【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及活性物質(zhì)提取，具體涉及一種高效制備橙皮內(nèi)酯的方法。
技術(shù)介紹
1、橙皮內(nèi)酯(meranzin)是柑橘屬植物的一種香豆素類物質(zhì)，分子式為c15h16o4。橙皮內(nèi)酯具有多種生物學(xué)功能，包括調(diào)節(jié)α2-腎上腺素受體、參與ampa-erk1/2-bdnf信號(hào)傳導(dǎo)、抑制乙酰膽堿酯酶、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和抑郁癥合并癥等。橙皮內(nèi)酯因?yàn)榫哂卸喾N生物學(xué)功能體現(xiàn)了良好的應(yīng)用潛力。
2、目前，橙皮內(nèi)酯的制備主要是以乙醇為溶劑、從柑橘果實(shí)中提取制備。例如，he等在避光室溫條件下使用60％-80％乙醇提取枳殼粉末，攪拌24小時(shí)，并收集過濾液，提取兩次，旋蒸濃縮得到濃縮液，以2～3bv/h的速度流過含有大孔樹脂的色譜柱，將該樹脂洗至無色(約5bv)，然后分別用10bv?70％乙醇和10bv?95％乙醇洗脫，真空濃縮后得到粗提物，使用hsccc將兩種乙醇洗脫液分別以正己烷-乙酸乙酯-正丁醇-甲醇-乙酸和正己烷-正丁醇-甲醇-乙酸兩相溶劑系統(tǒng)分離，該方法提取時(shí)間過長，分離需要較多類型的有機(jī)溶劑。朱泰霖等用80％乙醇為溶劑提取柑橘果實(shí)中的橙皮內(nèi)酯，在此過程中，料液比1:20，在超聲波輔助的條件下重復(fù)提取3次，溶劑用量大(共60倍體積的乙醇)，且濃縮消耗了大量能源，利用固相萃取柱初步分離后得到分段粉末，之后通過semi-prep?hplc進(jìn)行進(jìn)一步純化。分段產(chǎn)物ⅰ及分段產(chǎn)物ⅱ的流動(dòng)相為水和甲醇，梯度洗脫時(shí)間為95min；分段產(chǎn)物ⅲ的流動(dòng)相為水和乙腈，梯度洗脫時(shí)間為53min，該方法溶劑使用量大以及分離制備時(shí)間過長。因此，目前相關(guān)研究報(bào)道的橙皮
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為解決上述問題，本專利技術(shù)的提出了一種高效制備橙皮內(nèi)酯的方法，該方法解決現(xiàn)有技術(shù)中橙皮內(nèi)酯制備過程中溶劑使用量大、溶劑種類復(fù)雜、溶劑回收能耗大的問題。
2、根據(jù)本專利技術(shù)的一種高效制備橙皮內(nèi)酯的方法，其包括以下步驟：
3、(1)取柚子水果外表皮粉與石油醚混合，超聲輔助提取，抽濾，濃縮干燥，得到粗提物；
4、(2)將所述粗提物溶于石油醚，以流速為15ml/min上樣至snap?kp-sil正相硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯作為流動(dòng)相通過正向快速液相色譜分離，通過薄層色譜鑒定分離的橙皮內(nèi)酯組分，合并相同的組分；
5、(3)將步驟(2)收集到的組分上樣至反相制備型高壓液相色譜柱，進(jìn)行反相制備型高壓液相色譜純化，通過薄層色譜鑒定純化的橙皮內(nèi)酯組分；
6、(4)將步驟(3)收集到的組分用核磁共振、質(zhì)譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并利用高效液相色譜確定其純度。
7、根據(jù)本專利技術(shù)的一種高效制備橙皮內(nèi)酯的方法，該方法以柚子水果外表皮粉末為原料，采用石油醚為提取溶劑進(jìn)行提取，通過正向快速色譜分離和反相制備型高壓液相色譜純化，經(jīng)過核磁共振和質(zhì)譜分析鑒定以及hplc分析，得到純度≥95％的橙皮內(nèi)酯；該方法可快速、低能耗、節(jié)省溶劑地制備高純度的橙皮內(nèi)酯。
8、可選地，步驟(1)中，所述柚子水果外表皮粉與所述石油醚按照1:3的固液比混合，超聲輔助提取3次，每次30分鐘，超聲溫度為35℃。
9、可選地，步驟(2)中，用不同比例的石油醚-乙酸乙酯溶液進(jìn)行梯度洗脫，石油醚-乙酸乙酯溶液梯度洗脫時(shí)乙酸乙酯的濃度梯度為0％、0～5％、5～10％、10～15％、15～20％、20～25％、25～30％、30～35％、35～45％、45～55％、55～65％、65～75％、75～85％、85～100％，每個(gè)梯度洗脫2個(gè)柱體積，收集全部洗脫液。
10、可選地，步驟(2)中，合并rf值0.56的組分。
11、可選地，步驟(3)中，色譜柱為ultimate?xb-c18色譜柱；采用水(a)-甲醇(b)為流動(dòng)相梯度洗脫；梯度洗脫程序?yàn)椋?～5min?15％-45％b；5-10min?45％-75％b；10-20min75％-90％b；20-30min?90％-45％b；25-35min?45％-15％b；上樣流速3ml/min，上樣濃度4mg/ml；根據(jù)色譜檢測器采集的譜圖收集22～23min內(nèi)的分離組分。
12、可選地，步驟(2)和步驟(3)中，通過薄層色譜鑒定是：以橙皮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品作為對照，進(jìn)行薄層層析tlc定性分析，與標(biāo)準(zhǔn)品比移值一致的組分為分離得到的橙皮內(nèi)酯組分。
13、可選地，步驟(1)中，柚子為琯溪蜜柚，石油醚沸點(diǎn)為60～90℃。
14、本專利技術(shù)的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本專利技術(shù)的實(shí)踐了解到。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種高效制備橙皮內(nèi)酯的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述柚子水果外表皮粉與所述石油醚按照1:3的固液比混合，超聲輔助提取3次，每次30分鐘，超聲溫度為35℃。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，用不同比例的石油醚-乙酸乙酯溶液進(jìn)行梯度洗脫，石油醚-乙酸乙酯溶液梯度洗脫時(shí)乙酸乙酯的濃度梯度為0％、0～5％、5～10％、10～15％、15～20％、20～25％、25～30％、30～35％、35～45％、45～55％、55～65％、65～75％、75～85％、85～100％，每個(gè)梯度洗脫2個(gè)柱體積，收集全部洗脫液。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，合并Rf值0.56的組分。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，色譜柱為Ultimate?XB-C18色譜柱；采用水(A)-甲醇(B)為流動(dòng)相梯度洗脫；梯度洗脫程序?yàn)椋?～5min?15％-45％B；5-10min?45％-75％B；10-20min?75％-90％B；20-
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)和步驟(3)中，通過薄層色譜鑒定是：以橙皮內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品作為對照，進(jìn)行薄層層析TLC定性分析，與標(biāo)準(zhǔn)品比移值一致的組分為分離得到的橙皮內(nèi)酯組分。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，柚子為琯溪蜜柚，石油醚沸點(diǎn)為60～90℃。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種高效制備橙皮內(nèi)酯的方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述柚子水果外表皮粉與所述石油醚按照1:3的固液比混合，超聲輔助提取3次，每次30分鐘，超聲溫度為35℃。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，用不同比例的石油醚-乙酸乙酯溶液進(jìn)行梯度洗脫，石油醚-乙酸乙酯溶液梯度洗脫時(shí)乙酸乙酯的濃度梯度為0％、0～5％、5～10％、10～15％、15～20％、20～25％、25～30％、30～35％、35～45％、45～55％、55～65％、65～75％、75～85％、85～100％，每個(gè)梯度洗脫2個(gè)柱體積，收集全部洗脫液。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，合并rf值0.56的組分。
5.如權(quán)利要...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：倪輝，郭東峰，何凡，楊遠(yuǎn)帆，李利君，胡陽，
申請(專利權(quán))人：集美大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會(huì)獲得科技券。