本發明專利技術公開了一種多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，是通過以下制備方法制備得到的：取55～95重量份的磷脂，3～40重量份的膽固醇，與0.05～20重量份的多烯紫杉醇混合，溶于乙醇中，真空旋蒸，加入0.5～1.5ml磷酸鹽緩沖液水合得到脂質體，然后應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面，即得多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其平均粒徑在60～100nm，界面電勢在-10～20mV。細胞毒性研究結果顯示，轉鐵蛋白受體靶向的脂質體與非靶向脂質體相比，可明顯提高多烯紫杉醇對KB細胞的毒性。本發明專利技術的多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向的脂質體將來有望成為癌癥治療的新型藥物制劑。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑。
技術介紹
多烯紫杉醇(Docetaxel)是ー種用于治療卵巣、乳房、結腸、頭、頸和非小細胞肺癌很有效的應用于臨床的化學療法藥物。當前的產品，泰素帝含有吐溫-80/こ醇溶劑來提高多烯紫杉醇的水溶性。然而，過敏性和一些與以吐溫-80為基底的制劑有關的副作用可能會在臨床應用中發生。脂質體和利用納米技術負載多烯紫杉醇的納米粒子已經在減少以吐溫-80為基底的媒介的毒性方面日漸成熟。人的轉鐵蛋白(Tf，分子量80kDa)是帶有非血紅素鐵并 對轉鐵蛋白受體有高親和力的糖蛋白，在腫瘤細胞上頻繁地高表達并且通過以轉鐵蛋白受體為媒介的內吞細胞進行內化作用。所以，轉鐵蛋白被認為是ー種有前景的配合基，并已經作為腫瘤細胞靶向治療藥物的標記物和造影剤介導而被廣泛研究。脂質體(Liposomes)由天然的和合成的可生物降解、生物相客、無毒、無免疫排斥的磷脂質和膽固醇制備。一些脂質體產品已經用于臨床實踐和臨床前實驗。作為ー種靶向轉鐵蛋白受體的配體，轉鐵蛋白可結合于脂質體粒子的表面，從而產生受體介導的靶向治療作用。
技術實現思路
針對上述現有技術，本專利技術提供了一種多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制齊U，及其制備方法。本專利技術是通過以下技術方案實現的—種多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，是通過以下制備方法制備得到的取55 95重量份的磷脂，3 40重量份的膽固醇，與O. 05 20重量份的多烯紫杉醇混合，溶于こ醇中，真空旋蒸(除去こ醇)，加入O. 5 I. 5ml磷酸鹽緩沖液(pH 7. 4)水合得到脂質體，然后應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面，即得多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其平均粒徑在60 lOOnm，界面電勢在-10 20mVo所述應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面的具體步驟如下將轉鐵蛋白硫醇鹽化,在羥こ基哌嗪こ硫磺酸緩沖鹽(HBS，pH8. O)中加入Trauf s試劑到轉鐵蛋白中(Mft:MTf = 10:1)，充分反應后得混合物，將此含有轉鐵蛋白亞巰基(Tf-SH)的混合物通過ro-ΙΟ柱并用HBS緩沖液(pH 6. 5)沖洗除去未反應的Traut’s試劑，然后添加ニ硬脂酰磷脂酰膽堿-N-馬來酰亞胺聚こニ醇2000 (MAL-PEG-DSPE)水溶液(MTf_SH :Mm_PEe_DSPE=10:l)，充分反應后，收集含巰基的轉鐵蛋白部分(常規方法收集)，然后與載有多烯紫杉醇的脂質體Uif :m|旨=5:95)混合，在37°C下保溫一小吋，即得。所述磷脂選自天然磷脂、合成磷脂中的任ー種或兩種以上。所選天然磷脂選自氫化大豆卵磷脂、卵磷脂或大豆磷脂。所選合成磷脂類選自聚こニ醇-ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺、合成ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿或合成磷脂酰絲氨酸。優選的，所述磷脂是由以下組分組成的氫化大豆卵磷脂、卵磷脂和聚こニ醇- ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺。所述多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑的制備方法，同上。多烯紫杉醇水溶性差，現有的注射劑采用吐溫80和こ醇溶液作為混合溶媒，應用 時常引發嚴重的過敏反應，不利于臨床用藥，因而研發具有良好溶解性能的多烯紫杉醇藥物輸送系統一直是研究的熱點。多烯紫杉醇是高親脂性的藥物，容易被包裹或分散于脂質雙分子層中，且其包封率高達96%。因此，本專利技術研究的是具有高藥物包封率和穩定性的多烯紫杉醇的ー種新型的靶向于轉鐵蛋白受體的脂質體制劑。該轉鐵蛋白受體靶向的脂質體相比于非靶向脂質體，顯示了更強的細胞攝取作用及動物體內更長的循環時間。本專利技術的脂質體制劑在4°C條件下儲藏超過六個月顯示出良好的穩定性。細胞毒性研究結果顯示，轉鐵蛋白受體靶向的脂質體與非靶向脂質體相比，可明顯提高多烯紫杉醇對KB細胞的毒性。本專利技術的多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向的脂質體將來有望成為癌癥治療的新型藥物制劑。附圖說明圖I :在RPMI1640培養液(10%胎牛血清)中37°C下，多烯紫杉醇分別從轉鐵蛋白受體靶向脂質體(三角形)與非靶向脂質體(方形)中的釋放曲線。圖2 :靜脈注射多烯紫杉醇后血漿濃度對時間的曲線圖。小鼠給予多烯紫杉醇15mg/kg，三條曲線分別代表在吐溫-80/こ醇中的多烯紫杉醇(方形)，非靶向脂質體(三角形)或者靶向轉鐵蛋白受體脂質體(菱形)。具體實施例方式下面結合實施例對本專利技術作進ー步的說明。實施例I :制備多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑步驟如下稱取氫化大豆卵磷脂13. 56mg、卵磷脂35. 34mg、膽固醇35. 45mg、聚こニ醇-ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺5. 3mg,與多烯紫杉醇(5. 67mg)混合旋蒸，加入磷酸鹽緩沖液(pH 7. 4，下同)水合得多室脂質體，用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于載有多烯紫杉醇的脂質體表面，凍干，即得。所述應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面的具體步驟如下(以下實施例皆同)將轉鐵蛋白硫醇鹽化，在羥こ基哌嗪こ硫磺酸緩沖鹽(HBS，pH8. O)中加入Traut，s試劑到轉鐵蛋白中(MTr:MTf=10:1)，充分反應后得混合物，將此含有轉鐵蛋白亞巰基(Tf-SH)的混合物通過ro-ΙΟ柱并用HBS緩沖液(pH 6. 5)沖洗除去未反應的Traut’ s試劑，然后添加ニ硬脂酰磷脂酰膽堿-N-馬來酰亞胺聚こニ醇 2000 (MAL-PEG-DSPE)水溶液(購自 Avanti Polar Lipids 聯合公司(Alabaster. AL))(MTf_SH :Mm_PEe_DSPE=10:l)，充分反應后，收集含巰基的轉鐵蛋白部分(常規方法收集)，然后與載有多烯紫杉醇的脂質體Uif :m|旨=5:95)混合，在37°C下保溫一小吋，即得。實施例2 :制備多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑步驟如下稱取氫化大豆磷脂14. 66mg、大豆磷脂46. 75mg、膽固醇55. 34mg、合成磷脂酰絲氨酸5. 4mg,與多烯紫杉醇(5. 64mg)混合旋蒸，加入磷酸鹽緩沖液水合得多室脂質體，用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于載有多烯紫杉醇的脂質體表面，凍干，即得。實施例3 :制備多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑步驟如下稱取氫化大豆卵磷脂50. 44mg、卵磷脂70. 45mg、膽固醇70. 89mg、合成ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿5. 44mg,與多烯紫杉醇(10. 55mg)混合旋蒸，加入磷酸鹽緩沖液水合得多室脂質體，用后嵌入技術將轉鐵蛋白配配體連接于載有多烯紫杉醇的脂質體表面，凍干，即得。實施例4 :制備多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑步驟如下稱取氫化大豆卵磷脂25. 43mg、卵磷脂34. 67mg、膽固醇34. 50mg、聚こ ニ醇-ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺5. 67mg,與多烯紫杉醇(2. 54mg)混合旋蒸，加入磷酸鹽緩沖液水合得多室脂質體，用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于載有多烯紫杉醇的脂質體表面，凍干，即得。實施例5 :制備多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑步驟如下稱取氫化大豆卵磷脂12. 56mg、卵磷脂17. 75mg、膽固醇17. 67mg、聚乙ニ醇-ニ硬脂酰磷脂酰こ醇胺2. 45mg,與多烯紫杉醇(3. 46mg)混合旋蒸，加入磷酸鹽緩沖液水本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其特征在于：是通過以下制備方法制備得到的：取55～95重量份的磷脂，3～40重量份的膽固醇，與0.05～20重量份的多烯紫杉醇混合，溶于乙醇中，真空旋蒸，加入0.5～1.5ml磷酸鹽緩沖液水合得到脂質體，然后應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面，即得多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑；所述應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面的具體步驟如下：將轉鐵蛋白硫醇鹽化，在羥乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖鹽中加入Traut’s試劑到轉鐵蛋白中，充分反應后得混合物，將此含有轉鐵蛋白亞巰基的混合物通過PD？10柱并用HBS緩沖液沖洗除去未反應的Traut’s試劑，然后添加二硬脂酰磷脂酰膽堿？N？馬來酰亞胺聚乙二醇2000水溶液，充分反應后，收集含巰基的轉鐵蛋白部分，然后與載有多烯紫杉醇的脂質體混合，m轉：m脂=5:95，在37℃下保溫一小時，即得。
【技術特征摘要】
1.一種多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其特征在于是通過以下制備方法制備得到的 取55 95重量份的磷脂，3 40重量份的膽固醇，與O. 05 20重量份的多烯紫杉醇混合，溶于乙醇中，真空旋蒸，加入O. 5 I. 5ml磷酸鹽緩沖液水合得到脂質體，然后應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面，即得多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑； 所述應用后嵌入技術將轉鐵蛋白配體連接于包含多烯紫杉醇的脂質體表面的具體步驟如下將轉鐵蛋白硫醇鹽化，在輕乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖鹽中加入Traut’ s試劑到轉鐵蛋白中，充分反應后得混合物，將此含有轉鐵蛋白亞巰基的混合物通過PD-10柱并用HBS緩沖液沖洗除去未反應的Traut’ s試劑，然后添加二硬脂酰磷脂酰膽堿-N-馬來酰亞胺聚乙二醇2000水溶液，充分反應后，收集含巰基的轉鐵蛋白部分，然后與載有多烯紫杉醇的脂 質體混合，m轉m脂=5:95,在37°C下保溫一小時，即得。2.根據權利要求I所述的多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其特征在于所述磷脂選自天然磷脂、合成磷脂中的任一種或兩種以上；所選天然磷脂選自氫化大豆卵磷脂、卵磷脂或大豆磷脂；所選合成磷脂類選自聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、合成二棕櫚酰磷脂酰膽堿或合成磷脂酰絲氨酸。3.根據權利要求I所述的多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其特征在于所述磷脂是由以下組分組成的氫化大豆卵磷脂、卵磷脂和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。4.根據權利要求I所述的多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其特征在于所述在輕乙基哌嗪乙硫磺酸緩沖鹽中加入Traut’ s試劑到轉鐵蛋白中時，Mft MTf=10:l。5.根據權利要求I所述的多烯紫杉醇轉鐵蛋白受體靶向脂質體制劑，其特征在于所述添加二硬脂酰磷脂酰膽堿-N-馬來酰亞胺聚乙二醇2000水溶液時，MTf_SH:Mial-PEG-DSPE-IO · I。6.一種多烯...
【專利技術屬性】
技術研發人員：翟光喜，張海群，竇金鳳，
申請(專利權)人：山東大學，
類型：發明
國別省市：
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