羅布麻葉中金絲桃苷的制備方法技術

本發明專利技術公開了羅布麻葉中金絲桃苷的制備方法，該制備方法首先確定了最佳提取溫度，分離材料，洗脫劑濃度，然后調節pH值后再采用針對金絲桃苷溶解萃取能力強的溶劑進行萃取，得到萃取液后，本發明專利技術再采用乙醇或甲醇在80~85℃加熱回流提取，然后再在優選的冷卻溫度下，放置析晶，可以非常有效的將性質相近的金絲桃苷和異槲皮苷兩種黃酮苷成分分離，發明專利技術還采用制備液相進一步純化金絲桃苷，用方法學考察確定流動相，并根據金絲桃苷吸收波長，有針對性、高效率的進行分離純化，能得到純度達90~99%的金絲桃苷，符合一類原料藥的要求。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種從中草藥中制備原料藥的方法，具體涉及一種從羅布麻葉中提取分離得到高純度金絲桃苷的制備方法。
技術介紹
羅布麻葉為夾竹桃科植物羅布麻的干燥葉，羅布麻葉中主要含有黃酮類、鞣質、低分子有機酸類、長鏈脂肪酸酯、醇類、留體類等成分。《本草綱目》記載其有平心悸、止眩暈、消喘止咳、強心利尿之功效。現代研究表明，羅布麻葉具有降血壓、降血脂、抗抑郁、鎮靜、利尿等多種藥理作用。金絲桃苷(槲皮素-3-0-β -D-吡喃半乳糖苷)和異槲皮苷等為羅布麻葉中黃酮苷類成分，現代藥理研究表明，金絲桃苷具有鎮痛、保護心腦血管系統以及抗抑郁等活性。現有技術中分離純化黃酮的方法較多，主要有色譜法，但是不同植物中含有的黃酮種類和結構都存在很大的差別，從而化學性質存在差異，在提取純化過程中套用一般的提取純化方法，得到的黃酮的純度不高，如要達到很高的純度，其分離效率較低，成本較高；目前針對羅布麻葉提取純化高純度的金絲桃苷的方法報道很少，且羅布麻葉中化學成分復雜，尤其是羅布麻葉中所含有的金絲桃苷和異槲皮苷性質相近，在提取分離過程中非常困難，而金絲桃苷特有的化學結構類型由于其活性強很有利用價值，因此為了充分利用羅布麻葉資源， 滿足市場需求，很有必要研發出一套提取純化效率高、成本低、且金絲桃苷純度高的制備方法。
技術實現思路
專利技術目的本專利技術的目的是為了解決現有技術的不足，提供一種。技術方案為了實現以上目的，本專利技術提供的，具體包括以下步驟(1)取羅布麻葉藥材揀選、洗凈、干燥后放入提取罐中，加5 10倍量的親水性溶劑，加熱回流廣3次，過濾、合并提取液，濃縮，得羅布麻葉提取液，備用；(2)取步驟⑴得到的羅布麻葉提取液加入乙醇使乙醇的濃度達到759Γ85%，靜置、沉淀，濾出溶液，濃縮，得羅布麻葉提取液的醇沉液待用；(3)取步驟(2)得到的羅布麻葉醇沉液上大孔樹脂柱，先分別用水和濃度為10%乙醇洗脫，再用濃度為509Γ70%的乙醇洗脫，薄層色譜檢識、收集509Γ70%乙醇洗脫液、濃縮，得到羅布麻葉中金絲桃苷的粗提物，備用；(4)取步驟(3)得到的金絲桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，濃縮得到萃取物，然后加入親水性溶劑，加熱回流提取3飛次，每次廣2小時，趁熱過濾，濾液減壓濃縮，4°C冷藏結晶，以親水性溶劑洗滌，干燥，即得純度為909Γ96%的金絲桃苷。以上所述的，步驟(1)和步驟(4)所述加熱回流提取的溫度為8(T85°C，此操作步驟在加熱回流提取過程中以8(T85°C持續回流2小時，可以確保黃酮苷類化合物金絲桃苷提取較完全的同時不會破壞金絲桃苷的活性結構，本分明經成分結構研究和藥理活性表明在iio°c左右高溫下金絲桃苷的結構會發生變化，如由原來的黃酮苷變成查兒酮苷，從而活性降低，因此本專利技術在提取和純化金絲桃苷時就嚴格控制提取的溫度可以保證金絲桃苷結構的穩定性。且步驟⑴和步驟⑷所述的親水性溶劑為甲醇或濃度 (Γιοο%的乙醇。作為優選方案，步驟(2)中金絲桃苷提取液加入高濃度的乙醇后金絲桃苷提取液中乙醇的濃度為80%，此步驟操作的目的是為了除去金絲桃苷提取液中的大分子化合物如鞣質、多糖等成分，便于后面的純化工藝，可以大大提高純化效率。以上所述的制備方法，作為優選方案，步驟(3)中所述的大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂，作為更優的方案，所述的非極性大孔吸附樹脂采用D101、AB-8或HPD100型大孔吸附樹脂，本專利技術通過正交實驗篩選不同極性不同型號的大孔樹脂、不同濃度(10%、 20%、40%、50%、60%、70%、80%)的乙醇洗脫劑，以金絲桃苷的含量為指標，實驗結果表明以非極性大孔吸附樹脂D101、AB-8或HPD100型大孔吸附樹脂除雜效果比較好，且實驗結果表明濃度為10%的乙醇可以洗脫大部分極性稍大的雜質，但是對金絲桃苷成分的洗脫能力弱， 而濃度為509Γ70%的乙醇對金絲桃苷的洗脫能力最好，基本可以洗脫吸附的所有金絲桃苷成分，但是隨著乙醇濃度的增加，雖然能夠洗脫出金絲桃苷，但是同時也會把一些其它雜質如葉綠素一起洗脫下來，使金絲桃苷的純度降低，因此本專利技術經正交實驗篩選結果確定出最佳的吸附材料為DlOl、ΑΒ-8或HPD100型大孔吸附樹脂和洗脫劑為濃度為50% 70%的乙醇；且步驟(3)先用純水沖洗大孔樹脂可以洗脫掉大部分極性大的水溶性雜質，有利于后續的純化。本專利技術在用509Γ70%乙醇洗脫黃酮類成分時以薄層色譜作為檢識手段，所用的薄層板為聚酰胺薄層板，展開劑由體積比為6 :4的乙酸乙酯和丙酮組成，顯色劑為10%三氯化鋁，并在365nm紫外燈下檢視，合并含有金絲桃苷成分的流份，去除其它成分的流份，因此分離的目的性強。以上所述的制備方法，作為優選方案，步驟(4)在用乙酸乙酯或正丁醇萃取前先用鹽酸調節金絲桃苷粗提物溶液的PH值到3，金絲桃苷化合物為多酚羥基黃酮苷類化合物，本專利技術經過不同PH值的篩選，當用酸調金絲桃苷粗提物溶液的pH值到3可以有針對性的使帶4個酚羥基的金絲桃苷沉降聚集，然后再用溶劑進行有目的萃取，使金絲桃苷快速高效的轉溶于萃取溶劑，可以提高萃取效率3倍多，但是酸性又不能太強，因為酸性太強， 金絲桃苷黃酮苷類化合物的苷鍵容易水解變成苷元和半乳糖，因此，本專利技術通過大量實驗篩選并結合薄層色譜和高效液相色譜檢測，確定最佳的PH值為3，在該pH值條件下，既可促使金絲桃苷聚集沉降從而快速轉溶于萃取溶劑，且金絲桃苷的苷鍵不會水解。以上所述的制備方法，本專利技術考察不同溶劑對金絲桃苷黃酮苷類成分萃取能力， 篩選結果表明金絲桃苷類成分在乙酸乙酯或正丁醇中的溶解度較大，因此作為優選方案， 取步驟(4)得到的金絲桃苷粗提物后再用乙酸乙酯或正丁醇萃取，可以有效的把金絲桃苷粗提物中金絲桃苷黃酮苷類化合物萃取出來，從而和其它雜質相分離，進一步提高金絲桃苷的純度。以上所述的，作為優選方案，乙酸乙酯或正丁醇萃取濃縮得到萃取物，然后加入乙醇或甲醇，8(T85°C加熱回流提取3飛次，每次廣2小時， 趁熱過濾，濾液減壓濃縮，4°C冷藏結晶，以乙醇或甲醇洗滌，干燥，即可得純度為909Γ96% 的金絲桃苷。本專利技術在乙酸乙酯或正丁醇萃取物的基礎上根據金絲桃苷的結構和化學性質，再采用乙醇或甲醇在8(T85°C合適溫度下回流提取3飛次可以進一步將金絲桃苷充分提取出來，然后再在優選的4°C下冷卻，金絲桃苷可以很好的析晶，從而可以非常有效的將性質相近的金絲桃苷和異槲皮苷兩種黃酮苷成分分開，從而可以得到純度909Γ96%的金絲桃苷。本專利技術提供的另一種，其特征在于包括以下步驟(1)取羅布麻葉藥材揀選、洗凈、干燥后放入提取罐中，加5 10倍量的親水性溶劑，加熱回流廣3次，過濾、合并提取液，濃縮，得羅布麻葉提取液，備用；(2)取步驟⑴得到的羅布麻葉提取液加入乙醇使乙醇的濃度達到759Γ85%，靜置、沉淀，濾出溶液，濃縮，得羅布麻葉提取液的醇沉液待用；(3)取步驟(2)得到的羅布麻葉醇沉液上大孔樹脂柱，先分別用水和濃度為10%乙醇洗脫，再用濃度為509Γ70%的乙醇洗脫，薄層色譜檢識、收集509Γ70%乙醇洗脫液、濃縮，得到羅布麻葉中金絲桃苷的粗提物，備用；(4)取步驟(3)得到的金絲桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，濃縮得到萃取物，然后加入親水性溶劑，加熱回流提本文檔來自技高網...

【技術保護點】
１．羅布麻葉中金絲桃苷的制備方法，其特征在于包括以下步驟：　（１）取羅布麻葉藥材揀選、洗凈、干燥后放入提取罐中，加５～１０倍量的親水性溶劑，加熱回流１～３次，過濾、合并提取液，濃縮，得羅布麻葉提取液，備用；（２）取步驟（１）得到的羅布麻葉提取液加入乙醇使乙醇的濃度達到７５％～８５％，靜置、沉淀，濾出溶液，濃縮，得羅布麻葉提取液的醇沉液待用；（３）取步驟（２）得到的羅布麻葉醇沉液上大孔樹脂柱，先分別用水和濃度為１０％乙醇洗脫，再用濃度為５０％～７０％的乙醇洗脫，薄層色譜檢識、收集５０％～７０％乙醇洗脫液、濃縮，得到羅布麻葉中金絲桃苷的粗提物，備用；（４）取步驟（３）得到的金絲桃苷粗提物用乙酸乙酯或正丁醇萃取，得萃取液，濃縮得到萃取物，然后加入親水性溶劑，加熱回流提取３～５次，每次１～２小時，趁熱過濾，濾液減壓濃縮，４℃冷藏結晶，以親水性溶劑洗滌，干燥，即得純度為９０％～９６％的金絲桃苷。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉志輝，陳武，賈媛，夏建龍，錢芳，陸超，
申請(專利權)人：江蘇省中醫院，
類型：發明
國別省市：84