【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物限度檢測，尤其是涉及一種加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法。
技術介紹
1、加替沙星(gatifloxacin，gat)是第四代廣譜氟喹諾酮類抗生素之一，其過抑制dna旋轉酶和拓撲異構酶iv的活性，來阻止細菌dna合成和復制，產生快速殺菌的作用。它可以滲透至骨骼、肺、皮膚、中樞和泌尿等組織，其抗菌能力很強。其作為第四代氟喹諾酮類抗菌藥的代表藥物之一，具有廣譜的抗菌作用，對金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌和大腸桿菌，傷寒沙門氏菌等革蘭氏陰性菌具有良好的抗菌活性。
2、目前，微生物限度檢測方法最常用的薄膜過濾法使用常規稀釋液進行稀釋、沖洗液沖洗、最后將供試品至于培養基后培養。薄膜過濾法是《中華人民共和國藥典》2020年版附錄所收載的一種檢驗方法，是利用微孔濾膜(濾膜的孔徑應≤0.45μm)阻截細菌，以過濾樣品中的可溶性成分。
3、且在對具有抗菌活性的藥品進行微生物限度檢查時，應首先消除其抗菌活性，并通過實驗驗證抗菌活性去除的是否徹底，以保證檢驗結果的有效性。而且也是目前創新速度最快的一類藥物。喹諾酮類藥物具有顯著而廣泛的抗細菌活性，這使得對口服喹諾酮藥物進行有效地微生物限度檢查成為目前藥品檢驗工作中的一個難題，由其是喹諾酮類藥物是目前臨床廣泛使用的一類化學合成抗菌藥物，有數十個品種之多，不同喹諾酮類藥物的生物限度檢測方法無法直接進行轉用。
4、因此，亟待開發一直可有效針對性地消除加替沙星原料藥的抑菌性，以期獲得更為準確的微生物限度檢測結果的微生物限度檢測方法。
5、有鑒于
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，所述檢測方法具體包括以下步驟：將加替沙星原料藥的供試品分散于稀釋液中，得到供試液；其中，所述稀釋液中包含氯化鈉和蛋白胨；將得到供試液進行薄膜過濾后，以沖洗液對濾膜進行沖洗；其中，所述沖洗液中包含硫酸錳和蛋白胨；將沖洗后的濾膜分別貼于含硫酸錳的胰酪大豆胨瓊脂培養基和含硫酸錳的沙氏葡萄糖瓊脂培養基上進行培養后，在分別對兩個培養基中總菌落數進行計數。所述檢測方法通過選擇特定的稀釋液、沖洗液和培養基，可有效針對性地消除加替沙星原料藥的抑菌性，使得替沙星原料藥的微生物限度檢查更為準確、有效、簡便。
2、為了實現本專利技術的上述目的，特采用以下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供一種加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，所述檢測方法具體包括以下步驟：
4、將加替沙星原料藥的供試品分散于稀釋液中，得到供試液；其中，所述稀釋液中包含氯化鈉和蛋白胨；
5、將得到供試液進行薄膜過濾后，以沖洗液對濾膜進行沖洗；其中，所述沖洗液中包含硫酸錳和蛋白胨；
6、將沖洗后的濾膜分別貼于含硫酸錳的胰酪大豆胨瓊脂培養基和含硫酸錳的沙氏葡萄糖瓊脂培養基上進行培養后，在分別對兩個培養基中總菌落數進行計數。
7、在本專利技術中，所述檢測方法通過選擇特定的稀釋液、沖洗液和培養基，可有效針對性地消除加替沙星原料藥的抑菌性，使得替沙星原料藥的微生物限度檢查更為準確、有效、簡便。
8、優選地，所述分散的具體過程為：
9、先將加替沙星原料藥的供試品和稀釋液進行第一次混合，進行離心處理；取離心處理后的樣液和稀釋液進行第二次混合，得到供試液。
10、優選地，在所述第一次混合中，所述供試品和稀釋液的質量體積比為1g:(8～12)ml，例如可以是1g:8ml、1g:9ml、1g:10ml、1g:11ml、1g:12ml等。
11、優選地，所述離心處理的轉速為450～550r/min，例如可以是450r/min、460r/min、480r/min、500r/min、520r/min、540r/min、550r/min等，時間為4～6min，例如可以是4min、4.2min、4.4min、4.6min、4.8min、5min、5.2min、5.4min、5.6min、5.8min、6min等。
12、優選地，在所述第二次混合中，所述離心處理后的樣液和稀釋液的體積比為1:(95～105)，例如可以是1:95、1:96、1:98、1:100、1:102、1:104、1:105等。
13、優選地，所述稀釋液包括氯化鈉-蛋白胨緩沖液。
14、優選地，所述稀釋液的ph為6.8～7.2，例如可以是6.8、6.9、7.0、7.1、7.2等。
15、優選地，所述氯化鈉-蛋白胨緩沖液按質量濃度計包括以下組分：
16、蛋白胨0.8～1.2mg/ml、無水磷酸氫二鈉5.6～5.8mg/ml、磷酸二氫鉀3.2～3.8mg/ml、氯化鈉4～4.5mg/ml。
17、在所述氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，蛋白胨的濃度為0.8～1.2mg/ml，例如可以是0.8mg/ml、0.85mg/ml、0.9mg/ml、0.92mg/ml、0.94mg/ml、0.96mg/ml、0.98mg/ml、1mg/ml、1.02mg/ml、1.04mg/ml、1.06mg/ml、1.08mg/ml、1.1mg/ml、1.05mg/ml、1.2mg/ml等。
18、在所述氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，磷酸氫二鈉的濃度為5.6～5.8mg/ml，例如可以是5.6mg/ml、5.65mg/ml、5.7mg/ml、5.75mg/ml、5.8mg/ml等。
19、在所述氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，磷酸二氫鉀的濃度為3.2～3.8mg/ml，例如可以是3.2mg/ml、3.25mg/ml、3.3mg/ml、3.35mg/ml、3.4mg/ml、3.45mg/ml、3.5mg/ml、3.55mg/ml、3.6mg/ml、3.65mg/ml、3.7mg/ml、3.75mg/ml、3.8mg/ml等。
20、在所述氯化鈉-蛋白胨緩沖液中，氯化鈉的濃度為4～4.5mg/ml，例如可以是4mg/ml、4.05mg/ml、4.1mg/ml、4.15mg/ml、4.2mg/ml、4.25mg/ml、4.3mg/ml、4.35mg/ml、4.4mg/ml、4.45mg/ml、4.5mg/ml等。
21、優選地，所述沖洗液中包括0.08～0.12wt％(例如可以是0.08wt％、0.085wt％、0.09wt％、0.095wt％、0.1wt％、0.105wt％、0.11wt％、0.115wt％、0.12wt％等)的蛋白胨。
22、優選地，所述沖洗液中包括0.002～0.003mol/l(例如可以是0.002mol/l、0.0021mol/l、0.0022mol/l、0.0023mol/l、0.0024mol/l、0.0025mol/l、0.0026mol/l、0.0027mol/l、0.0028mol/l、0.0029mol/l、0.003mol/l等)的硫酸錳。
23、優選地，所述沖洗液的溶劑為無菌本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述檢測方法具體包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述分散的具體過程為：
3.根據權利要求2所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，在所述第一次混合中，所述供試品和稀釋液的質量體積比為1g:(5～15)mL；
4.根據權利要求1或2所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述稀釋液包括氯化鈉-蛋白胨緩沖液；
5.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述沖洗液中包括0.08～0.12wt％的蛋白胨；
6.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述沖洗液的總用量為700～900mL/膜；
7.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述胰酪大豆胨瓊脂培養基中和/或沙氏葡萄糖瓊脂培養基中還需添加硫酸錳溶液；
8.根據權利要求1或7所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在
9.根據權利要求1或7所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，在所述沙氏葡萄糖瓊脂培養基上培養的溫度為20～25℃，培養的時間為4～6天。
10.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，在所述胰酪大豆胨瓊脂上培養得到的濾膜上生長的總菌落數為需氧菌總數；在所述沙氏葡萄糖瓊脂培養基上培養得到的濾膜上生長的總菌落數為霉菌和酵母菌總數。
...【技術特征摘要】
1.一種加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述檢測方法具體包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述分散的具體過程為：
3.根據權利要求2所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，在所述第一次混合中，所述供試品和稀釋液的質量體積比為1g:(5～15)ml；
4.根據權利要求1或2所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述稀釋液包括氯化鈉-蛋白胨緩沖液；
5.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述沖洗液中包括0.08～0.12wt％的蛋白胨；
6.根據權利要求1所述的加替沙星原料藥的微生物限度檢測方法，其特征在于，所述沖洗液的總用量為700～9...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馮東，孫毅，張博君，孫健，馬敬昊，
申請(專利權)人：中國大冢制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
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