多重樣品中的甾族化合物的質(zhì)譜法制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及通過(guò)質(zhì)譜法對(duì)甾族化合物的定量測(cè)量。在具體方面，本發(fā)明專利技術(shù)涉及通過(guò)質(zhì)譜法對(duì)來(lái)自多個(gè)樣品的甾族化合物的定量測(cè)量方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】多重樣品中的甾族化合物的質(zhì)譜法專利
本專利技術(shù)涉及通過(guò)質(zhì)譜法的甾族化合物的定量測(cè)量。在具體方面，本專利技術(shù)涉及通過(guò)質(zhì)譜法的多個(gè)樣品的甾族化合物的定量測(cè)量的方法。專利技術(shù)背景甾族化合物是任何為數(shù)眾多的天然存在的或合成的脂溶性有機(jī)化合物，該化合物具有作為基礎(chǔ)的以四個(gè)環(huán)排列的17個(gè)碳原子，并包括甾醇和膽汁酸、腎上腺和性激素、某些天然藥物如洋地黃化合物以及某些維生素和相關(guān)的化合物(如維生素D、維生素D類似物和維生素D代謝物)。許多甾族化合物是生物學(xué)上重要的。例如，維生素D是在鈣(Ca2+)穩(wěn)態(tài)的正調(diào)節(jié)中具有重要生理作用的必需營(yíng)養(yǎng)素。維生素D可通過(guò)暴露于日光而在皮膚中從頭形成或它可從飲食吸收。存在兩種形式維生素D：維生素D2(麥角鈣化醇)和維生素D3(膽鈣化醇)。維生素D3是由動(dòng)物從頭合成的形式。它還是加入到在美國(guó)生產(chǎn)的乳制品和某些食品中的常見(jiàn)補(bǔ)充物。飲食和內(nèi)在合成的維生素D3必須經(jīng)歷代謝激活以產(chǎn)生生物活性的代謝物。在人類中，維生素D3激活的最初步驟主要發(fā)生在肝中并包括羥基化作用以形成中間體代謝物25-羥基膽鈣化醇(骨化二醇；25OHD3)。骨化二醇是循環(huán)中維生素D3的主要形式。然后循環(huán)的25OHD3由腎轉(zhuǎn)化，形成1,25-二羥基維生素D3(骨化三醇；1,25(OH)2D3)，其通常被認(rèn)為是具有最高生物活性的維生素D3的代謝物。維生素D2來(lái)自真菌和植物來(lái)源。許多非處方膳食補(bǔ)充物（dietarysupplements）含有麥角鈣化醇(維生素D2)而不是膽鈣化醇(維生素D3)。麥角骨化醇（Drisdol）——在美國(guó)可獲得的唯一的維生素D的高效處方形式——是用麥角鈣化醇配制的。維生素D2在人類中經(jīng)歷與維生素D3相似的代謝激活途徑，形成代謝物25OHD2和1,25(OH)2D2。維生素D2和維生素D3已長(zhǎng)期被假定在人類中在生物學(xué)上相等，然而最近的報(bào)道提出這兩種形式的維生素D在生物活性和生物利用率上可存在差異(Armaset.al.,(2004)J.Clin.Endocrinol.Metab.89:5387-5391)。維生素D——無(wú)活性維生素D先驅(qū)體——的測(cè)量在臨床情況中不常發(fā)生。相反，25-羥基維生素D3、25-羥基維生素D2和總25-羥基維生素D(“25OHD”)的血清水平是維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況和某些維生素D類似物的效力的有用指示物。25OHD的測(cè)量通常用于鈣代謝病癥的診斷和處理。在這方面，低水平25OHD指示與疾病如低鈣血癥、低磷血癥、繼發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)癥、升高的堿性磷酸酶、成人中骨軟化癥和兒童中佝僂病有關(guān)的維生素D缺乏。在疑似維生素D中毒的患者中，升高水平的25OHD使該病癥區(qū)別于引起高鈣血癥的其它病癥。1,25(OH)2D的測(cè)量還用于臨床情況。某些疾病狀態(tài)可通過(guò)循環(huán)水平的1,25(OH)2D反映，例如腎疾病和腎功能衰竭常常導(dǎo)致低水平的1,25(OH)2D。升高水平的1,25(OH)2D可指示過(guò)量的甲狀旁腺素或可指示某些疾病如結(jié)節(jié)病或某些類型的淋巴瘤。維生素D代謝物的檢測(cè)已通過(guò)用對(duì)25OHD2和25OHD3共同特異的抗體的放射免疫測(cè)定完成。因?yàn)槟壳暗幕诿庖邔W(xué)的測(cè)定不分別分辨25OHD2和25OHD3，所以不求助于其它試驗(yàn)，維生素D的任何營(yíng)養(yǎng)缺乏的來(lái)源不能被確定。已發(fā)表了公開(kāi)利用質(zhì)譜法檢測(cè)特定維生素D代謝物的方法的報(bào)道。在一些報(bào)道中，維生素D代謝物在質(zhì)譜法之前被衍生，但是在其它的報(bào)道中，它們不是這樣。例如Holmquist,etal.2007年12月28日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/946765；YeungB,etal.,JChromatogr.1993,645(1):115-23；HigashiT,etal.,Steroids.2000,65(5):281-94；HigashiT,etal.,BiolPharmBull.2001,24(7):738-43；HigashiT,etal.,JPharmBiomedAnal.2002,29(5):947-55；HigashiT,etal.,Anal.BioanalChem,2008,391:229-38；和Aronov,etal.,AnalBioanalChem,2008,391:1917-30公開(kāi)通過(guò)在質(zhì)譜法之前衍生代謝物而檢測(cè)各種維生素D代謝物的方法。檢測(cè)未衍生的維生素D代謝物的方法在Clarke,etal.,2005年4月6日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)11/101,166和2006年3月21日提交的11/386,215中，和Singh,etal.,2004年10月24日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)系列號(hào)10/977,121中被報(bào)道。還已公開(kāi)了報(bào)道，其公開(kāi)用Cookson型試劑，特別是4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)和4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氫喹喔啉基(dihydroquinoxalyl))乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQ-TAD)進(jìn)行的維生素D3的衍生。參見(jiàn)Aberhart,J,etal.,J.Org.Chem.1976,41(12):2098-2102和Kamao,M,etal.,JChromatogr.B2007,859:192-200。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)提供用單個(gè)質(zhì)譜測(cè)定來(lái)測(cè)定多個(gè)試驗(yàn)樣品中每個(gè)試驗(yàn)樣品的甾族化合物的量的方法。該方法包括不同地處理每個(gè)試驗(yàn)樣品以形成多個(gè)處理的樣品，其中由于處理，每個(gè)處理的樣品中的甾族化合物可通過(guò)質(zhì)譜法區(qū)別于其它處理的樣品中的甾族化合物；合并處理的樣品以形成多重樣品；使多重樣品在適于產(chǎn)生一種或多種通過(guò)質(zhì)譜法可檢測(cè)的離子的條件下經(jīng)歷電離源，其中一種或多種從來(lái)自每個(gè)處理的樣品的甾族化合物產(chǎn)生的離子不同于一種或多種從來(lái)自其它處理的樣品的甾族化合物產(chǎn)生的離子；通過(guò)質(zhì)譜法檢測(cè)一種或多種來(lái)自每個(gè)處理的樣品的甾族化合物的離子的量；和使一種或多種來(lái)自每個(gè)處理的樣品的甾族化合物的離子的量與每個(gè)試驗(yàn)樣品中甾族化合物的量相關(guān)聯(lián)。在一些實(shí)施方式中，處理試驗(yàn)樣品包括使每個(gè)試驗(yàn)樣品在適于產(chǎn)生衍生的甾族化合物的條件下經(jīng)歷不同的衍生劑。在一些實(shí)施方式中，一個(gè)試驗(yàn)樣品可被處理，無(wú)需使該樣品經(jīng)受衍生劑。在一些實(shí)施方式中，在多個(gè)試驗(yàn)樣品的處理中使用的不同的衍生劑是各自的同位素變體。在一些實(shí)施方式中，不同的衍生劑是Cookson型衍生劑；如選自4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)、4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氫喹喔啉基)乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQTAD)、4-(4-硝基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(NPTAD)、4-二茂鐵基甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(FMTAD)和其同位素變體的Cookson型衍生劑。在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方式中，Cookson型衍生劑是4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)的同位素變體。在一個(gè)具體實(shí)施方式中，多個(gè)樣品包括兩個(gè)樣品，第一Cookson型衍生試劑是4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)，第二Cookson型衍生試劑是13C6-4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(13C6-PTAD)。在一些實(shí)施方式中，甾族化合物是維生素D或維生素D相關(guān)的本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】2009.12.11 US 61/285,9411.用單個(gè)質(zhì)譜測(cè)定來(lái)測(cè)定多個(gè)試驗(yàn)樣品的每個(gè)試驗(yàn)樣品中的甾族化合物的量的方法，其中在處理之前所述甾族化合物在每個(gè)試驗(yàn)樣品中是相同的，所述方法包括：不同地處理多個(gè)試驗(yàn)樣品以形成多個(gè)處理的樣品，其中所述處理包括使每個(gè)試驗(yàn)樣品在適于產(chǎn)生Cookson型衍生的甾族化合物的條件下經(jīng)歷不同的Cookson型衍生劑，所述Cookson型衍生劑選自4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)、4-甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(MTAD)、4-[2-(6,7-二甲氧基-4-甲基-3-氧代-3,4-二氫喹喔啉基)乙基]-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(DMEQTAD)、4-(4-硝基苯基)-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(NPTAD)、和4-二茂鐵基甲基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(FMTAD)，并且其中由于所述處理，每個(gè)處理的樣品中的所述甾族化合物通過(guò)質(zhì)譜法可區(qū)別于其它處理的樣品中的所述甾族化合物；合并所述處理的樣品以形成多重樣品；使所述多重樣品在適于產(chǎn)生一種或多種通過(guò)質(zhì)譜法可檢測(cè)的離子的條件下經(jīng)歷電離源，其中一種或多種從來(lái)自每個(gè)處理的樣品的所述甾族化合物產(chǎn)生的離子不同于一種或多種從來(lái)自其它處理的樣品的所述甾族化合物產(chǎn)生的離子；通過(guò)質(zhì)譜法檢測(cè)一種或多種來(lái)自每個(gè)處理的樣品的所述甾族化合物的離子的量；和使一種或多種來(lái)自每個(gè)處理的樣品的所述甾族化合物的離子的量與每個(gè)試驗(yàn)樣品中所述甾族化合物的量相關(guān)聯(lián)。2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述多個(gè)處理的樣品包括一個(gè)具有未衍生的甾族化合物的處理的樣品。3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述甾族化合物是維生素D或維生素D相關(guān)化合物。4.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述甾族化合物選自維生素D2、維生素D3、25-羥基維生素D2(25OHD2)、25-羥基維生素D3(25OHD3)、1α,25-二羥基維生素D2(1α,25OHD2)和1α,25-二羥基維生素D3(1α,25OHD3)。5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述甾族化合物是25-羥基維生素D2(25OHD2)或25-羥基維生素D3(25OHD3)。6.權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括在經(jīng)歷電離源之前將所述多重樣品經(jīng)歷萃取柱和分析柱。7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述萃取柱是固相萃取(SPE)柱。8.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述萃取柱是湍流液相色譜(TFLC)柱。9.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述分析柱是高效液相色譜(HPLC)柱。10.權(quán)利要求1所述的方法，其中質(zhì)譜法是串聯(lián)質(zhì)譜法。11.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述串聯(lián)質(zhì)譜法作為多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)、先驅(qū)離子掃描或產(chǎn)物離子掃描而進(jìn)行。12.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述萃取柱、分析柱和所述電離源以聯(lián)機(jī)方式連接。13.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述電離源包括激光二極管熱解吸(LDTD)。14.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述電離源包括電霧化電離源(ESI)或大氣壓化學(xué)電離源(APCI)。15.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述試驗(yàn)樣品包括生物樣品。16.權(quán)利要求15所述的方法，其中所述試驗(yàn)樣品包括血漿或血清。17.用單個(gè)質(zhì)譜測(cè)定來(lái)測(cè)定多個(gè)試驗(yàn)樣品的每個(gè)試驗(yàn)樣品中的兩種或多種甾族化合物的量的方法，所述方法包括：不同地處理多個(gè)試驗(yàn)樣品以形...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：B·霍爾奎斯特，N·J·克拉克，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：奎斯特診斷投資公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：