【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及抗體，具體涉及ox40納米抗體及其制備方法，ox40納米抗體衍生物及它們的應用。
技術介紹
1、ox40(cd134)及其結合配體蛋白ox40l(cd252)是tnfr/tnf超家族的成員，在活化的cd4和cd8t細胞以及許多其他淋巴和非淋巴細胞上表達。ox40分子和傳統t細胞的共刺激信號分子類似，可以促進t細胞分裂和存活，在效應細胞和記憶細胞群遇到抗原刺激時增強它們的克隆擴張能力。ox40還可以抑制treg細胞的分化和活性，ox40和ox40l還調節t細胞、抗原呈遞細胞、nk細胞和nkt細胞的細胞因子產生，并調節細胞因子受體信號傳導。ox40/ox40l相互作用被發現在多種炎癥和自身免疫性疾病的發展中發揮著核心作用，使它們成為臨床干預的有吸引力的藥物開發靶標(djpaterson等，(1987)，molecularimmunology，24(12)，1281-1290)，(michaelcroft等，(2009).immunolrev.may；229(1):173-91)。
2、ox40和ox40l相互作用在大多數炎癥或自身免疫性疾病的主要模型中進行了比較廣泛的研究。ox40和ox40l缺陷小鼠在過敏性哮喘小鼠模型中顯示出th2肺部炎癥顯著減弱的現象(jemberag等(jexpmed.2001)，；193:387-92)，阻斷ox40l抑制記憶效應t細胞積累，因此消除了哮喘反應的關鍵特征，包括嗜酸性粒細胞增多、氣道高反應性、粘液產生和th2細胞因子產生(salek-ardakanis等(2003)，
3、美國西奈山伊坎醫學院emmaguttman-yassky團隊研究了ox40抗體治療中重度特應性皮炎的療效與安全性。相關論文于2022年12月9日發表在《柳葉刀》雜志上，結果顯示，臨床上使用ox40阻斷性抗體rocatinlimab治療特應性皮炎患者，與安慰劑組相比，在第16周時，所有rocatinlimab組的easi評分均顯著降低，大多數患者在停藥后仍保持這種改善，且治療耐受性良好(guttman-yasskye等，(2023)lancet.jan21；401(10372):204-214.)。
4、因而，若能提供出高效且低成本的ox40抗體對于降低治療成本及提高治療效果均有重要意義。
5、但是，目前現有的ox40抗體的活性以及生產成本都較高，尤其是國內對于ox40抗體的研究仍非常有限，臨床中的選擇替代性很差。
技術實現思路
1、為克服上述缺點，本專利技術的目的在于提供一種ox40納米抗體，本專利技術的ox40納米抗體對ox40分子均具有較好的結合活性，同時能夠阻斷ox40與ox4ol的相互作用，具有良好的抗炎活性。在此基礎上完成了本專利技術。
2、為了達到以上目的，本專利技術采用的技術方案是：
3、本專利技術提供了一種ox40納米抗體包含重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含如seq?id?no.12-14所示的重鏈互補決定區vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，
4、vhcdr1包含序列gysrgdyc(seq?id?no.12)；
5、vhcdr2包含序列igtgnpgaa(seq?id?no.13)；
6、vhcdr3包含序列vavgpysgcsadyflregpagnay(seq?id?no.14)。本專利技術的ox40納米抗體通過elisa和流式驗證具有良好的與ox40結合的特異性，并能有效阻斷ox40與ox40l的結合。
7、進一步的，所述重鏈可變結構域包含如seq?id?no.10所示的氨基酸序列。在一些實施方式中，本專利技術的ox40納米抗體的重鏈的氨基酸序列如序列表中seq?id?no.10；在其他可能的實施方式中，其氨基酸序列也可以為將seq?id?no.10的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加而得到，并與seq?id?no.10氨基酸序列具有90％以上同一性且具有相同功能。例如，可以與seq?id?no.10具有90％以上、90.5％以上、91％以上、92％以上、93％以上、94％以上、94.5％以上、95％以上、96％以上、97％以上、97.5％以上、98％以上或99％以上同一性。
8、本專利技術還提供了一種編碼前述的ox40納米抗體的核酸分子。
9、進一步的，編碼所述納米抗體重鏈的核酸為seq?id?no.11所示的核酸。在一些實施方式中，本專利技術的ox40納米抗體的重鏈的核苷酸序列如序列表中seq?id?no.11所示；在其他可能的實施方式中，ox40納米抗體的重鏈的核苷酸序列也可以為與seq?id?no.11的核苷酸序列雜交且編碼具有相同功能的核酸；或與seq?id?no.11的核苷酸序列具有90％以上以上同源性且具有相同功能的序列。例如，可以與seq?id?no.11具有90％以上、91％以上、91.5％以上、92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、95.5％以上、96％以上、97％以上、97.5％以上、98％以上或99％以上同源性的序列。
10、本專利技術還提供了一種含有前述的核酸分子的載體。
11、本專利技術還提供了一種包含前述的抗體的融合物或綴合物。
12、本專利技術還提供了一種包含前述的核酸分子的表達盒或重組菌。
13、本專利技術還提供了一種組合物，其包含前述的ox40納米抗體、核酸分子、載體或融合物或綴合物中的至少一種，及其相應的可藥用載體中的至少一種。
14、本專利技術還提供了一種檢測生物樣品中ox40的方法，包括使生物樣品與前述的ox40納米抗體或融合物或綴合物接觸。
15、本專利技術還提供了一種將前述的抗體或抗原結合片段、融合物或綴合物、或組合物在制備用于阻斷ox40l與ox40結合的藥物制劑或是在治療或延緩癌癥的藥物制劑中的用途；或在制備治療或延緩特應性皮炎、類風濕關節炎等自身免疫性炎癥的藥物制劑中的用途。
16、本專利技術的藥物制劑包括“藥學上可接受的”和“生理學上可接受的”載體、稀釋劑或賦形劑。藥物劑型可以為乳劑、混懸劑、糖漿劑、酏劑、片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、晶體或微珠、軟膏劑、油膏劑、凝膠劑、霜劑或貼劑。可制備適合于特定的局部、區域或全身性給藥或遞送途徑的藥物配方。
17、本專利技術還提供了一種ox40納米抗體的制備方法，其包括如下步驟：
18、制備重組ox40抗原：利用來自uniprot蛋白質數據庫的人ox40的氨基酸序列，所述人ox40序列如seq?id?no.1所示；
19、ox40納米抗體的篩選步驟，包括：動物免疫、rna的提取、本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種OX40納米抗體，其特征在于：包含重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含如SEQ?ID?NO.12-14所示的重鏈互補決定區VHCDR1、VHCDR2和VHCDR3，
2.根據權利要求1所述的OX40納米抗體，其特征在于：所述重鏈可變結構域包含如SEQID?NO.10所示的氨基酸序列。
3.編碼如權利要求1或2所述的OX40納米抗體的核酸分子。
4.根據權利要求3所述的核酸分子，其特征在于：
5.含有如權利要求3或4所述的核酸分子的載體。
6.一種包含權利要求1或2的分離的抗體的融合物或綴合物。
7.包含權利要求3或4所述的核酸分子的表達盒或重組菌。
8.一種組合物，其包含權利要求1或2的分離的抗體、權利要求3的核酸分子、權利要求4的載體或權利要求5的融合物或綴合物中的至少一種，及其相應的可藥用載體中的至少一種。
9.一種檢測生物樣品中OX40的方法，包括使生物樣品與權利要求1或2的分離的抗體或權利要求5的融合物或綴合物接觸。
10.權利要求1或2所述的抗體或抗原結
11.權利要求1或2所述的OX40納米抗體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種ox40納米抗體，其特征在于：包含重鏈可變結構域，所述重鏈可變結構域包含如seq?id?no.12-14所示的重鏈互補決定區vhcdr1、vhcdr2和vhcdr3，
2.根據權利要求1所述的ox40納米抗體，其特征在于：所述重鏈可變結構域包含如seqid?no.10所示的氨基酸序列。
3.編碼如權利要求1或2所述的ox40納米抗體的核酸分子。
4.根據權利要求3所述的核酸分子，其特征在于：
5.含有如權利要求3或4所述的核酸分子的載體。
6.一種包含權利要求1或2的分離的抗體的融合物或綴合物。
7.包含權利要求3或4所述的核酸分子的表達盒或重組菌。
8.一種...
【專利技術屬性】
技術研發人員：任寶永，劉鵬，
申請(專利權)人：思格蘇州生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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