方向進行分化，臍帶干細胞還具有來源充足、易于獲取、免疫原性低等多方面有點，在細胞治療、組織工程學和再生醫學以及藥物和生物技術應用上有著巨大的應用前景。
2、為獲取大量用于科研、臨床的細胞，傳統方法是采用人工體外細胞培養，主要通過手工操作，但是這種方法存在人員成本高、培養效率低、人為因素導致細胞的質量及穩定性難以保證的問題。
3、因此，隨著生物科學的不斷發展，全自動細胞制備系統應運而生，全自動細胞制備系統可以大規模地培養、生產細胞，但是這種制備系統在產量大的同時伴隨著制備時間長的問題，導致臍帶間充質干細胞的存活率低于傳統的人工培養方式。
4、有鑒于此，有必要提供一種可提高全自動細胞制備系統制備的細胞活率的方法。
技術實現思路
1、為此，本專利技術所要解決的技術問題在于現有全自動細胞制備系統制備的臍帶間充質干細胞的活率較低，從而提出一種可提高細胞活率的臍帶間充質干細胞的制備方法。
2、為解決上述技術問題，本專利技術的技術方案為：
3、本專利技術提供一種臍帶間充質干細胞的制備方法，其包括如下步驟：
4、s1、將收集的臍帶間充質干細胞與緩沖溶液混合均勻后，加入保護劑，得到混合溶液；
5、s2、將所述混合
6、s3、將所述第一次離心上清液在100-300g的離心力下離心處理1-5min，得到第二次離心上清液和第二次細胞產物；
7、s4、收集所述第一次細胞產物與所述第二次細胞產物，取樣計數。
8、作為優選，所述步驟s1中，所述混合溶液中，所述臍帶間充質干細胞的濃度為1*106個/ml-3*106個/ml。
9、作為優選，所述保護劑為海藻糖，所述海藻糖的加入量為所述混合溶液的1-5％。
10、作為優選，所述步驟s2中，離心處理包括第一提速段和第一減速段，其中，所述第一提速段的加速度為50-100g/min，所述第一減速段的加速度為100-200g/min。
11、作為優選，所述步驟s3中，離心處理包括第二提速段和第二減速段，其中，所述第二提速段的加速度為50-100g/min，所述第二減速段的加速度為100-200g/min。
12、作為優選，所述步驟s1中，還包括通過全自動灌裝系統吹打所述臍帶間充質干細胞與緩沖溶液混合物的步驟。
13、作為優選，所述步驟s3中，所述上清液通過全自動灌裝系統收集并轉移。
14、作為優選，所述步驟s3中，還包括通過全自動上清收集系統收集所述第二次離心上清液的步驟。
15、作為優選，所述步驟s4中，還包括通過全自動細胞合管系統將收集的所述第一次細胞產物與所述第二次細胞產物混合的步驟。
16、作為優選，所述步驟s4中，通過全自動細胞取樣計數系統對混合的第一次細胞產物、第二次細胞產物進行取樣計數。
17、本專利技術的上述技術方案相比現有技術具有以下優點：
18、本專利技術提供的臍帶間充質干細胞的制備方法，包括：s1、將臍帶間充質干細胞與緩沖溶液混合均勻后，加入保護劑，得到混合溶液；s2、將混合溶液在200-400g的離心力下離心處理4-8min，得到第一次離心上清液和第一次細胞產物；s3、將第一次離心上清液在100-300g的離心力下離心處理1-5min，得到第二次離心上清液和第二次細胞產物；s4、收集所述第一次細胞產物與所述第二次細胞產物，取樣計數。該制備方法無需化學試劑，采用物理方法，通過兩次不同參數的離心處理步驟對臍帶間充質干細胞進行分離提純，并采用保護劑降低離心力對細胞的損傷，從而顯著提高了細胞存活率，解決了現有技術中間充質干細胞制備方法中細胞活率低的問題。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，所述混合溶液中，所述臍帶間充質干細胞的濃度為1*106個/ml-3*106個/ml。
3.根據權利要求1或2所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述保護劑為海藻糖，所述海藻糖的加入量為所述混合溶液的1-5％。
4.根據權利要求3所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中，離心處理包括第一提速段和第一減速段，其中，所述第一提速段的加速度為50-100g/min，所述第一減速段的加速度為100-200g/min。
5.根據權利要求4所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中，離心處理包括第二提速段和第二減速段，其中，所述第二提速段的加速度為50-100g/min，所述第二減速段的加速度為100-200g/min。
6.根據權利要求5所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S1中，還包括通過全自動灌裝系統吹打所述臍帶間充質干細
7.根據權利要求6所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中，所述上清液通過全自動灌裝系統收集并轉移。
8.根據權利要求7所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中，還包括通過全自動上清收集系統收集所述第二次離心上清液的步驟。
9.根據權利要求8所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S4中，還包括通過全自動細胞合管系統將收集的所述第一次細胞產物與所述第二次細胞產物混合的步驟。
10.根據權利要求9所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟S4中，通過全自動細胞取樣計數系統對混合的第一次細胞產物、第二次細胞產物進行取樣計數。
...【技術特征摘要】
1.一種臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟s1中，所述混合溶液中，所述臍帶間充質干細胞的濃度為1*106個/ml-3*106個/ml。
3.根據權利要求1或2所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述保護劑為海藻糖，所述海藻糖的加入量為所述混合溶液的1-5％。
4.根據權利要求3所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟s2中，離心處理包括第一提速段和第一減速段，其中，所述第一提速段的加速度為50-100g/min，所述第一減速段的加速度為100-200g/min。
5.根據權利要求4所述的臍帶間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述步驟s3中，離心處理包括第二提速段和第二減速段，其中，所述第二提速段的加速度為50-100g/min，所述第二減速段的加速度為10...
【專利技術屬性】
技術研發人員：董奇政，張芬，王清芳，鐘桂強，
申請(專利權)人：深圳市北科生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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