【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
【】本文中描述的主題涉及一種能夠快速識別先前感染過細(xì)菌和/或病毒病原體的個體的方法，例如sars?cov-2病毒。本文提供的方法檢測抗原特異性記憶t細(xì)胞作為既往感染的指標(biāo)，而不是病原體特異性抗體的存在。
技術(shù)介紹
0、
技術(shù)介紹
1、記憶t細(xì)胞是對感染性病原體的免疫應(yīng)答的重要組成部分，其在保護(hù)個體免受細(xì)菌和病毒感染方面發(fā)揮多種作用。記憶t細(xì)胞存在于某些組織和體液中，如骨髓、胸腺組織和血液，其表面含有抗體樣受體。當(dāng)記憶t細(xì)胞表面受體與致病抗原(例如蛋白或肽基抗原)接觸時，細(xì)胞被“激活”，其中它們脫落免疫效應(yīng)蛋白并開始復(fù)制。
2、記憶t細(xì)胞的每個獨(dú)特亞群都含有不同的抗體樣表面受體，其對獨(dú)特的外來抗原具有特異性。當(dāng)記憶t細(xì)胞遇到其對應(yīng)的抗原時，抗原與抗原特異性細(xì)胞表面受體結(jié)合。在抗原受體結(jié)合后，記憶t細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化，其中它們開始排泄免疫效應(yīng)蛋白，例如細(xì)胞因子，并開始快速細(xì)胞分裂。這種轉(zhuǎn)化有助于擴(kuò)大記憶t細(xì)胞群，這些記憶t細(xì)胞被激活以殺死表達(dá)特定外來抗原的細(xì)胞。
3、記憶t細(xì)胞響應(yīng)抗原檢測和結(jié)合轉(zhuǎn)化的一個關(guān)鍵方面，是產(chǎn)生用于效應(yīng)蛋白的mrna，如細(xì)胞因子的表達(dá)，以及用于細(xì)胞分裂的mrna，這需要全基因組的復(fù)制。細(xì)胞生理狀態(tài)的這種快速而廣泛的改變可以修正為與識別活化記憶t細(xì)胞中存在的核酸含量增加相關(guān)的特定檢測方法。
4、嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥冠狀病毒2(sars?cov-2)是引起2019冠狀病毒病(covid-19)的一種呼吸道疾病的病毒株。它俗稱冠狀病毒，以前以其臨時名稱2019年新型冠
5、與其他已知的冠狀病毒一樣，sars?cov-2是一種包膜病毒，含有3種外部結(jié)構(gòu)蛋白，即膜(m)、包膜(e)和刺突(s)蛋白。核衣殼(n)蛋白與病毒rna基因組一起可能形成位于病毒包膜內(nèi)的螺旋核心。sars?cov-2核衣殼(n)蛋白是一種423個氨基酸，預(yù)計磷酸化蛋白為46kda，與冠狀病毒家族的其他成員幾乎沒有同源性。sars?cov-2利用其刺突糖蛋白(s)(中和抗體的主要靶標(biāo))結(jié)合其受體，并介導(dǎo)膜融合和病毒進(jìn)入。三聚體s蛋白的每個單體約為180kda，包含2個亞基s1和s2，分別介導(dǎo)附著和膜融合。
6、仍然需要特異性和靈敏地識別表達(dá)特異性特異性致敏的表面受體的記憶t細(xì)胞的方法、裝置和試劑盒，這些受體對感興趣的特定病原體，例如sars?cov-2病毒。這種記憶t細(xì)胞的鑒定提供了與個體先前是否暴露于(通過自然暴露或疫苗接種)和/或感染感興趣的病原體相關(guān)的寶貴信息。例如，暴露、感染和/或接種特定細(xì)菌和病毒(如sars?cov-2病毒)可能會產(chǎn)生針對特定病原體的記憶t細(xì)胞。
7、上述相關(guān)技術(shù)的實(shí)施例和與之相關(guān)的限制旨在說明性而非排他性。相關(guān)技術(shù)的其他局限性對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，在閱讀說明書和研究附圖后會變得明顯。
8、【專利技術(shù)概要】
9、以下描述和示出的以下方面及其實(shí)施例僅供參考和說明，不限于范圍。
10、本文公開的技術(shù)涉及用于檢測在暴露于特定細(xì)菌和/或病毒致病抗原(例如sarscov-2病毒抗原)后被激活的記憶t細(xì)胞的方法、裝置和試劑盒。該技術(shù)將受試者的記憶t細(xì)胞暴露于特定的細(xì)菌和/或小瓶抗原，例如sars?cov-2病毒抗原。然后測定暴露的記憶t細(xì)胞的核苷酸含量，其中核苷酸含量的增加，例如rna和/或dna含量的增加，表明與非活性對應(yīng)物相比，記憶t細(xì)胞被激活。使用檢測總核苷酸量的試劑(例如rna和/或dna染料，包括熒光染料)對細(xì)胞進(jìn)行分析，使從業(yè)者能夠確定記憶t細(xì)胞的核苷酸含量是否增加，表明細(xì)胞遇到了其特定的致病抗原。
11、在一個方面，本文描述的技術(shù)提供了一種確定來自受試者的樣本中是否存在感染性病原體特異性t細(xì)胞的方法。在另一方面，提供了一種確定受試者先前暴露于或接種感染性病原體的方法。在一些實(shí)施方式中，所述方法包括將包含來自受試者的記憶t細(xì)胞的生物樣本暴露于一種或多種對感染性病原體具有特異性的肽抗原。在一些實(shí)施方式中，所述方法還包括將暴露的記憶t細(xì)胞與和rna、dna或兩者關(guān)聯(lián)的指示化合物接觸。在某些方面，所述方法還包括分析記憶t細(xì)胞的指示化合物。
12、在一個方面，本文所述的技術(shù)提供了一種在來自受試者的樣本中鑒定sars?cov-2特異性t細(xì)胞的方法。在另一方面，提供了一種確定受試者先前暴露于sars?cov-2病毒或用其接種疫苗的方法。
13、在一些實(shí)施方式中，所述方法包括將包含來自受試者的記憶t細(xì)胞的生物樣本暴露于一種或多種對sars?cov-2具有特異性的肽抗原。在一些實(shí)施方式中，所述方法還包括將暴露的記憶t細(xì)胞與和rna、dna或兩者關(guān)聯(lián)的指示化合物接觸。在某些方面，所述方法還包括分析記憶t細(xì)胞的指示化合物。
14、在一些實(shí)施方式中，記憶t細(xì)胞同時暴露于sars?cov-2特異性肽并與指示化合物接觸。在一些實(shí)施方式中，記憶t細(xì)胞依次暴露于sars?cov-2特異性肽，并與指示化合物接觸。
15、在某些方面，生物樣本是血液樣本和/或血液樣本的級分。在一些實(shí)施方式中，血液樣本的級分是血沉棕黃層級分或外周血單核細(xì)胞(pbmc)或者血沉棕黃層級分和pbmc的混合物。
16、在某些方面，將生物樣本暴露于一種或多種對sars?cov-2具有特異性的肽抗原包括暴露于含有一種或多種肽抗原、指示化合物和一種或多種緩沖液、細(xì)胞的能源和平衡鹽溶液的溶液，從而在與所述暴露同時，使t細(xì)胞與指示化合物接觸。
17、在某些方面，所述方法還包括使包含記憶t細(xì)胞的第二生物樣本暴露于對照試劑，該對照試劑(i)缺乏對sars?cov-2具有特異性的一種或多種肽抗原，并且(ii)包含與rna、dna或兩者關(guān)聯(lián)的對照指示化合物，從而產(chǎn)生對照樣本。在一些實(shí)施方式中，第二生物樣本來自受試者，并且其中生物樣本來自同一受試者，或其中第二生物樣本是生物樣本的一部分。在一些實(shí)施方式中，指示化合物和對照指示化合物是相同的。在其他實(shí)施方式中，分析包括測量生物樣本中與記憶t細(xì)胞關(guān)聯(lián)的指示化合物的信號和測量對照樣本中與記憶t細(xì)胞關(guān)聯(lián)的對照指示化合物的信號。在一些實(shí)施方式中，分析包括測量生物樣本中與rna關(guān)聯(lián)的指示化合物的信號和測量第二生物樣本中與rna關(guān)聯(lián)的對照指示化合物的信號。在其他實(shí)施方式中，分析包括基于與rna關(guān)聯(lián)的指示化合物的信號測量rna信號，基于與dna關(guān)聯(lián)的指示化合物的信號測量dna信號，以及確定rna信號與dna信號或dna信號與rna信號的比率。在一些實(shí)施方式中，指示化合物是選擇性染色rna的熒光染料。
18、在另一個實(shí)施方式中，暴露的記憶t細(xì)胞與選擇性染色rna或dna的第一指示化合物接觸，并與非特異性染色rna和dna的第二指示化合物接觸。
19、在另一方面，指示化合物具有約330～360n本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.鑒定來自受試者的樣本中是否存在SARS?CoV-2特異性T細(xì)胞以確定先前暴露于SARSCoV-2病毒或用其接種疫苗的方法，所述方法包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物樣本為血液樣本。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述生物樣本為血液樣本的級分。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述血液樣本的級分是：
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4之任一項所述的方法，其中暴露于一種或多種對SARS?CoV-2具有特異性的肽抗原包括暴露于含有一種或多種肽抗原、指示化合物和一種或多種緩沖液、細(xì)胞能源和平衡鹽溶液的溶液，從而在與所述暴露同時，使所述T細(xì)胞與所述指示化合物接觸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5之任一項所述的方法，其中所述方法還包括使包含記憶T細(xì)胞的第二生物樣本暴露于對照試劑，所述對照試劑：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中所述指示化合物與對照指示化合物相同。
9.根據(jù)權(quán)利要求6～8之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
10.根據(jù)權(quán)利要求
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11之任一項所述的方法，其中所述指示化合物為選擇性染色RNA的熒光染料。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～11之任一項所述的方法，其中所述接觸包括將暴露的記憶T細(xì)胞
14.根據(jù)權(quán)利要求1～13之任一項所述的方法，其中所述指示化合物具有約330～360nm之間的激發(fā)光和大于約500～600nm之間的發(fā)射光。
15.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中所述記憶T細(xì)胞為CD4+和/或CD8+T細(xì)胞。
16.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，還包括在所述接觸之后和所述分析之前，溫育一段時間。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述溫育溫度在約25～40℃之間。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其中所述時間段在約10～60分鐘之間或約10～30分鐘之間。
19.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中所述一種或多種對SARS?CoV-2具有特異性的肽抗原包含對SARS?CoV-2具有特異性的2～20肽抗原或?qū)ARS?CoV-2具有特異性的3～15肽抗原。
20.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中暴露生物樣本還包括將生物樣本暴露于一種或多種對SARS?CoV-2非特異性的肽抗原中。
21.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中，對SARS?CoV-2具有特異性的一種或多種肽抗原包括SEQ?ID?NO：1～SEQ?ID?NO：12所示的一種或多種肽。
22.確定受試者先前接觸感染性病原體的方法，包括：
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述病原體為病毒病原體，例如呼吸道合胞體病毒或人冠狀病毒。
24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述病原體為細(xì)菌病原體，如萊姆病的疏螺旋體屬(Borrelia)病原體。
25.根據(jù)權(quán)利要求22～24之任一項所述的方法，其中所述生物樣本為血液樣本。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述生物樣本為血液樣本的級分。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述血液樣本的級分是：
28.根據(jù)權(quán)利要求22～27之任一項所述的方法，其中暴露于一種或多種對病原體具有特異性的肽抗原包括暴露于含有一種或多種肽抗原、指示化合物和一種或多種緩沖液、細(xì)胞能源和平衡鹽溶液的溶液，從而在暴露的同時，使T細(xì)胞與指示化合物接觸。
29.根據(jù)權(quán)利要求22～28之任一項所述的方法，其中所述方法還包括使包含記憶T細(xì)胞的第二生物樣本暴露于對照試劑，該
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，
31.根據(jù)權(quán)利要求29或30所述的方法，其中所述指示化合物與對照指示化合物相同。
32.根據(jù)權(quán)利要求29～31之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
33.根據(jù)權(quán)利要求29～32之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
34.根據(jù)權(quán)利要求22～33之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
35.根據(jù)權(quán)利要求22～34之任一項所述的方法，其中所述指示化合物為選擇性染色RNA的熒光染料。
36.根據(jù)權(quán)利要求22～34之任一項所述的方法，其中所述接觸包括接觸暴露的記憶T細(xì)胞
37.根據(jù)權(quán)利要求22～35之任一項所述的方法，其中所述指示化合...
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
1.鑒定來自受試者的樣本中是否存在sars?cov-2特異性t細(xì)胞以確定先前暴露于sarscov-2病毒或用其接種疫苗的方法，所述方法包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述生物樣本為血液樣本。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述生物樣本為血液樣本的級分。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述血液樣本的級分是：
5.根據(jù)權(quán)利要求1～4之任一項所述的方法，其中暴露于一種或多種對sars?cov-2具有特異性的肽抗原包括暴露于含有一種或多種肽抗原、指示化合物和一種或多種緩沖液、細(xì)胞能源和平衡鹽溶液的溶液，從而在與所述暴露同時，使所述t細(xì)胞與所述指示化合物接觸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5之任一項所述的方法，其中所述方法還包括使包含記憶t細(xì)胞的第二生物樣本暴露于對照試劑，所述對照試劑：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其中所述指示化合物與對照指示化合物相同。
9.根據(jù)權(quán)利要求6～8之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
10.根據(jù)權(quán)利要求6～9之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10之任一項所述的方法，其中所述分析包括：
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11之任一項所述的方法，其中所述指示化合物為選擇性染色rna的熒光染料。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～11之任一項所述的方法，其中所述接觸包括將暴露的記憶t細(xì)胞
14.根據(jù)權(quán)利要求1～13之任一項所述的方法，其中所述指示化合物具有約330～360nm之間的激發(fā)光和大于約500～600nm之間的發(fā)射光。
15.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中所述記憶t細(xì)胞為cd4+和/或cd8+t細(xì)胞。
16.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，還包括在所述接觸之后和所述分析之前，溫育一段時間。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述溫育溫度在約25～40℃之間。
18.根據(jù)權(quán)利要求16或17所述的方法，其中所述時間段在約10～60分鐘之間或約10～30分鐘之間。
19.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中所述一種或多種對sars?cov-2具有特異性的肽抗原包含對sars?cov-2具有特異性的2～20肽抗原或?qū)ars?cov-2具有特異性的3～15肽抗原。
20.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中暴露生物樣本還包括將生物樣本暴露于一種或多種對sars?cov-2非特異性的肽抗原中。
21.根據(jù)任何先前權(quán)利要求所述的方法，其中，對sars?cov-2具有特異性的一種或多種肽抗原包括seq?id?no：1～seq?id?no：12所示的一種或多種肽。
22.確定受試者先前接觸感染性病原體的方法，包...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：R·L·伊根，J·J·孫，W·克羅爾，
申請(專利權(quán))人：奎多公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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