【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物醫藥領域，具體涉及腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法及其用途。
技術介紹
1、使用過繼性自體轉移腫瘤浸潤淋巴細胞治療腫瘤是一種治療預后不良患者的有效方法。但是過繼性自體轉移腫瘤浸潤淋巴細胞治療腫瘤需要大量的腫瘤浸潤淋巴細胞。因此如何提供一種穩健可靠的腫瘤浸潤淋巴細胞的培養方法是亟待解決的問題。
技術實現思路
1、本申請提供了一種腫瘤浸潤淋巴細胞的培養方法，本申請的培養方法獲得的腫瘤浸潤淋巴細胞具有選自以下組的一種或多種的效果：增加的til細胞數量，提高的細胞因子分泌能力，提高的腫瘤細胞殺傷能力，改善的t細胞亞群比例，增加的中心記憶t細胞比例，降低的調節性t細胞的比例，增加的活化t細胞比例，增加的腫瘤特異性t細胞比例，增加的干細胞樣t細胞比例，和改善的基因編輯效果。
2、一方面，本申請提供一種培養腫瘤浸潤淋巴細胞(til)的方法，其包含：使源自腫瘤組織且未經體外擴增的til經過至少一個階段的體外擴增，其中，在至少一個階段的所述體外擴增中，使所述til與cd28激動劑接觸。
3、在一種實施方式中，使所述源自腫瘤組織且未經體外擴增的til經過第一階段體外擴增和第二階段體外擴增，且在所述第二階段體外擴增中，使經所述第一階段體外擴增的til與所述cd28激動劑接觸。
4、在一種實施方式中，所述cd28激動劑包含抗cd28的抗體和/或其抗原結合片段。
5、在一種實施方式中，所述第二階段體外擴增進行至多約13天。
6、在一種實施方
7、在一種實施方式中，本申請的培養方法還包含：在至少一個階段的所述體外擴增中，使所述til與飼養細胞共培養。
8、在一種實施方式中，其中，在單個階段的所述體外擴增中，使所述til與所述cd28激動劑接觸且與所述飼養細胞共培養。
9、在一種實施方式中，其中，在單個階段的所述體外擴增中，使所述til與所述cd28激動劑接觸一定時間之后，再與所述飼養細胞共培養。
10、在一種實施方式中，所述一定時間為至少約2小時。
11、在一種實施方式中，所述一定時間為約6小時至約72小時。
12、在一種實施方式中，所述一定時間為約12小時至約48小時。
13、在一種實施方式中，所述一定時間為約6小時、約12小時、約24小時、約48小時、或約72小時。
14、在一種實施方式中，所述飼養細胞包含抗原呈遞細胞。
15、在一種實施方式中，所述飼養細胞包含選自以下組的一種或多種：外周單個核細胞，樹突狀細胞，和人工抗原呈遞細胞。
16、在一種實施方式中，所述飼養細胞為外周單個核細胞。
17、在一種實施方式中，所述飼養細胞為經過輻照的飼養細胞。
18、在一種實施方式中，所述til與所述飼養細胞共培養包含使所述飼養細胞的表面與所述til的表面相接觸。
19、在一種實施方式中，所述til與所述飼養細胞共培養包含將所述飼養細胞添加至所述til的細胞培養基中。
20、在一種實施方式中，以約40:1-約400:1的所述飼養細胞與所述til的比例，將所述飼養細胞添加至所述til的細胞培養基中。
21、在一種實施方式中，本申請的培養方法還包含：在至少一個階段的所述體外擴增中，使所述til與一種或多種t細胞生長因子接觸。
22、在一種實施方式中，其中，在單個階段的所述體外擴增中，使所述til與所述cd28激動劑接觸且與所述一種或多種t細胞生長因子接觸。
23、在一種實施方式中，其中，在單個階段的所述體外擴增中，使所述til基本上同時與所述cd28激動劑以及所述一種或多種t細胞生長因子接觸。
24、在一種實施方式中，所述t細胞生長因子選自以下組的一種或多種：il-2、il-7、il-12、il-15、il-21、γ干擾素、以及它們的功能活性片段。
25、在一種實施方式中，所述t細胞生長因子包含il-2和/或其功能活性片段。
26、在一種實施方式中，所述til與所述一種或多種t細胞生長因子接觸包含將所述t細胞生長因子添加至所述til的細胞培養基中。
27、在一種實施方式中，所述t細胞生長因子在所述til的細胞培養基中的初始濃度為至少約300iu/ml。
28、在一種實施方式中，與在體外擴增階段未曾與所述cd28激動劑接觸的相應til相比，在至少一個體外擴增階段中與所述cd28激動劑接觸過的所述til顯示出改善的擴增效果。
29、在一種實施方式中，所述改善的擴增效果包含選自以下組的一種或多種：增加的til細胞數量，改善的t細胞亞群比例，提高的細胞因子分泌能力，和提高的腫瘤細胞殺傷能力。
30、在一種實施方式中，所述改善的t細胞亞群比例包含選自以下組的一種或多種：增加的中心記憶t細胞比例，降低的調節性t細胞的比例，增加的活化t細胞比例，增加的腫瘤特異性t細胞比例，和增加的干細胞樣t細胞比例。
31、在一種實施方式中，與在體外擴增階段未曾與所述cd28激動劑接觸的相應til相比，在至少一個體外擴增階段中與所述cd28激動劑接觸過的所述til顯示出改善的基因編輯效果。
32、在一種實施方式中，所述改善的基因編輯效果包含提高的基因敲除效率。
33、在一種實施方式中，本申請的培養方法還包含：在至少一個階段的所述體外擴增中，使所述til與所述cd28激動劑之外的一種或多種其他t細胞激活劑接觸。
34、在一種實施方式中，其中，在單個階段的所述體外擴增中，使所述til與所述cd28激動劑接觸且與所述一種或多種其它t細胞激活劑接觸。
35、在一種實施方式中，其中，在單個階段的所述體外擴增中，使所述til基本上同時與所述cd28激動劑以及所述一種或多種其它t細胞激活劑接觸。
36、在一種實施方式中，所述其它t細胞激活劑包含選自以下組的一種或多種：cd80、cd86、b7-h3、4-1bbl、cd27、cd30、cd134、b7h、cd40、light、以及它們的功能活性片段。
37、在一種實施方式中，所述其它t細胞激活劑包含選自以下組的一種或多種靶點的激動劑：cd3、hvem、cd40l、ox40和4-1bb。
38、在一種實施方式中，所述其它t細胞激活劑包含cd3激動劑。
39、在一種實施方式中，所述其它t細胞激活劑包含抗cd3的抗體和/或其抗原結合片段。
40、在一種實施方式中，所述使til與所述cd28激動劑接觸且與所述一種或多種其它t細胞激活劑接觸包含選自以下組的一種或多種方式：(1)將所述cd28激動劑與所述其它t細胞激活劑添加至所述til的細胞培養基中；(2)將表達所述cd28激動劑與所述其它t細胞激活劑的工程化細胞添加至所述til的細胞培養基中本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種培養腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)的方法，其包含：使源自腫瘤組織且未經體外擴增的TIL經過至少一個階段的體外擴增，其中，在至少一個階段的所述體外擴增中，使所述TIL與CD28激動劑接觸。
2.一種培養腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)的方法，其包含：
3.根據權利要求2所述的方法，所述CD28激動劑包含抗CD28的抗體和/或其抗原結合片段。
4.根據權利要求2所述的方法，所述步驟(B)進行至多約13天。
5.根據權利要求2所述的方法，其中，在所述步驟(B)中，使所述第二TIL群與所述CD28激動劑接觸一定時間之后，再與飼養細胞共培養。
6.根據權利要求2所述的方法，使所述第二TIL群與直徑為1納米至500納米的聚合物接觸。
7.根據權利要求6所述的方法，每mg所述聚合物包含至少約25μg的所述CD28激動劑和其它T細胞激活劑，其中所述聚合物選自多糖、葡聚糖、水凝膠、聚乙二醇或泊洛沙姆。
8.根據權利要求6所述的方法，以約1:100-約1:2000的所述聚合物與所述TIL的比例，將包含所述CD28抗體和
9.一種腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)，所述TIL經過權利要求1-8中任一項所述的方法獲得。
10.經過權利要求1-8中任一項所述的方法獲得的TIL在制備藥物中的應用，所述藥物用于預防和/或治療腫瘤。
...【技術特征摘要】
1.一種培養腫瘤浸潤淋巴細胞(til)的方法，其包含：使源自腫瘤組織且未經體外擴增的til經過至少一個階段的體外擴增，其中，在至少一個階段的所述體外擴增中，使所述til與cd28激動劑接觸。
2.一種培養腫瘤浸潤淋巴細胞(til)的方法，其包含：
3.根據權利要求2所述的方法，所述cd28激動劑包含抗cd28的抗體和/或其抗原結合片段。
4.根據權利要求2所述的方法，所述步驟(b)進行至多約13天。
5.根據權利要求2所述的方法，其中，在所述步驟(b)中，使所述第二til群與所述cd28激動劑接觸一定時間之后，再與飼養細胞共培養。
6.根據權利要求2所述的方法，使所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉雅容，趙佩佩，史子嘯，
申請(專利權)人：蘇州沙礫生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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