【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物組織工程，涉及thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡及其制備方法與用途。
技術介紹
1、骨質疏松癥是一種常見的骨疾病，分為原發性(原因不明)和繼發性(病因可追溯)骨質疏松癥，其特征是骨組織的定量和定性破壞，導致骨密度降低，從而使骨折風險增加。全世界50歲以上的女性和男性中，分別有1/2和1/4在余生中因骨質疏松而遭遇骨折。而間充質干細胞(mesenchymal?stem?cells,mscs)的成骨向分化能力受損，將直接導致骨形成減弱，是骨丟失的重要原因，也是骨質疏松癥的重要發病機制。因此，在骨質疏松患者體內，如何啟動mscs的成骨信號通路并高效誘導其成骨向分化是骨組織工程技術的關鍵，也是防治骨丟失相關疾病與維持骨組織穩態的關鍵。
2、凋亡囊泡(apoptotic?vesicles,apovs)是細胞凋亡過程中產生的異質性細胞外囊泡(extracellular?vesicles,evs)亞群，直徑從100nm到1000nm不等，包裹著大量dna、rna、蛋白質，甚至完整的細胞器。以往研究認為大多數正在經歷凋亡的細胞以apovs的形式被吞噬細胞清除；而越來越多的證據顯示，apovs介導的生物分子轉移可以發生在不同類型的細胞之間，與干細胞的干性維持以及組織的再生息息相關。目前，越來越多的研究關注到apovs應用于疾病的診斷和治療，包括：胃腸疾病的診斷，動脈粥樣硬化、血友病、肝纖維化和細菌感染的治療，骨、皮膚、毛發等組織再生工程，以及免疫治療。當前，以apovs為核心的無細胞骨組織工程技術正在獲得關注。研究表
3、已知evs的生物學特性很大程度上取決于供體細胞的特征，衰老細胞來源evs的生物學功能展現出與老化細胞類似的變化趨勢。一項研究表明，來自老化骨基質的evs有利于mscs脂肪生成，并增強血管平滑肌細胞鈣化，體內注射治療可促進小鼠骨脂代謝失衡，并加劇血管鈣化。作為evs的亞群，apovs的生物學特性可能也受供體細胞影響。因此，在臨床前和/或臨床實驗中，不加區分地使用apovs可能會導致不穩定的結果，損害這一新生領域的發展。探索衰老供體來源apovs的生物學特性和功能，有利于完善對apovs如何參與個體衰老與骨代謝的理解，對apovs的工程化改造和臨床轉化應用至關重要。
4、thy1是一種25-37kda的糖磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,gpi)錨定的細胞表面蛋白。thy1在細胞遷移、粘附、分化、轉分化、凋亡、機械轉導和細胞分裂等過程中發揮重要作用，其功能已在免疫學、神經生物學、癌癥、干細胞生物學、組織重塑和衰老等領域得到廣泛研究。
技術實現思路
1、本專利技術的首要目的是提供一種thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，以能夠更好地促進間充質干細胞成骨向分化，從而可安全高效阻止骨質流失，從而可更好地用于骨質疏松癥的治療。
2、為實現此目的，在基礎的實施方案中，本專利技術提供一種thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡在間充質干細胞來源的凋亡囊泡表面包被有thy1膜糖蛋白。
3、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，其中制備所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡與所述的thy1膜糖蛋白的質量比為1:4-1:6。
4、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，其中所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡呈球形，具有雙層脂質膜結構，粒徑為100-300nm(平均粒徑120-180nm)。
5、本專利技術的第二個目的是提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，以能夠更好地制備如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，制得thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡能夠更好地促進間充質干細胞成骨向分化，從而可安全高效阻止骨質流失，從而可更好地用于骨質疏松癥的治療。
6、為實現此目的，在基礎的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，所述的制備方法包括如下步驟：
7、(1)制備所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡；
8、(2)將所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡與所述的thy1膜糖蛋白混合后孵育一定時間，以使所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡表面吸附一層或多層所述的thy1膜糖蛋白，分離得到所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡。
9、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其中步驟(1)的制備過程包括如下步驟：
10、(11)從動物組織中分離骨髓間充質干細胞；
11、(12)誘導骨髓間充質干細胞凋亡；
12、(13)離心分離與洗滌得到所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡。
13、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其中步驟(12)中，以培養液重懸骨髓間充質干細胞，然后加入星形孢菌素(sts，優選濃度500nm)誘導細胞凋亡。
14、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其中所述的培養液選自mem培養基、dmem培養基、rpmi-1640培養基中的一種或者多種。
15、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其中步驟(13)包括如下步驟：
16、(131)將培養液于4℃，以700-900g離心8-15分鐘，以去除培養液中的細胞碎片，獲得離心上清液；
17、(132)將所述的離心上清液于4℃，以15000-18000g離心25-35分鐘，取沉淀物，即得粗制的所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡；
18、(133)將粗制的所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡以無菌pbs洗滌，然后于4℃，以15000-18000g離心25-35分鐘，獲得所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡的純品。
19、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其中步驟(2)中，孵育溫度為35-40℃，孵育時間為1-2小時。
20、在一種優選的實施方案中，本專利技術提供一種如上所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其中步驟(2)中本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，其特征在于：所述的Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡在間充質干細胞來源的凋亡囊泡表面包被有Thy1膜糖蛋白。
2.根據權利要求1所述的Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，其特征在于：制備所述的Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡與所述的Thy1膜糖蛋白的質量比為1:4-1:6。
3.根據權利要求1或2所述的Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)的制備過程包括如下步驟：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟(12)中，以培養液重懸骨髓間充質干細胞，然后加入星形孢菌素誘導細胞凋亡。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(13)包括如下步驟：
7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步驟(2)中，孵育溫度為35-40℃，孵育時間為1-2小時。
8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于：步
9.根據權利要求1或2所述的Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡用于制備促進間充質干細胞成骨向分化的藥劑的用途。
10.根據權利要求9所述的用途，其特征在于：所述的Thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡進一步用于制備預防或治療或緩解骨質疏松癥的藥劑。
...【技術特征摘要】
1.一種thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，其特征在于：所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡在間充質干細胞來源的凋亡囊泡表面包被有thy1膜糖蛋白。
2.根據權利要求1所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡，其特征在于：制備所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的所述的間充質干細胞來源的凋亡囊泡與所述的thy1膜糖蛋白的質量比為1:4-1:6。
3.根據權利要求1或2所述的thy1包被的間充質干細胞凋亡囊泡的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)的制備過程包括如下步驟：
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：步驟(12)中，以培養液重懸骨髓間充質干細胞，然后加入...
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