【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及環境微生物培養基領域，尤其涉及基于氟-鑭系螯合物微孔板比色法檢測氟離子濃度的微生物無機鹽培養基mm-f2的建立及其應用。本申請要求優先權，在先申請的申請號為：2024110804436，名稱：鞘氨醇盒菌sphingopyxis?sp.njf-3及其在降解氟化烷基化合物中的應用，優先權日：2024.08.08。
技術介紹
1、全氟及多氟烷基化合物(pfass)，是一系列非天然人工合成有機化合物，有親水性功能團及疏水性烷基側鏈，具備耐火性、高穩定性和持久性。由于pfass具有穩定的化學性質，被廣泛應用于工商業產品中。到目前為止，各種環境介質中都廣泛檢測到pfass的存在，目前常見的pfass的修復技術包括顆粒活性炭(gac)、生物炭、離子交換(ix)技術、膜過濾等，但上述方法都只是將化合物從環境中轉移出來，并不能做到對污染物又很好的降解效果，而生物修復是一種有效且非破壞性的技術，尤其是微生物修復技術，可以降解污染物，降低污染物在環境中的毒性作用，同時生物修復也可以做到原位修復并節約成本。
2、對于pfass的常用監測方法為液相色譜或氣相色譜法和質譜法檢測氟化物的降解，但是由于萃取損失、物質本身揮發性等原因對結果的檢測造成較大的偏差。pfass降解過程產生氟離子也可以作為氟化物降解的測定指標，測試c-f化合物的生物降解效果，常用的氟離子檢測方法是離子色譜法(ic)和氟離子特異性選擇電極測定法。在2022年報道的微孔板比色法又提供了一種基于氟-鑭系螯合物顯色反應微孔板比色法檢測氟離子濃度的檢測方法(2022年b
技術實現思路
1、本專利技術為解決上述技術問題，采用以下技術方案來實現：
2、本專利技術建立了一種新型微生物無機鹽培養基mm-f2，可以利用氟-鑭系螯合物微孔板比色法直接檢測菌體生長過程脫氟產生的氟離子濃度。
3、本專利技術中所采用的無機鹽培養基mm-f2的制備方法，其組分(1l)為mgso4·2h2o0.2g、cacl2·2h2o?20mg、mnso420mg、nano30.7g、kno30.3g、(nh4)2so41g，121℃，滅菌20min，滅菌后加入hepes(ph＝7.2)50mmol/l。
4、本專利技術所用的脫氟菌為鞘氨醇盒菌sphingopyxis?sp.njf-3，于2024年5月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(cgmcc)，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101，菌種分類命名為鞘氨醇盒菌(sphingopyxis)，保藏編號：cgmcc?no.1.19398。
5、鞘氨醇盒菌sphingopyxis?sp.njf-3的接種液制備，包括以下步驟：
6、1)平板培養：將鞘氨醇盒菌sphingopyxis?sp.njf-3接種于lb固體平板上，28℃培養24～48h，直至獲得單菌落；
7、2)擴大培養：用接種環挑取步驟1)中單菌落接種至lb液體培養基中，在恒溫振蕩培養箱內于28℃、轉速為160r/min的條件下培養24～36h，獲得od600＝0.6～0.8的菌液，離心收集菌體，采用滅菌mm-f2培養基洗滌3次，等體積重懸菌體后獲得接種液。
8、luria-bertani(lb)培養基(1l)組分：nacl?5g、胰蛋白胨10g、酵母提取物5g；121℃滅菌20min；自然ph，固體培養基添加1.5％瓊脂粉制備。
9、本專利技術的有益效果是：
10、本專利技術建立了一種新型微生物無機鹽培養基mm-f2，脫氟菌可以利用該培養基進行培養，脫氟菌培養后可直接離心取上清液，利用氟-鑭系螯合物微孔板比色法檢測菌體生長過程脫氟產生的氟離子濃度。
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1.基于氟-鑭系螯合物微孔板比色法檢測氟離子濃度的微生物無機鹽培養基MM-F2。
2.制備如權利要求1所述的微生物無機鹽培養基MM-F2的方法，其特征在于，將MgSO4·2H2O?0.2g、CaCl2·2H2O?20mg、MnSO420mg、NaNO30.7g、KNO30.3g、(NH4)2SO41g，溶解到去離子水1000mL中，121℃滅菌20min，培養基滅菌后加入pH＝7.2的HEPES緩沖液50mmol/L。
3.權利要求1所述的微生物無機鹽培養基MM-F2基于微孔板比色法在脫氟菌利用氟化烷基化合物生長過程中檢測脫氟產生的氟離子的應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，脫氟菌為鞘氨醇盒菌(Sphingopyxis?sp.)NJF-3，鞘氨醇盒菌(Sphingopyxis?sp.)NJF-3于2024年5月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為：CGMCC?No.1.19398。
5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述的氟化烷基化合物為1-氟癸烷。
6.根據權利要求3
...【技術特征摘要】
1.基于氟-鑭系螯合物微孔板比色法檢測氟離子濃度的微生物無機鹽培養基mm-f2。
2.制備如權利要求1所述的微生物無機鹽培養基mm-f2的方法，其特征在于，將mgso4·2h2o?0.2g、cacl2·2h2o?20mg、mnso420mg、nano30.7g、kno30.3g、(nh4)2so41g，溶解到去離子水1000ml中，121℃滅菌20min，培養基滅菌后加入ph＝7.2的hepes緩沖液50mmol/l。
3.權利要求1所述的微生物無機鹽培養基mm-f2基于微孔板比色法在脫氟菌利用氟化烷基化合物生長過程...
【專利技術屬性】
技術研發人員：高昭昭，曾軍，晏蒙，項興佳，林先貴，
申請(專利權)人：中國科學院南京土壤研究所，
類型：發明
國別省市：
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