【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥及保健食品，具體涉及一種開口箭多糖tcp-1及其制備方法、鑒定方法和應用。
技術介紹
1、潰瘍性結腸炎(uc)又稱特發性結腸直腸炎、慢性非特異性潰瘍性大腸炎，是一種病因不明的特發于直腸和結腸的炎癥性腸病。近年來，全球uc的發病率和流行率不斷呈現上升趨勢，發病高峰年齡多在30～40歲之間，易反復發作，遷延難愈，已成為嚴重影響病患生存質量的全球性健康問題。uc臨床癥狀主要表現為腹瀉、腹痛、黏液膿血便等，一般會導致消瘦、貧血、水電解質紊亂及低蛋白血癥，如果控制不好，易有癌變傾向并伴隨多種腸外并發癥。目前，uc的病因、發病機制未完全明晰，因此，治療uc仍然是世界范圍內的臨床治療挑戰。
2、多糖又稱多聚糖，是一類廣泛存在于動植物與微生物體內的生物信息大分子。天然多糖由于其突出的抗氧化和免疫調節活性，在多種疾病中發揮重要作用，包括腫瘤、抗炎和心血管系統疾病。越來越多的證據表明，植物多糖可以通過影響腸道穩態發揮降血糖、免疫調節、抗炎等多種功效。因此，從天然多糖中尋找潛在的治療藥物有望成為預防和治療潰瘍性結腸炎的有效策略。
3、開口箭(tupistra?chinensis?baker)為百合科鈴蘭族的植物，根莖是其藥用部位。味苦、辛，性寒，歸肺、胃、肝經，清熱解毒，祛風除濕，散瘀止痛。臨床上用于咽喉腫痛，風濕痹痛，跌打損傷，胃痛，癰腫瘡毒，毒蛇、狂犬咬傷等。開口箭的化學成分主要有開口箭中含有甾體、黃酮、蛋白質、多糖等多種成分。以往的對開口箭的活性成分研究主要集中甾體類化合物。多糖作為開口箭的主要活性成分
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的第一個技術問題是：針對現有技術存在的不足，提供一種開口箭多糖tcp-1，對潰瘍性結腸炎治療效果顯著。
2、為解決上述第一個技術問題，本專利技術的技術方案是：
3、一種開口箭多糖tcp-1，所述開口箭多糖tcp-1由果糖和葡萄糖糖組成，其分子量范圍為1000-100000da。
4、優選的，所述開口箭多糖tcp-1的主鏈由→6)-α-d-glcp-(1→，→1)-β-d-fruf-(2→,→1,6)-β-d-fruf-(2→,→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→組成；支鏈由→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→組成。
5、專利技術所要解決的第二個技術問題是：針對現有技術存在的不足，提供一種開口箭多糖tcp-1的制備方法，得到的開口箭多糖tcp-1對潰瘍性結腸炎治療效果顯著。
6、為解決上述第二個技術問題，本專利技術的技術方案是：
7、一種開口箭多糖tcp-1的制備方法，包括以下步驟：
8、s1、剪切
9、將開口箭干燥根莖切片，用水清洗干凈、晾干，得開口箭薄片，其中開口箭薄片的尺寸為長3～5cm，直徑0.5～2.5cm；
10、s2、水提
11、將步驟s1所得開口箭片加入水中，加熱提取，過濾，得提取液；
12、s3、醇沉
13、將步驟s2所得提取液在真空度≤-0.1mpa下濃縮，得濃縮液；向濃縮液中加入無水乙醇，至乙醇體積濃度為a％，靜置、分離，得沉淀粗多糖tc，其中10≤a＜100；
14、s4、純化
15、s4-01、一次純化
16、將步驟s3所得粗多糖tc進行除蛋白，透析，凍干，得開口箭多糖tc；
17、s4-02、二次純化
18、將一次純化后的開口箭多糖tc進行離子交換柱層析，用0～2m的nacl溶液進行梯度洗脫，使用苯酚-硫酸法跟蹤洗脫曲線，根據洗脫曲線分別收集糖部分并進行濃縮、冷凍干燥得開口箭多糖tcp；
19、開口箭多糖tcp用水進行溶解、離心，取上清液棄沉淀，將上清液再進行分子篩凝膠柱層析，用水進行洗脫，利用苯酚-硫酸法檢測洗脫曲線，根據洗脫曲線收集糖部分并濃縮、冷凍干燥，得開口箭多糖tcp-1。
20、本專利技術采用水提與醇沉法相結合，且高濃度乙醇能將極性大、水溶性好的多糖與極性小、水溶性差的多糖分離，解決了傳統水煮法提取多糖導致其后期分離繁雜、困難的問題。
21、優選的，步驟s2中水的添加量為開口箭片重量的6-10倍。
22、優選的，步驟s2中的加熱溫度為60-80℃，加熱提取時間為1-3h，加熱提取次數為2-4次。
23、優選的，步驟s3中濃縮溫度為40-70℃，靜置時間為10-15h。
24、專利技術所要解決的第三個技術問題是：針對現有技術存在的不足，提供一種開口箭多糖tcp-1的鑒定方法，成功得出了開口箭多糖tcp-1的結構信息。
25、為解決上述第三個技術問題，本專利技術的技術方案是：
26、一種開口箭多糖tcp-1的鑒定方法，包括以下步驟：
27、(1)取開口箭多糖tcp-1，用tfa酸水解，水解產物高效液相色譜法利用氨基柱rid檢測；
28、(2)取開口箭多糖tcp-1，干燥，壓片，紅外光譜檢測；
29、(3)取開口箭多糖tcp-1，甲基化，水解、還原，乙酰化，進行gc-ms檢測；
30、(4)取開口箭多糖tcp-1溶于d2o，進行核磁共振分析；
31、(5)取開口箭多糖tcp-1采用剛果紅法分析分子構象；
32、(6)取開口箭多糖tcp-1采用掃描電鏡分析表面特征。
33、本專利技術以開口箭干燥根莖為原料，采用水提醇沉法分離得到粗多糖，對提取的粗多糖進行脫蛋白，然后利用離子交換層析和凝膠分子篩柱層析方法純化開口箭粗多糖，首次制備出一種開口箭多糖純品，對此多糖純品的理化性質、分子量、單糖組成等進行了系統的分析鑒定，成功得出了開口箭多糖的結構信息，其中開口箭多糖tcp-1為果聚糖，主鏈由→6)-α-d-glcp-(1→，→1)-β-d-fruf-(2→,→1,6)-β-d-fruf-(2→,→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→組成；支鏈由→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→組成。
34、優選的，步驟(3)中甲基化為開口箭多糖tcp-1與無水dmso加入反應瓶中，再加入干燥的氫氧化鈉，超聲20～40min，冰浴條件下，避光下分三次加入碘甲烷，每次冰浴超聲20～40min，反應結束后加入蒸餾水分解殘留的碘甲烷，并加入氯仿萃取，離心取氯仿層，即得甲基化的開口箭多糖tcp-1；
35、水解、還原為取甲基化的開口箭多糖tcp-1置于具塞試管中，然后加入tf?a，在45-60℃恒溫油浴下水解25-35min，減壓蒸發至干，再重復多次加入甲醇旋干至ph為中性，然后用nabh4在35-45℃下反應本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種開口箭多糖TCP-1，其特征在于：所述開口箭多糖TCP-1由果糖和葡萄糖糖組成，其分子量范圍為1000-100000Da。
2.如權利要求1所述的一種開口箭多糖TCP-1，其特征在于：所述開口箭多糖TCP-1的主鏈由→6)-α-D-Glcp-(1→，→1)-β-D-Fruf-(2→,→1,6)-β-D-Fruf-(2→,→6)-β-D-Fruf-(2→和β-D-Fruf-(2→組成；支鏈由→6)-β-D-Fr?uf-(2→和β-D-Fruf-(2→組成。
3.一種如權利要求1-2中任一項所述的開口箭多糖TCP-1的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權利要求3所述的開口箭多糖TCP-1的制備方法，其特征在于：步驟S2中水的添加量為開口箭薄片重量的6-10倍。
5.如權利要求3所述的開口箭多糖TCP-1的制備方法，其特征在于：步驟S2中的加熱溫度為60-80℃，加熱提取時間為1-3h，加熱提取次數為2-4次。
6.如權利要求3所述的開口箭多糖TCP-1的制備方法，其特征在于：步驟S3中濃縮溫度為40-70℃
7.如權利要求1-6中任一項所述的開口箭多糖TCP-1的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：
8.如權利要求7所述的開口箭多糖TCP-1的鑒定方法，其特征在于：
9.如權利要求1-6中任一項所述的開口箭多糖TCP-1在制備治療結腸炎藥物或保健品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種開口箭多糖tcp-1，其特征在于：所述開口箭多糖tcp-1由果糖和葡萄糖糖組成，其分子量范圍為1000-100000da。
2.如權利要求1所述的一種開口箭多糖tcp-1，其特征在于：所述開口箭多糖tcp-1的主鏈由→6)-α-d-glcp-(1→，→1)-β-d-fruf-(2→,→1,6)-β-d-fruf-(2→,→6)-β-d-fruf-(2→和β-d-fruf-(2→組成；支鏈由→6)-β-d-fr?uf-(2→和β-d-fruf-(2→組成。
3.一種如權利要求1-2中任一項所述的開口箭多糖tcp-1的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權利要求3所述的開口箭多糖tcp-1的制備方法，...
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