嗜熱菌蛋白酶及其變體的生產和在液體洗滌劑中的用途制造技術

本發明專利技術提供包含至少一種具有提高的貯存穩定性和／或催化活性的嗜熱菌蛋白酶樣中性蛋白酶的方法和組合物。在一些實施方案中，嗜熱菌蛋白酶用于包括洗滌劑的清潔和其他用途。在一些特別優選實施方案中，本發明專利技術提供包含經配制和／或工程改造而抵抗洗滌劑誘導的失活的嗜熱菌蛋白酶的方法和組合物。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術提供包括至少一種具有改善的貯存穩定性和/或催化活性的嗜熱菌蛋白 酶樣中性蛋白酶的方法和組合物。在一些實施方案中，該嗜熱菌蛋白酶用于包括洗滌劑的 清潔和其他應用中。在一些特別優選實施方案中，本專利技術提供包含嗜熱菌蛋白酶的方法和 組合物，其中該嗜熱菌蛋白酶經配制和/或工程改造而抵抗洗滌劑誘導的失活。
技術介紹
芽胞桿菌(Bacilli)是分泌許多工業上有用酶的革蘭氏陽性細菌，所述酶可通 過發酵廉價地大體積生產。分泌性芽胞桿菌酶的實例是枯草桿菌蛋白酶絲氨酸蛋白酶、 含鋒中性蛋白醇(zinc containing neutralproteases)、 α -淀粉醇禾口纖維素醇。芽胞 桿菌蛋白酶被廣泛用于紡織、洗衣和家居工業(Galante，Current Organic Chemistry, 7:1399-1422,2003;禾口 Showel1， Handbook of Detergents, Part D =Formulation, Hubbard (ed.), NY =Taylor and Francis Group，2006)。從洗滌的衣服上高效地去除污漬和 顏色需要蛋白酶。然而，清潔劑和洗滌劑的液體制劑通常含有對大多數蛋白酶具有去穩定 化作用的助洗劑、表面活性劑和金屬螯合劑。洗滌劑和其他清潔組合物通常包含復雜的活性成分組合。例如，大多數清潔 產品包含表面活性劑系統、用于清潔的酶、漂白劑、助洗劑、抑泡劑、懸污劑、污垢釋放劑 (soil-release agent)、熒光增白劑、柔軟劑、分散劑、染料轉移抑制化合物、磨料、殺細菌 劑和香料。盡管當前的洗滌劑很復雜，但仍然有許多難以完全去除的污漬。此外，通常有殘 留物積累，這導致由于不完全清潔而引起的褪色(例如，發黃)和減損的美感。這些問題可 以因低清洗溫度(例如，冷水)和較短的清洗周期的增加使用而增加。此外，許多污漬由復 雜的纖維材料混合物組成，主要包括碳水化合物和碳水化合物衍生物、纖維和細胞壁成分 (例如，植物材料、木材、基于泥/粘土的污物和水果)。此類污漬對清潔組合物的配制和使 用提出了難以應對的挑戰。此外，有色衣服易于磨損和顯示外觀的喪失。這種顏色丟失有一部分是由于洗衣 過程中，特別是在自動化清洗和干燥機中的磨損造成的。此外，織物的抗張強度的喪失看起 來是使用、穿戴和/或清洗以及干燥中的機械和化學作用的不可避免的結果。因此，需要有 效率和有效力地清洗有色衣服以最小化這些外觀喪失的手段。總而言之，盡管清潔組合物的能力已得到提高，但在本領域仍然存在需要能 夠去除污漬、保持織物顏色和外觀以及防止染料轉移的洗滌劑。此外，仍然需要可以 向織物提供和/或恢復抗張強度、以及提供抗皺、抗起球(anti-bobbling)和/或防 縮(anti-shrinkage)性質、以及提供靜電控制(staticcontrol)、織物柔軟性(fabric softness)、保持期望的顏色外觀和織物抗磨損性質和益處的洗滌劑和/或織物護理組合 物。尤其是，仍然需要包含能夠去除常常保持附著在所洗滌 織物上的污漬有色成分的組合 物。此外，仍然需要適用于紡織品漂白的改進的方法和組合物。專利技術概述本專利技術提供包括至少一種具有提高的貯存穩定性和/或催化活性的嗜熱菌蛋白酶樣中性蛋白酶的方法和組合物。在一些實施方案中，該嗜熱菌蛋白酶用于包括洗滌劑的 清潔及其他應用中。在一些特別優選實施方案中，本專利技術提供包括嗜熱菌蛋白酶的方法和 組合物，其中該嗜熱菌蛋白酶經配制和/或工程改造而抵抗洗滌劑誘導的失活。本專利技術提供包含分離的嗜熱菌蛋白酶和中性金屬蛋白酶抑制劑的組合物，其中嗜 熱菌蛋白酶是地芽孢桿菌(Geobacillus)嗜熱菌蛋白酶或芽孢桿菌嗜熱菌蛋白酶。在一些 實施方案中，本專利技術的組合物包含分離的嗜熱菌蛋白酶和選自膦酰二肽(phosphoramidon) 和galardin的中性金屬蛋白酶抑制劑。在一些實施方案中，本專利技術組合物的嗜熱菌蛋 白酶是G. caldoproteolyticus或嗜熱脂肪地芽孢桿菌(G. stearothermophilus)的嗜 熱菌蛋白酶，在其他實施方案中，本專利技術組合物的嗜熱菌蛋白酶是嗜熱溶蛋白芽孢桿菌 (B. thermoproteolyticus)的嗜熱菌蛋白酶。在一些特定的實施方案中，本專利技術的組合物包 含嗜熱菌蛋白酶，其與包含SEQ ID NO :3中所示氨基酸序列的嗜熱菌蛋白酶具有至少50% (50 至 100%，優選至少 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、 98%或99%)的氨基酸同一性。在一些其他實施方案中，本專利技術的組合物包含含有SEQ ID NO 3中所示的氨基酸序列的嗜熱菌蛋白酶。在其他實施方案中，本專利技術的組合物包含SEQ ID NO 3的嗜熱菌蛋白酶。 此外，本專利技術還提供具有提高的穩定性和/或性能的分離的嗜熱菌蛋白酶變體。 在一些優選實施方案中，嗜熱菌蛋白酶變體是地芽胞桿菌(Geobacillus)嗜熱菌蛋白酶變 體，其具有在如下位置包含一個或多個置換的氨基酸序列，所述位置選自與SEQ ID NO 3 所示氨基酸序列的位置 6、7、49、56、58、61、63、65、75、128、151、156、196、273、278 和 280 等 同的位置。在此類實施方案的一個亞組中，該一個或多個置換包括1、2、3、4、或5個在選自 與 SEQ ID NO 3 所示氨基酸序列的位置 6、7、49、56、58、61、63、65、75、128、151、156、196、 273,278和280等同的位置的位置上的置換。在另外的實施方案中，本專利技術提供分離的地 芽胞桿菌嗜熱菌蛋白酶變體，其具有在選自與如SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的位置4、6、 7、36、49、53、56、58、61、63、65、75、85、108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、 278,280和297等同的位置的位置上包含一個或多個置換的氨基酸序列，并且具有提高的 穩定性和/或性能。在此類實施方案的一個亞組中，該一個或多個置換包括1、2、3、4或5個 在選自與 SEQ ID NO :3 所示氨基酸序列的位置 4、6、7、36、49、53、56、58、61、63、65、75、85、 108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、278、280 和 297 等同的位置的位置上的 置換。在一些其他實施方案中，本專利技術提供嗜熱菌蛋白酶變體，其包含一個或多個選自 如下的置換表7-1、表8-1和表8-2中所列的置換T006G、T006H、T006I、T006K、T006M、 T006N、T006P、T006Q, T006R、T006V, T006W, T006Y、V007F, V007H, V007K, V007L, V007M、 V007P、V007Q、V007R、V007T、V007Y、T049G、T049H、T049I、T049K、T049L、T049N、T049P、 T049Q、T049W、A058I、A058P、A058R、F063I、F0本文檔來自技高網...

【技術保護點】
包含分離的嗜熱菌蛋白酶和中性金屬蛋白酶抑制劑的組合物，其中所述嗜熱菌蛋白酶是地芽胞桿菌嗜熱菌蛋白酶或芽胞桿菌嗜熱菌蛋白酶。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】US 2007-11-1 60/984,664包含分離的嗜熱菌蛋白酶和中性金屬蛋白酶抑制劑的組合物，其中所述嗜熱菌蛋白酶是地芽胞桿菌嗜熱菌蛋白酶或芽胞桿菌嗜熱菌蛋白酶。2.權利要求1的組合物，其中所述中性金屬蛋白酶抑制劑是膦酰二肽或galardin。3.權利要求1的組合物，其中所述地芽胞桿菌是G.caldoproteolyticus或嗜熱脂肪泥 地芽孢桿菌。4.權利要求1的組合物，其中所述芽胞桿菌是嗜熱溶蛋白芽孢桿菌。5.權利要求1的組合物，其中所述嗜熱菌蛋白酶具有與SEQID NO :3所示的氨基酸序 列至少50%的氨基酸同一性。6.權利要求1的組合物，其中所述嗜熱菌蛋白酶包含SEQID NO :3中所示的氨基酸序列。7.具有提高的穩定性和/或性能的分離的嗜熱菌蛋白酶變體。8.權利要求7的分離的嗜熱菌蛋白酶變體，其中所述嗜熱菌蛋白酶變體是地芽胞桿菌 嗜熱菌蛋白酶變體，其具有在選自如下位置的位置上包含一個或多個置換的氨基酸序列 與 SEQ ID NO 3 所示氨基酸序列的位置 6，7，49，56，58，61，63，65，75，128，151，156，196， 273，278和280等同的位置。9.權利要求8的分離的嗜熱菌蛋白酶變體，其中所述一個或多個置換包括1、2、3、4或 5個在選自與SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的位置6，7，49，56，58，61，63，65，75，128，151， 156，196，273，278和280等同的位置的位置上的置換。10.權利要求7的分離的嗜熱菌蛋白酶變體，其中所述嗜熱菌蛋白酶變體是地芽胞桿 菌嗜熱菌蛋白酶變體，其具有在選自與SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的位置4、6、7、36、49、 53、56、58、61、63、65、75、85、108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、278、280 和 297等同的位置的位置上包含一個或多個置換的氨基酸序列。11.權利要求10的分離的嗜熱菌蛋白酶變體，其中所述一個或多個置換包括1、2、3、4 或5個在選自與SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的位置4、6、7、36、49、53、56、58、61、63、65、 75、85、108、128、129、151、156、194、195、196、261、265、273、278、280 和 297 等同的位置的位 置上的置換。12.權利要求7的分離的嗜熱菌蛋白酶變體，其中所述嗜熱菌蛋白酶變體包含選自 如下的一個或多個置換置換 T006G、T006H、T006I、T006K、T006M、T006N、T006P、T006Q、 T006R、T006V、T006W、T006Y、V007F、V007H、V007K、V007L、V007M、V007P、V007Q、V007R、 V007T、V007Y、T049G、T049H、T049I、T049K、T049L、T049N、T049P、T049Q、T049W、A058I、 A058P、A058R、F063I、F063L、F063P、S065K、S065Y、Y075G、Y075M、Y075T、Q128H、Q128I、 Q128L、Q128M、Q128V、Q128Y、Y151D、Y151E、Y151H、Y151K、Y151M、Y151N、Y151Q、Y151R、 Y151T、Y151V、Y151W、I156M、I156R、I156T、I156W、G196R、Q273I、Q273P、Q273Y、T278K、 T278M、T278P、N280K、N280R、T006A、T006C、T049D、T049I、T049L、T049M、T049N、T049S、 A056C、A056R、A056Y、A058S、S065C、S065E、S065I、S065T、S065V、S065Y、Q128C, Q128I, Q128M、Q128T、Q128V、Q128Y、Y151A、Y151C、Y151D、Y151E、Y151H、Y151M、Y151N、Y151Q、 Y151R、 Y151S、 Y151T、 Y151V、 Y151W、 I156E、 I156H、 I156K、 I156M、 I156R、 I156T、 I156W、 G196D、G196H、Q273A、Q273N、Q273T、Q273W、Q273Y、T278C、T278H、T278M、T278N、T278S、 T278Y、N280E、N280I、N280L、N280M、N280S、T006C、T049D、T049N、T049Q、T049S、A056C、A056E、A058C、A058E、Q061E, Q061M, S065C、S065D、S065E、S065P、S065V、S065W, S065Y、 Q128C、Q128I、Q128M、Q128T、Q128V、Q128Y、Y151A、Y151C、Y151N、Y151S、Y151T 和 I156E。13.權利要求12的分離的嗜熱菌蛋白酶變體，其中所述一個或多個置換包括1、2、3、 4 或 5 個選自如下的置換置換 T006G、T006H、T006I、T006K、T006M、T006N、T006P、T006Q、 T0...

【專利技術屬性】
技術研發人員：DA埃斯特爾，RWJ奧姆斯，AD劉，A肖，
申請(專利權)人：丹尼斯科美國公司，
類型：發明
國別省市：US[美國]