【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種九龍?zhí)偬崛∥锏闹苽浞椒捌湓谥苽浼毙苑螕p傷治療藥物中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、急性肺損傷（ali）是由多種肺內(nèi)外致病因素導(dǎo)致的肺彌散功能障礙疾病，主要臨床表現(xiàn)為低氧血癥、肺泡及肺實質(zhì)內(nèi)嚴(yán)重水腫和呼吸困難，嚴(yán)重時可發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征（ards），其病死率為30-45%。ali的發(fā)病機制復(fù)雜，肺內(nèi)因素如有害氣體吸入、組織纖維化、肺泡毛細(xì)血管屏障破壞/通透性改變，肺外因素如創(chuàng)傷、感染、休克等均可導(dǎo)致ali。ali最突出的病理生理特征是肺微血管內(nèi)皮屏障破壞以及肺上皮細(xì)胞死亡。
2、目前，ali的可用療法分為支持療法和藥物干預(yù)。機械通氣的肺保護(hù)策略目前被認(rèn)為是唯一能有效提高生存率的支持性療法。基于生理學(xué)的藥物療法是指使用影響通氣、彌散或灌注的藥物來緩解ali的癥狀。事實上，目前ali尚無有效的藥物療法可大幅降低死亡率并改善患者的生活質(zhì)量。
3、九龍?zhí)贋槎箍蒲蛱慵讓倌举|(zhì)藤本植物，別名羊蹄藤、烏郎藤、梅花入骨丹等，分布于浙江、江西、福建等省，為畬族常用藥。具有行氣活血、祛風(fēng)除濕等功效，主要用于治療風(fēng)濕骨痛，跌打損傷等癥。鑒于上述傳統(tǒng)用途，對九龍?zhí)俚默F(xiàn)代藥理研究主要集中在治療跌打損傷和風(fēng)濕骨痛的清除自由基、抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用，九龍?zhí)俚乃幚碜饔门cali并無較強的相關(guān)性和聯(lián)系，因此目前尚未見有九龍?zhí)倏捎糜谥委熂毙苑螕p傷的研究及文獻(xiàn)報道，且僅根據(jù)九龍?zhí)俚膫鹘y(tǒng)用途和現(xiàn)代藥理研究結(jié)果，也無法確定九龍?zhí)倏煞裼糜谥委焌li。另一方面，九龍?zhí)僦谢钚猿煞侄嗲覐?fù)雜，目前對于這些活性成分的具體功效以及
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)提供了九龍?zhí)偬崛∥镌谥苽浼毙苑螕p傷治療藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)通過特定工藝提取得到了一種九龍?zhí)偬崛∥铮l(fā)現(xiàn)該九龍?zhí)偬崛〔糠謱τ诩毙苑螕p傷具有顯著治療效果，經(jīng)檢測該九龍?zhí)偬崛∥镏械闹饕钚猿煞譃閜mf1-5；進(jìn)一步地，本專利技術(shù)發(fā)現(xiàn)該九龍?zhí)偬崛∥锸峭ㄟ^肺組織細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑以發(fā)揮緩解急性肺損傷作用，這一結(jié)果為九龍?zhí)偬崛∥锏呐R床應(yīng)用和新藥研發(fā)提供了有效的臨床前研究依據(jù)。
2、本專利技術(shù)的具體技術(shù)方案為：
3、首先，本專利技術(shù)提供了九龍?zhí)偬崛∥镌谥苽浼毙苑螕p傷治療藥物中的應(yīng)用，該九龍?zhí)偬崛∥锏某煞职ǎ?,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮（pmf1）、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮（pmf2）、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮（pmf3）、5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮（pmf4）和5,7,5'-三甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮（pmf5）。
4、目前已知九龍?zhí)倬哂锌鼓[瘤、抗氧化和抗缺氧等功效，但由于九龍?zhí)僦谢瘜W(xué)成分復(fù)雜，不同提取工藝得到的九龍?zhí)偬崛∥镏谢钚猿煞址N類、含量各不相同，因此現(xiàn)有技術(shù)中尚未有公開對急性肺損傷具有顯著治療效果的九龍?zhí)偬崛∥?。本專利技術(shù)通過特定工藝提取得到了一種九龍?zhí)偬崛∥?，發(fā)現(xiàn)該九龍?zhí)偬崛〔糠謱τ诩毙苑螕p傷具有顯著治療效果，經(jīng)檢測該九龍?zhí)偬崛∥镏械闹饕钚猿煞譃閜mf1-5。并且，本專利技術(shù)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，含有上述特定活性成分組合的九龍?zhí)偬崛∥锱c單一的pmf化合物相比，對于急性肺損傷的治療具有協(xié)同增效作用；具體地，本專利技術(shù)通過實驗發(fā)現(xiàn)了九龍?zhí)偬崛∥铮╬mfs）是通過肺組織細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑以發(fā)揮緩解急性肺損傷作用，這一結(jié)果可為九龍?zhí)偬崛∥锏呐R床應(yīng)用和新藥研發(fā)提供有效的臨床前研究依據(jù)。
5、作為優(yōu)選，所述九龍?zhí)偬崛∥镏?,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮（pmf1）、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮（pmf2）、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮（pmf3）、5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮（pmf4）和5,7,5'-三甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮（pmf5）的質(zhì)量比為（2-3）:（35-40）:（38-42）:（14-18）:（2-4）。
6、其次，本專利技術(shù)提供了一種所述九龍?zhí)偬崛∥锏闹苽浞椒ǎ浒ㄒ韵虏襟E：
7、1）將九龍?zhí)亠嬈鬯楹笠约状冀?，濃縮后得提取物1。該步驟主要得到九龍?zhí)俚目偺崛∥铮崛∥?主要含有植物色素、多糖類、水溶性酚酸類、兒茶素類、黃酮苷類、黃酮類、甾體類、萜類及其他雜質(zhì)。
8、2）將提取物1與硅藻土混勻，上樣至玻璃柱，先后以石油醚、乙酸乙酯洗脫，收集乙酸乙酯洗脫液，濃縮后得提取物2。該步驟先通過石油醚洗脫，去除總提取物中低極性的脂溶性雜質(zhì)，再乙酸乙酯洗脫得到的提取物2主要含有兒茶素類、黃酮苷類、黃酮類、甾體類、萜類。而多糖類、水溶性酚酸類則留在硅藻土上以去除。
9、3）將提取物2與硅膠混勻，上樣至硅膠色譜柱，依次以石油醚體積比遞減的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，收集洗脫液，濃縮后得提取物3。該步驟主要利用正向色譜的極性差異，以高比例的石油醚-乙酸乙酯將極性小的甾體類、萜類化合物先洗脫下來除去，再以合適極性的石油醚-乙酸乙酯洗脫得到提取物3，主要含有兒茶素類、黃酮苷類、黃酮類。
10、4）將提取物3上樣至ods-c18柱，先后以不同體積比的甲醇-水洗脫，收集洗脫液，濃縮后得提取物4。該步驟主要利用反向色譜的洗脫力差異，以低比例的甲醇-水將親水性的兒茶素類、大部分的黃酮苷類洗脫下來除去，再以合適洗脫力的甲醇-水獲得含有黃酮類和少量黃酮苷的提取物4。
11、5）對提取物4?hplc分離，得九龍?zhí)偬崛∥?。該步驟主要利用制備型高效液相色譜的分離能力，進(jìn)一步去除多甲氧基黃酮色譜峰前后部分的少量黃酮苷、其他類型黃酮雜質(zhì)，得到高純度的五個多甲氧基黃酮有效部位pmfs。
12、作為優(yōu)選，1）中，所述九龍?zhí)亠嬈c甲醇質(zhì)量比為1：（5-15）。
13、作為優(yōu)選，1）中，所述浸提為先以甲醇浸泡10-15h，再在40-60℃下超聲提取至少2次，合并提取液后濃縮，得提取物1。
14、作為優(yōu)選，2）中，所述提取物1經(jīng)冷凍干燥后與其8-12質(zhì)量的硅藻土混勻，干燥。
15、作為優(yōu)選，2）中，先以石油醚洗脫3-7倍柱體積，再以乙酸乙酯洗脫3-7倍柱體積。
16、作為優(yōu)選，3）中，所述梯度洗脫的過程中，石油醚-乙酸乙酯中石油醚的體積占比依次為35-45%、25-35%、15-25%和5-15%；每次洗脫的柱體積為2-6倍。
17、作為優(yōu)選，3）中，所述硅膠的目數(shù)為50-200目。
18、作為優(yōu)選，3）中，所述提取物2與硅膠的質(zhì)量比為1：（1.5-2.5）。
19、作為優(yōu)選，3）中，所述硅膠色譜柱的目數(shù)為100-300目。
20、作為優(yōu)選，4）中，依次以甲醇體積含量為45-55%、25-35%和35-45%的甲醇-水洗脫；每次洗脫的柱體積為3-7倍。
21、作為優(yōu)選，5）中，以甲醇溶解提取物4，進(jìn)樣到制備型高效液相色譜，以甲醇-本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.九龍?zhí)偬崛∥镌谥苽浼毙苑螕p傷治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述九龍?zhí)偬崛∥镏泻幸韵禄钚曰衔铮?,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮、5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮和5,7,5'-三甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述九龍?zhí)偬崛∥镏?,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮、5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮和5,7,5'-三甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮的質(zhì)量比為（2-3）:（35-40）:（38-42）:（14-18）:（2-4）。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述九龍?zhí)偬崛∥锏闹苽浞椒ò?/p>
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：1）中，
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：2）中，
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：3）中，所
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：3）中，
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：4）中，
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：5）中，以甲醇溶解提取物4，進(jìn)樣到制備型高效液相色譜，以甲醇-水為流動相，收集洗脫液，濃縮，得九龍?zhí)偬崛∥铩?/p>
10.一種利用九龍?zhí)偬崛∥餃p輕體外肺組織細(xì)胞損傷的方法，其特征在于：
...【技術(shù)特征摘要】
1.九龍?zhí)偬崛∥镌谥苽浼毙苑螕p傷治療藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述九龍?zhí)偬崛∥镏泻幸韵禄钚曰衔铮?,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮、5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮和5,7,5'-三甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述九龍?zhí)偬崛∥镏?,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮、5,6,7,3',4',5'-六甲氧基黃酮、5,7,3',4',5'-五甲氧基黃酮、5,6,7,5'-四甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮和5,7,5'-三甲氧基-3',4'-亞甲二氧基黃酮的質(zhì)量比為（2-3）:（35-40）:（38-42）:（14-18）:（2-4）。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李元圓，
申請(專利權(quán))人：杭州醫(yī)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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