本發(fā)明專利技術(shù)公開一種室內(nèi)檢測雜交玉米種子純度的方法。通過配制電極緩沖液、樣品提取液、分離膠緩沖液、分離膠溶液、濃縮膠緩沖液、濃縮膠溶液和3％的過氧化氫、染色液試劑，制備選用雜交玉米種子的樣品和過凝膠制備，通過采用電泳、卸板、染色、洗板，計算電泳測定值，保存膠板，計算出雜交玉米的純度值。本發(fā)明專利技術(shù)取分離膠和濃縮膠緩沖液定容的步驟，簡化膠溶液配制程序，緩沖液不定容，待溶解完藥品后將溶液一次性定容，這樣配出來的濃縮膠溶液和分離膠溶液用于試驗絲毫不會影響譜帶的清晰性和完整性，而且配溶液過程減少了兩個定容環(huán)節(jié)，更易操作，具有廣泛的應(yīng)用價值。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及玉米種子檢測的
具體的說，本專利技術(shù)涉及一種室內(nèi)檢測雜交玉米種子純度的
技術(shù)介紹
利用玉米鹽溶蛋白電泳法測定雜交玉米種子純度的方法已經(jīng)在全國各地得到廣泛應(yīng)用，取得了較好的經(jīng)濟和社會效應(yīng)，但是，目前普遍存在的試驗過程比較繁瑣，對于初學(xué)者來說難以快速掌握并得出清晰的譜帶的技術(shù)缺陷。在現(xiàn)有技術(shù)提供的標(biāo)準(zhǔn)的試驗方法里，濃縮膠和分離膠緩沖液需要在調(diào)好PH值后先定容，再用定容好的緩沖液來溶解丙烯酰胺等藥品，然后再定容。在實際操作中試驗人員很容易忘記給兩種緩沖液定容，經(jīng)常會直接拿未定容的緩沖液來溶解藥品，結(jié)果就是前功盡棄，從頭再來。如何簡化或進一步研究一種快速簡易適用于實驗室檢測雜交玉米種子純度的方法具有廣泛的實用性和重要性。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有技術(shù)目前普遍存在的試驗過程比較繁瑣，對于初學(xué)者來說難以快速掌握并得出清晰的譜帶的技術(shù)缺陷，本專利技術(shù)旨在，該方法在傳統(tǒng)試驗方法的基礎(chǔ)上加以簡化，顯著提高試驗效率，比常規(guī)的試驗操作時間節(jié)約2-3 小時，操作實用簡易，實用特性突顯。本專利技術(shù)的技術(shù)方案通過配制電極緩沖液、樣品提取液、分離膠緩沖液、分離膠溶液、濃縮膠緩沖液、濃縮膠溶液和催化劑溶液、染色液試劑，制備選用雜交玉米種子的樣品和凝膠制備，通過采用電泳、卸板、染色、洗板，計算電泳測定值，保存膠板，計算出雜交玉米的純度值。本專利技術(shù)采用一個分離膠和濃縮膠溶液配制的簡便又不影響試驗效果的方法，即取分離膠和濃縮膠緩沖液定容的步驟，簡化膠溶液配制程序，緩沖液不定容，待溶解完藥品后將溶液一次性定容，這樣配出來的濃縮膠溶液和分離膠溶液用于試驗絲毫不會影響譜帶的清晰性和完整性，而且配溶液過程減少了兩個定容環(huán)節(jié)，更易操作。具體的，本專利技術(shù)提供，具體步驟如下1.按照常規(guī)配制方法，制備電極緩沖液、樣品提取液、催化劑、染色液溶液備用。2.分離膠溶液取1. 43ml乳酸鈉于IOOOml燒杯中，加去離子水900ml，用乳酸調(diào)至PH3. 0，備用，取消常用的定容步驟；稱取丙烯酰胺112. 5g，甲叉雙丙烯酰胺3. 75g，抗壞血酸0. 25g，硫酸亞鐵8. Omg，用分離膠緩沖液溶解，定容至1000ml，過濾于棕色瓶中，放入 4°C冰箱保存。3.濃縮膠溶液取0. 30乳酸鈉于200ml燒杯中，加去離子水90ml，用乳酸調(diào)至 PH5. 2，備用，取消常用的定容步驟；稱取丙烯酰胺6. OOg,甲叉雙丙烯酰胺1. 00g，抗壞血酸 0. 03g，硫酸亞鐵0. 8mg，用濃縮膠緩沖液溶解，定容至100ml，貯于棕色瓶中，放入4°C冰箱保存。4.從送驗樣品中隨機數(shù)取玉米種子100粒，用單籽粒粉碎器逐粒粉碎，放入1. 5ml離心管中，按體積比1 1.2的量用滴管加入樣品提取液，搖勻，放置5min后再搖一次，靜置30min后備用，取消了常用的樣品提取液的離心步驟。5.凝膠的制備裝槽、封底的操作采用常用的方法；灌分離膠采用底縫封住后，吸去因凝膠而析出的水，量取分離膠溶液，加入過氧化氫或過硫酸銨溶液，迅速搖勻；傾斜電泳槽，將分離膠溶液倒入兩玻璃板之間，高度距短玻璃板上沿1. 2cm，放平電泳槽并在試驗臺上振動后靜置于桌面lOmin，取消了常用正丁醇鎮(zhèn)壓分離膠液面的步驟。灌濃縮膠量取濃縮膠溶液，加入過氧化氫或過硫酸銨溶液，迅速搖勻，倒入兩玻璃板之間，馬上插好樣品梳，樣品梳底部距分離膠頂部0. 5cm。6.點樣、電泳、卸板、染色的操作采用常用的方法。通過實施本專利技術(shù)具體的
技術(shù)實現(xiàn)思路
，可以達到以下技術(shù)效果1.本專利技術(shù)提供了室內(nèi)檢測雜交玉米種子純度的簡易方法。在常用的試驗方法里， 濃縮膠和分離膠緩沖液需要在調(diào)好PH值后先定容，再用定容好的緩沖液來溶解丙烯酰胺等藥品，然后再定容。在實際操作中試驗人員很容易忘記給兩種緩沖液定容，經(jīng)常會直接拿未定容的緩沖液來溶解藥品，結(jié)果就是前功盡棄，從頭再來。采用本專利技術(shù)，緩沖液不定容，待溶解完藥品后將溶液一次性定容，這樣配出來的濃縮膠溶液和分離膠溶液用于試驗絲毫不會影響譜帶的清晰性和完整性，而且配溶液過程減少了兩個定容環(huán)節(jié)，更易操作，減少試驗時間30min。2.本專利技術(shù)取消常規(guī)方法中樣品蛋白提取液的離心程序。在現(xiàn)有常用的試驗方法里，粉碎后的籽粒在加入樣品提取液提取30-40分鐘后需要再放入離心機離心5分鐘后靜置，然后提取上清液電泳。以一份樣品來說，100粒種子離心需要的時間至少是1個小時。 如果取消離心，將提取液靜置5-10分鐘后上下?lián)u勻，再靜置20-30分鐘，取上清液電泳，譜帶也十分清晰，不影響實驗效果。3.本專利技術(shù)取消常規(guī)方法中用正丁醇鎮(zhèn)壓分離膠液面的步驟。在本專利技術(shù)中，往膠室中灌好分離膠后立即在桌面上振動幾下電泳槽，膠面就可以非常平整，即使略微不平也不會影響電泳后的譜帶整齊度，且減少試驗時間30min。如果按常規(guī)操作方法，分離膠灌好后再用正丁醇鎮(zhèn)壓液面，再用去離子水清洗2-3次，不僅過程復(fù)雜，正丁醇還會揮發(fā)出對人體有害的氣味，且用去離子水清洗時容易損傷膠面。附圖說明圖1所示為室內(nèi)檢測雜交玉米種子純度的工藝流程圖。 具體實施例方式下面，舉實施例說明本專利技術(shù)，但是，本專利技術(shù)并不限于下述的實施例。本專利技術(shù)中涉及到的主要原輔材料和設(shè)備有主要原輔材料雜交玉米種子都可以通過市場購買獲得。主要試劑丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、乳酸、乳酸鈉、甘氨酸、抗壞血酸、硫酸亞鐵、氯化鈉、蔗糖、甲基綠、三氯乙酸、過氧化氫(或過硫酸銨)、考馬斯亮藍R250、無水乙醇、 丙三醇等，所用試劑均為分析純，所用水均為去離子水。主要儀器電泳儀(500V士5V連續(xù)可調(diào)、0_400mA連續(xù)可調(diào)、額定輸出功率200W)、 電泳槽(垂直板夾心式)、單籽粒粉碎器、天平(感量0. 01g、0. 001g、0. OOOlg)各一臺)、 酸度計、磁力攪拌器、電冰箱、電爐、離心管(1.5ml)、離心管架、移液管(10ml、5ml、2ml各兩支)、微量進樣器(5-100 μ 1)、恒溫箱、觀片燈等。本專利技術(shù)中選用的所有原輔材料、試劑和儀器都為本領(lǐng)域熟知的，其他本領(lǐng)域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本專利技術(shù)以下實施方式的實施。實施例一室內(nèi)檢測雜交玉米種子純度的方法(一)試劑配制按照常規(guī)配制方法，制備電極緩沖液、樣品提取液、催化劑、染色液備用。(二)樣品制備從送驗樣品中隨機數(shù)取玉米種子100粒。用單籽粒粉碎器逐粒粉碎，放入1. 5ml 離心管中，按體積比約1 1.2的量用滴管加入樣品提取液，搖勻，放置5min后再搖一次， 靜置30min后備用。(三)凝膠制備1.將預(yù)先洗凈晾干的玻璃板裝入膠條中，并將膠條固定在垂直板電泳槽內(nèi)，保持水平，短板向正極，擰緊螺栓，備用。2.封底縫根據(jù)電泳槽的大小，取適量分離膠溶液于燒杯中，用微量進樣器加入適量3%的過氧化氫或過硫酸銨溶液，一般每15ml分離膠液加20 μ 13%的過氧化氫溶液， 迅速搖勻并從長玻璃板外側(cè)沿玻璃板倒入，放入電泳槽振動幾下，約5min后膠液凝固，封住底縫。3.灌分離膠底縫封住后，用濾紙條插入兩玻璃板之間，吸去因凝膠而析出的水， 量取分離膠溶液適量，加入3%的過氧化氫或過硫酸銨溶液，一般每15ml膠液加20 μ 13% 的過氧化氫溶液，迅速搖勻；傾斜電泳槽，將分離膠溶液倒入兩玻璃板之間，高度距短玻璃板上沿1. 2cm，放平電泳槽并在試驗臺上振動幾下后本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：文江蓉，
申請(專利權(quán))人：新疆康地種業(yè)科技股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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