磺胺類藥物ELISA檢測試劑盒制造技術

本實用新型專利技術涉及一種磺胺類藥物ELISA檢測試劑盒。該試劑盒包括盒體和盒內的一塊96孔的酶標板、一張蓋板膜、14瓶試劑和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋、一份說明書和一份質檢報告，其特征在于：酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔條上預包被磺胺類藥物偶聯抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶標準品溶液、酶標二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液，下凹瓶位共15個。試劑盒具有操作簡便、費用低廉、靈敏度高等特點，適用于動物組織、蜂蜜、牛奶、尿液中磺胺類藥物的殘留檢測。（*該技術在2022年保護過期，可自由使用*）

【技術實現步驟摘要】

本技術涉及一種檢測磺胺類藥物殘留量的試 劑盒，特別是檢測動物組織、蜂蜜、牛奶、尿液中磺胺類藥物殘留量的酶聯免疫檢測(ELISA)試劑盒，ELISA(Enzyme LinkedImmunosorbnent Assay)是酶聯免疫吸附劑測定的簡稱,它是繼免疫突光和放射免疫技術之后發展起來的一種酶免技術。
技術介紹
磺胺類藥物(Sulfonamides, SAs)是一類具有對氨基苯磺酰胺結構、用于預防和治療細菌感染性疾病的化學治療藥物。因具有廣譜、穩定、經濟、易用以及聯合抗菌增效劑效果可提高數十倍的特點，常以亞治療濃度的藥物做為飼料添加劑來預防疾病的發生，提高飼料的轉化率和促進動物生長，其中常用的SAs就有十幾種。但該類藥物存在嚴重副作用，人體中長期存在會導致許多細菌對磺胺類藥物產生耐藥性，且有潛在的致癌性，因此已引起了國內外的高度重視。我國以及美國、歐盟等國家規定了動物性食品中總磺胺以及單個磺胺的最高殘留限量(MRLs)為O. lmg/kg，其中磺胺二甲基嘧啶(SM2)的MRLs為O. 025 μ g/ml ο目前，磺胺類藥物殘留的檢測方法主要有微生物學法、理化分析方法和免疫法等。微生物學法簡便、費用低，但操作費時且敏感性、特異性都較差，在定性定量上都存在困難，不能滿足現代殘留檢測的需要，甚至有些檢測結果還達不到最高殘留限量的要求；理化法常作為確證方法用于測定動物組織中的藥物殘留，如氣相色譜(GC)、高效液相色譜(HPLC)、氣-質聯用(GC-MS)、液-質聯用(HPLC-MS)等，這些方法靈敏、準確，特異性強、分離度好，可以同時測定多種藥物，但需要昂貴的儀器、樣品的前處理復雜、繁瑣費時、檢測的成本較高，不能現場操作，而且需專業人員操作，所以限制了其應用；與之相比，酶聯免疫方法具有特異性好、靈敏度高、操作簡便、檢測成本低、適合于批量樣品的篩選檢測等優點而且所需設備少，操作簡單易學，成本低廉，能夠更好地滿足我國畜禽養殖戶、屠宰場、食品企業、政府職能監管部門等開展檢測工作。
技術實現思路
本技術所要解決的問題是提供一種小巧輕便的磺胺類藥物殘留量檢測試劑盒，其操作簡便，檢測快速、準確、靈敏度高，成本低，穩定性好，需要的技術含量不高，可進行一次連續多個樣品中磺胺類藥物殘留量的測定，減少了檢測樣本所需要的時間。本技術可以檢測7種磺胺類藥物。本技術的技術方案是一種磺胺類藥物ELISA檢測試劑盒，包括盒體和盒內的一塊96孔的酶標板、一張蓋板膜、14瓶試劑和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋、一份說明書和一份質檢報告，其特征在于酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔條上預包被磺胺類藥物偶聯抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶標準品溶液、酶標二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液，下凹瓶位共15個。酶標板由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標反應微孔條組成，每個可拆裝的酶標反應微孔條有8個反應孔，放入真空鋁箔袋中，盒體為硬紙盒，下凹瓶位由塑料泡沫制成，以塑料硬膜為蓋板膜，蓋板膜大小與酶標板橫切面大小一致，將14瓶試劑用不同大小、不同顏色的塑料瓶盛裝并固定在下凹瓶位中，與酶標板、蓋板膜、自封袋、說明書、質控報告一同封裝在硬紙盒內，以便于攜帶和運輸。14瓶試劑分別為7瓶Iml梯度濃度的標準品溶液、7ml酶標二抗、7ml抗體工作液、7ml顯色液A液、7ml顯色液B液、7ml終止液、40ml濃縮洗滌液、50ml濃縮復溶液。每一個試劑盒中的試劑足夠進行96次測定(包括標準分析孔)，既可進行一次連續多個樣品的檢測，也可以將板孔拆開多次檢測。將剩下的放回鋁箔袋中用自封袋密封，這樣可以保證試劑盒檢測結果的準確性。檢測時，樣本中的殘留物(磺胺嘧啶)將和酶標板微孔條上預包被的磺胺類藥物偶聯抗原競爭抗磺胺類藥物抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與所含殘留物(磺胺嘧啶)的含量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中磺胺嘧啶的殘留量，再根據磺胺嘧啶的殘留量，利用交叉反應率計算樣本中含有的其他磺胺類藥物的殘留量，其操作簡便易行。·經實驗表明本試劑盒具有很高的靈敏度動物組織樣本的最低檢測限為O. 5 μ g/kg ;蜂蜜樣本的最低檢測限為O. 5 μ g/kg ;牛奶樣本的最低檢測限為5 μ g/L ;尿液樣本的最低檢測限為2 μ g/L。動物組織樣本的回收率為75%土 10% ;蜂蜜樣本的回收率為90%土 10% ；牛奶樣本的回收率為85%±15% ;尿液樣本的回收率為95%±15%。同磺胺嘧啶的交叉反應率為100%、同磺胺間甲氧嘧啶的交叉反應率為97. 6%、同磺胺甲基異噁唑的交叉反應率為169. 0%、同磺胺噻唑的交叉反應率為188. 0%、同酞酰磺噻唑的交叉反應率為62. 8%、同磺胺甲噻二唑的交叉反應率為103%、同磺胺吡啶的交叉反應率為51. 9%、同磺胺二甲基嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺甲基嘧啶的交叉反應率均小于1%。相對于其他磺胺類藥物檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，只需要酶標儀、均質器、氮氣吹干裝置、渦旋儀、離心機、振蕩器和微量加樣器等，同類實驗室一般均有配備，所需成本較低。本技術的有益效果是能快速、簡便、靈敏、準確地用于動物組織、蜂蜜、牛奶、尿液中磺胺類藥物殘留量的檢測。附圖說明圖I為本技術酶標板的側面縱剖面圖(長為8. 55cm)；圖2為本技術酶標板的側面橫剖面圖(長為12. 8cm)；圖3為本技術酶標板的俯視圖；圖4為本技術蓋板膜平面圖；圖5為本技術試劑瓶縱剖面平面圖；圖6為本技術固定泡沫模具的俯視圖；圖7為本技術盒體與固定泡沫模具的側視圖。參見附圖酶標反應微孔條(2)預包被磺胺類藥物偶聯抗原(3)固定于酶標板的外框支撐架(I)上，酶標反應微孔條(2)可隨要求拆卸；蓋板膜(4)用于酶標板置水浴或恒溫箱內反應時封蓋酶標反應微孔條(2)，蓋板膜大小與酶標板橫切面大小一致；透明帽的半透明PE塑料試劑瓶(5)用于封裝40ml濃縮洗滌液；藍色帽的半透明PE塑料試劑瓶(5)用于封裝50ml濃縮復溶液；白色帽(6)的白色PE塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml顯色液A液，紅色帽(6)的黑色PE塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml顯色液B液，黃色帽(6)的白色PE塑料試劑瓶(7)用于封裝7ml終止液，紅色帽的白色PE塑料試劑瓶(8)用于封裝7ml酶標二抗，綠色帽的白色PE塑料試劑瓶(8)用于封裝7ml抗體工作液，白色帽的白色PE塑料試劑瓶(9)用于封裝Iml/瓶的標準品溶液；泡沫塑料模具(10)有15個下凹瓶位，放置位置依次為40ml濃縮洗滌液瓶位(18)，50ml濃縮復溶液瓶位(11 )，7ml顯色液A液瓶位(14)，7ml顯色液B液瓶位(13)，7ml終止液瓶位(12)，7ml抗體工作液瓶位(16)，7ml酶標二抗瓶位(15)，7個Iml/瓶各種濃度的標準品溶液瓶位(17)，盒體為(19)是硬紙盒。具體實施方式一、樣本的前處理I、配液配液I : Imo I/L鹽酸溶液量取41. 5ml濃鹽酸加入去離子水中定容至500ml。配液2 lmol/L氫氧化鈉溶液稱取20. Og氫氧化鈉加500ml去離子本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種磺胺類藥物ELISA檢測試劑盒，包括盒體和盒內的一塊96孔的酶標板、一張蓋板膜、14瓶試劑和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋、一份說明書和一份質檢報告，其特征在于：酶標板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔條上預包被磺胺類藥物偶聯抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶標準品溶液、酶標二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液，下凹瓶位共15個。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：馮才偉，陶光燦，馮靜，趙正苗，汪善良，湯慶彩，邢維維，蒲小容，
申請(專利權)人：北京勤邦生物技術有限公司，
類型：實用新型
國別省市：