一種大腦外泌體靶向載藥系統及其應用技術方案

本申請屬于裸質?；蛑委熕幬镱I域，具體涉及一種大腦外泌體靶向載藥系統及其應用。所述載藥系統包括質粒CMV?RVG?Sir<supgt;A</supgt;；其中，質粒CMV?RVG?Sir<supgt;A</supgt;的堿基序列如SEQ?ID?No.1所示。質粒CMV?RVG?Sir<supgt;A</supgt;在小鼠肝臟產生的外泌體膜表面的Lamp2b蛋白與RVG多肽融合；該外泌體通過血液循環可以穿過血腦屏障到達大腦。本質粒在外泌體中的表達產物是ampkα?siRNA，可以與小鼠下丘腦神經細胞中的ampkα?mRNA互補配對，使ampkα?mRNA失效。

【技術實現步驟摘要】

本申請屬于裸質?；蛑委熕幬镱I域，具體涉及一種大腦外泌體靶向載藥系統及其應用。

技術介紹

1、amkp即amp依賴的蛋白激酶，是生物能量代謝調節的關鍵分子，是研究糖尿病及其他代謝相關疾病的核心。它表達于各種代謝相關的器官中，能被機體各種刺激激活，包括細胞壓力、運動和很多激素及能影響細胞代謝的物質。最近的研究表明(milbank?e,draganonrv,gonzález-garcía?i,et?al.small?extracellular?vesicle-mediated?targeting?ofhypothalamic?ampkαcorrects?obesity?through?bat?activation.nat?metab.2021；3(10):1415-1431.doi:10.1038/s42255-021-00467-8)，下丘腦中ampk的調節是調節能量平衡的典型機制。ampkα是人類基因表達ampk的一種亞型，抑制了下丘腦中ampkα的表達后，會導致交感神經系統(sns)活性的增加，從而刺激棕色脂肪組織(bat)產熱，增加能量消耗，隨后導致與進食無關的體重減輕。

2、rna干擾(rnai)可以特異性靶向mrna并在其生物發生前調節其蛋白質的表達，被認為是一種很有前途的治療工具來操縱疾病相關基因的表達。rnai治療遇到了許多問題，在臨床轉化過程中遠遠低于預期。rnai治療的發展經歷了兩個主要階段。在第一階段，合成小干擾rna(sirnas)或化學修飾的穩定sirnas，并直接注射進行系統傳遞；然而，這些sirnas不能有效地通過生物屏障到達靶基因。第二階段，專利技術了各種傳遞載體(如，脂質納米顆粒，陽離子聚合物和病毒)或偶聯配體(如，三觸角乙酰半乳糖胺)，以提高sirna在體內的傳遞效率。在以往的研究中(fu?z,zhang?x,zhou?x,et?al.in?vivo?self-assembledsmall?rnas?as?a?new?generation?of?rnai?therapeutics.cell?res.2021；31(6):631-648.doi:10.1038/s41422-021-00491-z)，設計了可組合和可編程的質粒，利用肝臟作為組織底盤，指導外源性sirnas的自組裝成分泌性外泌體，并促進自組裝sirnas在體內的系統可組合和可編程的遺傳電路，利用肝臟作為組織底盤，指導外源性sirnas的自組裝成分泌性外泌體，并促進自組裝sirnas在體內的傳遞。然而，在改造之前，由于血腦屏障，肝臟生產的外泌體在體循環中系統的傳遞，無法進入大腦，且不含有ampkα-sirna，無法達到減肥的效果。

技術實現思路

1、針對上述技術問題，本專利技術通過將質粒cmv-lamp2b-gfp-sirna中的lamp2b-gfp-sirna基因序列替換為rvg-lamp2b-ampkα-sirna基因序列，rvg-lamp2b-ampkα-sirna中的rvg基因是狂犬病病毒肽基因，具體序列為tacaccatttggatgcccgagaatccgagaccagggacaccttgtgacatt?tttaccaatagcagagggaagagagcatccaacggg，狂犬病病毒肽(rvg)可以與外泌體膜蛋白(lamp2b)融合，使得肝臟生產的外泌體膜表面攜帶狂犬病病毒肽(rvg)，通過血腦屏障到達大腦，sirna呈遞的效率也隨之增高。

2、本專利技術的技術方案如下：

3、本專利技術第一方面，提供一種大腦外泌體靶向載藥系統，所述載藥系統包括質粒cmv-rvg-sira；

4、其中，質粒cmv-rvg-sira包括rvg-lamp2b-ampkα-sirna。

5、質粒(cmv-rvg-sira)在小鼠肝臟產生的外泌體膜表面的lamp2b蛋白與rvg多肽融合；該外泌體通過血液循環可以穿過血腦屏障到達大腦。本質粒在外泌體中的表達產物是ampkα-sirna，可以與小鼠下丘腦神經細胞中的ampkα-mrna互補配對，使ampkα-mrna失效。

6、根據本申請的具體實施方式，所述質粒cmv-rvg-sira的制備方法，包括以下步驟：

7、將質粒cmv-lamp2b-gfp-sirna上的lamp2b-gfp-sirna基因序列替換為rvg-lamp2b-ampkα-sirna基因序列；即得到質粒cmv-rvg-sira；

8、其中，lamp2b-gfp-sirna基因的堿基序列如seq?id?no.1所示，具體為：5’-tccggaggtgcagaatgggagatgaatttcacaataacatatgaaacta?caaaccaaaccaataaaactataaccattgcagtacctgacaaggcgacacacgatggaagcagttgtggggatgaccggaatagtgccaaaataatgatacaatttggattcgctgtctcttgggctgtgaattttaccaaggaagcatctcattattcaattcatgacatcgtgctttcctacaacactagtgatagcacagtatttcctggtgctgtagctaaaggagttcatactgttaaaaatcctgagaatttcaaagttccattggatgtcatctttaagtgcaatagtgttttaacttacaacctgactcctgtcgttcagaaatattggggtattcacctgcaagcttttgtccaaaatggtacagtgagtaaaaatgaacaagtgtgtgaagaagaccaaactcccaccactgtggcacccatcattcacaccactgccccgtcgactacaactacactcactccaacttcaacacccactccaactccaactccaactccaaccgttggaaactacagcattagaaatggcaatactacctgtctgctggctaccatggggctgcagctgaacatcactgaggagaaggtgcctttcatttttaacatcaaccctgccacaaccaacttcaccggcagctgtcaacctcaaagtgctcaacttaggctgaacaacagccaaattaagtatcttgactttatctttgctgtgaaaaatgaaaaacggttctatctgaaggaagtgaatgtctacatgtatttggctaatggctcagctttcaacatttccaacaagaaccttagcttctgggatgcccctctgggaagttcttatatgtgcaacaaagagcaggtgctttctgtgtctagagcgtttcagatcaacacctttaacctaaaggtgcaaccttttaatgtgacaaaaggacagtattctacagcccaggagtgttcgctggatg本文檔來自技高網...

【技術保護點】

1.一種大腦外泌體靶向載藥系統，其特征在于，所述載藥系統包括質粒CMV-RVG-SirA；

2.根據權利要求1所述的大腦外泌體靶向載藥系統，其特征在于，所述質粒CMV-RVG-SirA的制備方法，包括以下步驟：

3.一種靶向大腦外泌體的藥物，其特征在于，采用權利要求1或2所述的大腦外泌體靶向載藥系統。

4.根據權利要求3所述的藥物，其特征在于，通過尾靜脈注射給藥。

5.根據權利要求4所述的藥物，其特征在于，按照小鼠體重，注射量為1-5mg/kg，1-3天注射一次。

6.一種治療肥胖的藥物，其特征在于，采用權利要求1或2所述的大腦外泌體靶向載藥系統。

7.根據權利要求6所述的藥物，其特征在于，通過尾靜脈注射給藥。

8.根據權利要求7所述的藥物，其特征在于，按照小鼠體重，注射量為1.5-2.5mg/kg，1-3天注射一次。

9.質粒CMV-RVG-SirA在制備靶向大腦外泌體的藥物上的應用。

10.質粒CMV-RVG-SirA在制備治療肥胖的藥物上的應用。

【技術特征摘要】

1.一種大腦外泌體靶向載藥系統，其特征在于，所述載藥系統包括質粒cmv-rvg-sira；

2.根據權利要求1所述的大腦外泌體靶向載藥系統，其特征在于，所述質粒cmv-rvg-sira的制備方法，包括以下步驟：

3.一種靶向大腦外泌體的藥物，其特征在于，采用權利要求1或2所述的大腦外泌體靶向載藥系統。

4.根據權利要求3所述的藥物，其特征在于，通過尾靜脈注射給藥。

5.根據權利要求4所述的藥物，其特征在于，按照小鼠體重，注射量為1-5...

【專利技術屬性】
技術研發人員：烏塞，賈麗莎，易洲，肖潤，
申請(專利權)人：中國科學院杭州醫學研究所，
類型：發明
國別省市：